Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.

Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.

La presente invención se refiere a un método de diagnóstico in vitro de esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero obtenidos de un sujeto,

donde una concentración de alfa-cetoglutarato superior o igual a 3 μM indica que el sujeto sufre de EHNA. Adicionalmente, la invención se refiere a un método de diagnóstico in vitro de esteatohepatitis no alcohólica, donde una concentración de alfa-cetoglutarato superior o igual a 20 μM en plasma o suero de un sujeto indica que el sujeto sufre esteatohepatitis no alcohólica. La invención también proporciona métodos para decidir o recomendar la administración de un tratamiento adecuado para la EHNA o esteatohepatitis no alcohólica, así como para establecer la respuesta de un sujeto al tratamiento para la EHNA o esteatohepatitis no alcohólica.

Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P201430325.

Solicitante: UNIVERSITAT ROVIRA I VIRGILI.

Nacionalidad solicitante: España.

Inventor/es: JOVEN MARIED,Jorge, RODRÍGUEZ GALLEGO,Esther, RAS MALLORQUÍ,María Rosa, MARINÉ FORTUNY,Silvia, MAIJÓ FERRÉ,Irene, FERNÁNDEZ ARROYO,Salvador.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • G01N33/50 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre, de orina; Investigación o análisis por métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Investigación o análisis inmunológico (procedimientos de medida, de investigación o análisis diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto; procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).

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Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.
Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.
Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.

Fragmento de la descripción:

Diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.

La presente invención está relacionada con el campo de la medicina y con el diagnóstico de la 5 esteatosis hepática no alcohólica.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) es la acumulación de grasa en el citoplasma de 10 los hepatocitos. Por definición, se presenta en sujetos que no beben alcohol y se considera la expresión en el hígado del síndrome metabólico.

El síndrome metabólico comprende una serie de alteraciones entre las que destaca la obesidad. Otros posibles componentes del síndrome metabólico son la resistencia a la insulina, 15 hipertensión, dislipemia o diabetes mellitus tipo 2.

La prevalencia de la EHNA no es bien conocida y probablemente está infravalorada. Una gran parte de los pacientes permanecen asintomáticos o presentan alteraciones biológicas discretas. No hay marcadores serológicos precisos y se requiere biopsia hepática para el 20 diagnóstico definitivo. La prevalencia de EHNA en occidente se sitúa entre el 20 y el 30% de la población, aumenta en los sujetos con obesidad mórbida (75-92%) , y está aumentando rápidamente en la población pediátrica (aproximadamente 13-14%) .

La EHNA ya no se considera una condición benigna, sino que es un factor a tener en cuenta en 25 la comorbilidad de pacientes con obesidad mórbida. Además, se ha demostrado que la forma progresiva de la EHNA, la esteatohepatitis, puede a su vez progresar a fibrosis, cirrosis e incluso a hepatocarcinoma, por lo que se requiere un adecuado diagnóstico de EHNA y esteatohepatitis antes de se produzca esta evolución.

El diagnóstico de EHNA, sin embargo, no es sencillo, ya que la mayoría de los pacientes con EHNA son asintomáticos, y en ellos el diagnóstico comienza al detectarse alguna otra manifestación del síndrome metabólico. Al final, el diagnóstico de certeza de la EHNA y su progresión se realiza mediante biopsia hepática, que es un procedimiento invasivo, incómodo y de elevado coste para el sistema sanitario. 35

Debido a la dificultad y a la falta de consenso a la hora de realizar una biopsia en pacientes sospechosos de padecer EHNA, se está investigando la aplicación de diversos métodos no invasivos. Sin embargo, hasta el momento ninguno ha demostrado una buena definición diagnóstica. 40

Por lo tanto existe la necesidad de proporcionar métodos no invasivos y de fácil aplicación en la práctica clínica para el diagnóstico de EHNA.

EXPLICACIÓN DE LA INVENCIÓN 45

Los inventores han encontrado que el alfa-cetoglutarato constituye un biomarcador plasmático (o sérico) con elevada eficiencia clínica en el diagnóstico de la EHNA. Han desarrollado un método de diagnóstico in vitro de EHNA que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero. La concentración de alfa-cetoglutarato aumenta 50 significativamente en los pacientes con respecto a controles sanos (que no sufren EHNA) .

En particular, los inventores han encontrado que la concentración de alfa-cetoglutarato en el

plasma de sujetos que padecen EHNA es superior a 3 µM. Por lo tanto, un primer aspecto de la invención proporciona un método de diagnóstico in vitro de EHNA que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero obtenidos de un sujeto, donde una concentración de alfa-cetoglutarato superior o igual a 3 µM indica que el sujeto sufre de EHNA. Otro aspecto de la invención se refiere al uso del alfa-cetoglutarato 5 como marcador de diagnóstico de EHNA y el uso de una concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero superior o igual a 3 µM como marcador de EHNA.

Sin querer quedar vinculados por la teoría, los inventores proponen que la acumulación de lípidos en los hepatocitos disminuye la producción de energía producida mediante beta-10 oxidación, reduce la función hepática y altera el metabolismo de glucosa. Resultados obtenidos por los inventores mediante un análisis metabolómico del plasma de sujetos con diferente grado de EHNA indican que estas alteraciones resultan en diferencias relativas en la concentración de algunos metabolitos, entre los cuales destaca el alfa-cetoglutarato (resultados no mostrados) . Los inventores han encontrado que la concentración de este metabolito en la 15 sangre de los sujetos tiene una buena asociación con la esteatosis hepática y que, por lo tanto, constituye un buen biomarcador para esta enfermedad. Así, otro aspecto de la invención proporciona el uso del alfa-cetoglutarato como marcador en el diagnóstico de EHNA.

La utilidad clínica del método desarrollado por los inventores es buena. El método proporciona 20 una elevada sensibilidad y especificidad (ver FIG 3) y supera con creces la utilidad clínica de otros métodos de diagnóstico sérico conocidos en el estado de la técnica, como por ejemplo métodos de diagnóstico de EHNA basados en la determinación de alanina aminotransferasa (ALT) , gamma glutamil transpeptidasa (GGT) , aspartato aminotransferasa (AST) y lactato deshidrogenasa (LDH) (ver tablas 2, 3 y 4) . Además, otra ventaja del método de la invención es 25 que permite determinar la progresión de la enfermedad, ya que se ha encontrado que concentraciones crecientes de alfa-cetoglutarato en plasma son indicativas de EHNA en etapas más avanzadas (FIG 2) .

El alto valor predictivo del método de la invención permite diagnosticar la EHNA con la 30 suficiente precisión como para prescindir de la comprobación mediante biopsia hepática. Dado que el método de la invención se puede llevar a cabo en una muestra de plasma o suero obtenida del paciente y no requiere de biopsia, el diagnóstico mediante este método redunda en mayor comodidad y ausencia de riesgos para el paciente, menor complejidad del diagnóstico y ahorro de tiempo y costes para el paciente y/o el sistema sanitario. 35

Los inventores también han encontrado que concentraciones muy elevadas, superiores a los 20 µM, en el plasma de los sujetos pueden indicar que la enfermedad de estos sujetos ha evolucionado a esteatohepatitis y, por tanto, requieren un tratamiento inmediato y/o más agresivo. 40

La invención también proporciona, por lo tanto, el uso del alfa-cetoglutarato como marcador para el diagnóstico de esteatohepatitis, así como un método de diagnóstico in vitro de esteatohepatitis que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero obtenidos de un sujeto, donde una concentración de alfa-45 cetoglutarato superior o igual a 20 µM indica que el sujeto sufre esteatohepatitis. La invención también proporciona el uso de una concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero igual o superior a 20 µM como marcador para el diagnóstico de esteatohepatitis.

Los inventores también han encontrado que la concentración plasmática o sérica de alfa-50 cetoglutarato diferencia con gran precisión sujetos obesos de no obesos. Los individuos delgados tienen una concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero por debajo de 1, 5

µM, mientras que individuos obesos tienen una concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero por encima de 1, 5 µM.

El método de diagnóstico proporcionado por la invención permite al profesional médico recomendar la administración de un tratamiento adecuado a cada paciente. 5

Por tanto otro aspecto de la invención proporciona un método para decidir o recomendar la administración de un tratamiento adecuado para la esteatosis hepática no alcohólica que comprende determinar in vitro la concentración de alfa-cetoglutarato en la sangre o el suero obtenido de un sujeto, donde si la concentración de alfa-cetoglutarato es igual o superior a 3 10 µM se recomienda el inicio del tratamiento y si la concentración de alfa-cetoglutarato es inferior a 3 µM se recomienda un seguimiento clínico.

Otro aspecto de la invención proporciona un método para decidir o recomendar la administración de un tratamiento adecuado para la esteatohepatitis no alcohólica que 15 comprende determinar in vitro la concentración de alfa-cetoglutarato en la sangre o el suero obtenido de un sujeto, donde si la concentración de alfa-cetoglutarato es igual o superior a 20 µM se recomienda el inicio de un tratamiento específico para esteatohepatitis. En una realización preferente el profesional médico recomiendo el inicio de un tratamiento específico inmediato. 20

Los inventores también han encontrado que llevar a cabo mediciones seriadas de la concentración de alfa-cetoglutarato en plasma o suero del mismo sujeto a lo largo del tiempo permite monitorizar la progresión de la EHNA y/o la respuesta al tratamiento... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Método de diagnóstico in vitro de esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero 5 obtenidos de un sujeto, donde una concentración de alfa-cetoglutarato superior o igual a 3 µM indica que el sujeto sufre de EHNA.

2. Método según la reivindicación 1, donde la concentración de alfa-cetoglutarato que indica que el sujeto sufre de EHNA es superior o igual a 4 µM. 10

3. Método según la reivindicación 2, donde la concentración de alfa-cetoglutarato que indica que el sujeto sufre de EHNA es superior o igual a 8 µM.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde concentraciones crecientes de 15 alfa-cetoglutarato indican mayor grado de EHNA en el sujeto.

5. Método según la reivindicación 4, donde una concentración de alfa-cetoglutarato comprendida de 3 µM a 9, 6 µM es indicativo de EHNA leve, una concentración de alfa-cetoglutarato comprendida de 9, 7 µM a 13, 9 µM es indicativo de EHNA moderada, y una 20 concentración de alfa-cetoglutarato superior a 14 µM es indicativo de EHNA grave.

6. Método de diagnóstico in vitro de esteatohepatitis no alcohólica que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero obtenidos de un sujeto, donde una concentración de alfa-cetoglutarato superior o igual a 20 µM indica que el 25 sujeto sufre esteatohepatitis no alcohólica.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde se determina un marcador adicional de diagnóstico de esteatosis hepática no alcohólica.

8. Método según la reivindicación 7, donde se determina al menos un marcador adicional seleccionado del grupo que comprende alanina aminotransferasa (ALT) , gamma glutamil transpeptidasa (GGT) , aspartato aminotransferasa (AST) y lactato deshidrogenasa (LDH) .

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde la concentración de alfa-35 cetoglutarato se determina mediante cromatografía asociada a espectrometría de masas.

10. Método según la reivindicación 9, donde la concentración de alfa-cetoglutarato se determina mediante cromatografía de gases y espectrometría de masas en combinación con tiempo de vuelo y en cuadrupolo. 40

11. Método para decidir o recomendar la administración de un tratamiento adecuado para la EHNA que comprende determinar in vitro la concentración de alfa-cetoglutarato en el plasma o el suero obtenido de un sujeto, donde si la concentración de alfa-cetoglutarato es igual o superior a 3 µM se recomienda el inicio del tratamiento y si la concentración de alfa-45 cetoglutarato es inferior a 3 µM se recomienda un seguimiento clínico.

12. Método según la reivindicación 11, donde si la concentración de alfa-cetoglutarato es igual o superior a 3 µM se recomienda el inicio de al menos un tratamiento seleccionado del grupo que consiste en la administración de metformina, la pérdida de peso y la cirugía bariátrica. 50

13. Método para decidir o recomendar la administración de un tratamiento adecuado para la esteatohepatitis no alcohólica que comprende determinar in vitro la concentración de alfa-

cetoglutarato en plasma o suero obtenido de un sujeto, donde si la concentración de alfa-cetoglutarato es igual o superior a 20 µM se recomienda el inicio de un tratamiento específico para esteatohepatitis.

14. Método in vitro para establecer la respuesta de un sujeto al tratamiento para la EHNA o 5 esteatohepatitis no alcohólica que comprende determinar la concentración de alfa-cetoglutarato en una muestra de plasma o de suero obtenidos del sujeto que está siendo sometido a dicho tratamiento y compararla con la concentración de alfa-cetoglutarato determinada en una muestra de plasma o de suero obtenidos del mismo sujeto antes de someterse al tratamiento o en una fase anterior del tratamiento, donde una concentración inferior a la determinada antes 10 de someterse al tratamiento o en una fase anterior del tratamiento es indicativo de una buena respuesta.

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el sujeto padece síndrome metabólico. 15

16. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1-14, donde el sujeto padece obesidad mórbida.

17. Uso del alfa-cetoglutarato como marcador en el diagnóstico de EHNA o esteatohepatitis no 20 alcohólica.

FIG 1.

d

a

c

b

FIG 2

B

A

C

FIG 3


 

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