Formulación para combinación de HGH y rhIGF-1.

Una composición farmacéutica que comprende IGF-1 y GH y

* un agente antiagregante;

* un tampón;

* un tensioactivo no iónico;

* un conservante; y

* un modificador de la tonicidad o un agente de carga

en la que

el agente antiagregante es arginina presente en la composición en una concentración que oscila de 80 mM a 200 mM,

el tampón se selecciona de histidina o citrato a una concentración que oscila de 1 a 50 mM, y

el modificador de la tonicidad es cloruro sódico a una concentración de 0 a 150 mM.

Formulación para combinación de HGH y rhlGF-1

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas. Más en particular, la invención se refiere a formulaciones de composiciones de combinación de la hormona del crecimiento (GFI) y del factor de crecimiento similar a insulina (IGF-1). Estas composiciones de combinación proporcionan composiciones farmacéuticas líquidas estables sin la formación de agregados insolubles visibles a un pH deseable.

La presente invención proporciona además una formulación para el factor de crecimiento similar a insulina 1 (IGF-1) y la hormona del crecimiento (GFI), en la que las proteínas se pueden formular juntas en una forma inyectable, o se pueden formular por separado y mezclarlas en una forma inyectable dosificable unitaria antes de la administración.

La hormona del crecimiento similar a insulina pertenece a la familia de polipéptidos conocidos como somatomedinas, y es un polipéptido que se da de manera natural en los fluidos corporales humanos. La mayoría de los tejidos, y especialmente el hígado, producen IGF-1 junto con proteínas de unión de IGF específicas. IGF-1 estimula el crecimiento y la división de una diversidad de tipos celulares, en particular durante el desarrollo, y de ese modo ciertos procesos, tales como el crecimiento esquelético y la replicación celular, se ven afectados por el nivel de IGF- 1. Estas moléculas están bajo el control de la hormona del crecimiento (GH).

IGF-1 es la hormona proteica principal que media en el efecto estimulador del crecimiento de GFI sobre el hueso. IGF-1 se produce en respuesta a GFI, y después induce respuestas celulares posteriores, que incluyen las respuestas celulares en el hueso. IGF-1 está compuesto de 7 aminoácidos en una única cadena con tres puentes disulfuro intramoleculares. IGF-1 tiene un peso molecular de 7649 daltons, y se produce principalmente en el hígado como una hormona endocrina, así como en los tejidos objetivo de una manera paracrina/autocrina. IGF-1 se ha fabricado de manera recombinante (rhlGF-1) a gran escala mediante el uso de levadura y E. coli.

La hormona del crecimiento o la hormona del crecimiento humana (hGFI) es un polipéptido de una única cadena que consiste en 191 aminoácidos. Los enlaces disulfuro unen las posiciones 53 y 165 y 182 y 189. La GFI humana es un agente anabólico potente. Entre sus efectos más notables en los sujetos con insuficiencia hipofisaria (deficientes de GFI) está el crecimiento lineal acelerado del cartílago de crecimiento óseo, lo que da como resultado una talla incrementada.

El efecto ventajoso y sinérgico de la combinación de ambas proteínas se describe en la solicitud de patente internacional W9118621. La coadministración de IGF-1 y GFI aun mamífero da lugar al crecimiento incrementado respecto del crecimiento alcanzado mediante el uso de IGF-1 o GFI solamente. El aumento es igual a la suma del crecimiento observado cuando se administra IGF-1 y el crecimiento observado cuando se administra GFI.

Los métodos y las composiciones para incrementar el ritmo de crecimiento se describen también en la solicitud de patente internacional WO 26/13769. El estudio se refirió básicamente a un método de tratamiento, y los resultados se centraron en la reacción del paciente. Se describen composiciones farmacéuticas, y en particular una mezcla de IGF-1 y GFI formulada en manitol, glicina y/o fosfato a pFH 7,4. Si la mezcla se debe almacenar, se formula en un tampón tal como citrato a un pFH de alrededor de 6, con un tensioactivo que incrementa la solubilidad de GFI a este pFH, tal como polisorbato 2 o poloxámero 188. También describe la posibilidad de añadir una sal inorgánica y un estabilizante. No se usa ningún agente antiagregante en las formulaciones descritas en el documento WO 26/13769.

Un problema que se da con frecuencia cuando se combinan dos proteínas en una disolución es la formación de complejos mediante interacciones proteína-proteína. Tal formación de complejos se ve influenciada en particular por los cambios en la concentración, la temperatura, el pFH y el tampón de las disoluciones que contienen proteínas. Los complejos de proteínas pueden formar después agregados insolubles que provocan la pérdida de potencia y actividad de las proteínas.

Además, en las formulaciones farmacéuticas, la dosis de la proteína terapéutica es importante, y se debe mantener dentro de intervalos controlados a lo largo de un periodo de tiempo prolongado. A menudo es necesario el uso de agentes solubilizantes para obtener y mantener la concentración correcta de la proteína en disolución, y en particular para solubilizar cantidades elevadas de proteínas. La patente de EE UU. 6.767.892 describió composiciones farmacéuticas de IGF-1 y análogos del mismo que contenían compuestos solubilizantes tales como arginina, N-acetil arginina o hidrocloruro de guanidina IGF-1. Las composiciones se ensayaron, se proporcionaron datos comparativos con una solubilidad incrementada de IGF-1 a un pFI mayor de 5, y a temperaturas refrigeradas. Sin embargo, este documento no describe composiciones que comprendan IGF-1 combinado con otras proteínas terapéuticas.

Un objetivo de la invención es preparar formulaciones líquidas que contienen IGF-1 y hormona del crecimiento (GFI), que son estables a 4 °C durante al menos 3 días, sin una agregación significativa tal como se demuestra mediante la claridad visual de la disolución. Un proceso para la preparación de una formulación líquida que contiene IGF-1 y GH es un objetivo adicional de la invención.

Descripción de las figuras:

Figura 1: muestra los perfiles superpuestos de las velocidades de sedimentación obtenidos mediante

ultracentrifugación analítica de una disolución de IGF-1, disoluciones de GFI, y una mezcla 1:1 de las dos disoluciones. El primer grupo de perfiles (Figura 1) se obtuvo con las proteínas formuladas en un tampón citrato 25 mM a pH 6, y muestra pruebas de una asociación sustancial entre las proteínas.

Figura 2: muestra los perfiles de sedimentación de disoluciones que incluyen ión argininio 1 mM (arginina).

Los perfiles muestran que la presencia de arginina produce cambios indicativos de una cantidad reducida de agregados de pesos moleculares elevados en las disoluciones.

Las siguientes definiciones se exponen para ilustrar y definir el significado y el alcance de las diversas expresiones usadas para describir la invención en la presente memoria.

Según la presente invención, la expresión "agente antiagregante" se refiere a los compuestos que impiden o reducen la formación de agregados proteicos insolubles cuando se disuelven proteínas.

El término "IGF-1" se refiere al factor de crecimiento similar a insulina 1 de cualquier especie que incluye, pero sin limitación, las especies bovina, ovina, porcina, aviar y preferiblemente humana en una secuencia nativa o en forma de variante y de cualquier fuente, ya sea natural, sintética o recombinante.

Preferiblemente, IGF-1 se produce de manera recombinante como se describe, p.ej., en el documento US 6.331.414. Más preferiblemente, IGF-1 es el ingrediente farmacéutico activo del producto puesto a la venta comercialmente como INCRELEX

El término "rhlGF-1" se refiere a la IGF-1 humana recombinante.

El término "GH" se refiere a la hormona del crecimiento de cualquier especie que incluye, pero sin limitación, las especies bovina, ovina, porcina, aviar y preferiblemente humana en una secuencia nativa o en forma de variante y de cualquier fuente, ya sea natural, sintética o recombinante.

Las expresiones "hormona del crecimiento humana" y "hGFI" se refieren a la hormona del crecimiento humana producida mediante métodos que incluyen la extracción de una fuente natural y la purificación, y mediante sistemas de cultivo celular recombinante, por ejemplo como se describe en la publicación científica "Direct expression in Escherichia coli of a DNA sequence coding for human growth hormone" Goeddel et al, Nature, Vol. 281, octubre de 1979. La secuencia de hGFI se expone, por ejemplo, en Flormone Drugs, Gueriguian et al., USP Convention, Rockville, MD (1982). Las expresiones también cubren los equivalentes biológicamente activos de la hormona humana, p.ej., que incluyen uno o más aminoácido(s) diferente(s) en la secuencia global. Además, las expresiones, tal como se usan en esta solicitud, pretenden cubrir las variantes de aminoácidos por sustitución, deleción e inserción de hGFI, es decir, los análogos y/o los homólogos de hGFI o hGFIs con modificaciones postraduccionales. A menudo se usan dos especies: la especie nativa de 191 aminoácidos (Somatropina) y la especie con metionina N- terminal de 192 aminoácidos, ambas obtenidas habitualmente... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende IGF-1 y GH y

un agente antiagregante;

un tampón;

un tensioactivo no iónico;

un conservante; y

un modificador de la tonicidad o un agente de carga en la que

el agente antiagregante es arginina presente en la composición en una concentración que oscila de 8 mM a 2 mM,

el tampón se selecciona de histidina o citrato a una concentración que oscila de 1 a 5 mM, y el modificador de la tonicidad es cloruro sódico a una concentración de a 15 mM.

2. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que el agente antiagregante es arginina a una concentración que oscila de 1 mM a 15 mM.

3. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el tampón está a una concentración que oscila de 1 a 2 mM.

4. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el tensioactivo es un tensioactivo no iónico seleccionado de un polisorbato (Tween) tal como polisorbato 8, polisorbato 2 o un poloxámero tal como poloxámero 188.

5. Una composición farmacéutica según la reivindicación 4, en la que el tensioactivo no iónico es polisorbato 2 a una concentración que oscila del ,1 al ,3 % (p/p), y preferiblemente es del ,2 % (p/p).

6. Una composición farmacéutica según la reivindicación 4, en la que el tensioactivo no iónico es poloxámero 188 a una concentración que oscila del ,1 al ,5% (p/p), y preferiblemente es del ,3%.

7. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el agente de carga es manitol y/o sacarosa.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 1, en la que el modificador de la tonicidad es cloruro sódico a una concentración que oscila de 1 a 5 mM.

9. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el conservante es alcohol bencílico o fenol.

1. Una composición farmacéutica según la reivindicación 8, en la que el conservante es alcohol bencílico a una concentración que oscila del ,2 al 2 % (p/p), preferiblemente 1 %.

11. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la proporción en peso de IGF-1:GH (p/p) oscila de 1:1 a 1:9 (p/p).

12. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1, en la que la proporción en peso de IGF-1:GH (p/p) oscila de 1:1 (p/p) a 7:1 (p/p), y tiene preferiblemente un valor de 1,1:1 (p/p), 2,2:1 (p/p), 3,3:1 (p/p) o 6,6:1 (p/p).

13. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el pH de la composición farmacéutica oscila de 5, a 6,5, preferiblemente 5,4 a 6,2, y más preferiblemente 5,8 a 6,2.

14. Una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 que es una formulación lista para su uso en una jeringa precargada o en un cartucho a usar en un dispositivo inyector.

15. Un proceso para la preparación de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, y dicho proceso comprende:

a) Preparar una disolución de hGH en un tampón a un pH entre 5 y 6,5 que comprende el agente antiagregante y el modificador de la tonicidad o el agente de carga;

b) Preparar una disolución de IGF-1 dializando una preparación de IGF-1 en el tampón usado en la etapa (a)

que comprende dicho agente antiagregante y dicho modificador de la tonicidad;

c) Añadir el tensioactivo y el conservante a ambas disoluciones de reserva; y

d) Mezclar las disoluciones de hGH e IGF-1.

16. Un proceso para la preparación de una composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, y dicho proceso comprende:

a) Preparar una disolución I mezclando el tampón, preferiblemente tampón histidina, el agente antiagregante, el tensioactivo, preferiblemente polisorbato 2, el conservante, preferiblemente alcohol bencílico, y opcionalmente ajustando el volumen con agua, y la disolución I tiene o se ajusta a un pH de 5,8;

b) Preparar una disolución de IGF-1, en el tampón y el agente antiagregante que se usan en la etapa (a), para obtener una disolución II;

c) Añadir la disolución II a la disolución I para obtener una disolución III;

d) Preparar una disolución IV mezclando el tampón, preferiblemente histidina, el agente antiagregante, el tensioactivo, preferiblemente polisorbato 2, el conservante, preferiblemente alcohol bencílico, y opcionalmente ajustando el volumen con agua, y la disolución IV tiene o se ajusta a un pH de 5,8;

e) Preparar una disolución de GH en el tampón y el agente antiagregante que se usan en la etapa (d), y la GH comprende opcionalmente un tampón de bicarbonato sódico, para obtener una disolución V;

f) Añadir la disolución V a la disolución IV para obtener una disolución VI;

g) Opcionalmente, filtrar independientemente las disoluciones III y VI;

h) Mezclar las disoluciones filtradas III y VI en una proporción de IGF-1:GH (p/p) entre 1:1 y 7:1 (p/p), preferiblemente 1,1:1 (p/p), 3,3:1 (p/p) y 6,6:1, para obtener una disolución Vil; y

i) Opcionalmente, filtrar la disolución Vil.

17. El proceso según la reivindicación 16, en el que se mezcla directamente una sustancia farmacológica de GH líquida con la disolución IV sin llevar a cabo la etapa (e).

18. El proceso según la reivindicación 16, en el que la sustancia farmacológica de GH comprende un tampón de bicarbonato sódico.

19. El proceso según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 17, en el que las etapas de filtración se llevan a cabo en filtros de PVDF (poli(fluoruro de vinilideno)).

2. El proceso según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en el que el agente antiagregante es arginina a una concentración que oscila de 1 mM a 15 mM.