CONTROL MICROBIOLÓGICO PARA RECUENTO DE MICROORGANISMOS Y AISLAMIENTO DE PATÓGENOS.

La invención trata de medios de cultivo e n p o l v o para microbiología,

con gelificantes en frío añadidos e impregnados mecánicamente en soportes de fibra para ser posteriormente esterilizados por irradiación, obteniéndose así, a partir de un medio deshidratado, un medio preparado, estéril y listo para su uso, con la ventaja de auto-absorber la muestra sin necesidad de calentar, fundir y enfriar agares, de manera que tras incubar adecuadamente se obtienen colonias de aspecto prácticamente idéntico al obtenido en placas preparadas convencionales de los medios estándar, presentando como dos de las características fundamentales de novedad el hecho de que la impregnación del medio en la fibra se realiza en seco, y que no se necesitan aplicadores para la correcta autodifusión de la muestra.

OBJETO DE LA INVENCiÓN

La presente invención se refiere a un control microbiológico para recuento de microorgan ismos y aislamiento de patógenos, y más concretamente a un nuevo método y formato en los medios de cultivo utilizados para poder conseguir un medio preparado estéril, listo para su uso.

El objeto de la invención es conseguir que el medio, deshidratado pero preparado, estéril y listo para uso, tenga la ventaja de auto-absorber la muestra (siembra en masa) sin necesidad de calentar, fundir ni enfriar agares, ni de emplear aplicadores, permitiendo obtener, tras una incubación adecuada, colonias de aspecto prácticamente idéntico al obtenido en placas preparadas convencionales de los medios estándar.

ANTECEDENTES DE LA INVENCiÓN

El control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, actualmente se realiza básicamente de tres formas o métodos 5 convencionales que corresponden a:

a) Mediante medios deshidratados no estériles que el usuario debe hidratar, esterilizar al autoclave, enfriar, dispensar en placas, tubos o frascos, y

posteriormente sembrar, o bien en masa a 45º C, o bien con asas, 10 membranas filtradas o escobillones, una vez sólido.

b) Mediante medios preparados en tubos o frascos estériles, que el usuario debe hervir, enfriar, dispensar en placas y sembrar en ellas, o bien en masa a 45º C, o bien con asas, membranas filtradas o escobillones una vez 15 sólido. Estos dos métodos referidos requieren un elevado periodo de tiempo para llevar a cabo el proceso (el primero varias horas y el segundo cerca de 1 hora) .

e) Mediante medios preparados en placa, que el usuario debe sembrar en 20 superficie con asas, membranas filtradas o escobillones, y que habitualmente solo son capaces de absorber entre 0, 1 Y 0, 33 mi de muestra (la absorción de un 1 mi tarda mucho y no es recomendada en normas ISO) .

El avance de la placa preparada es que sólo requiere minutos de trabajo,

pero tiene la limitación de no poder sembrar en masa, mezclando el mi de muestra con el medio, como requieren casi todos los métodos de recuento en placa (bacterias aerobias, entero bacterias, cOliformes, estafilococos, anaerobios, levaduras ...) : sólo sirve para sembrar en superficie con escobillones, asas o membranas. Además, el mantenimiento de la esterilidad

durante el transporte se ve muy comprometido y la caducidad muy 10 mermada, ya que frente a los 5 años del med io deshidratado, o frente a un año del tubo/frasco preparado, se reduce a solo 1-3 meses.

Por otro lado existen invenciones de las últimas décadas (como por ejemplo Petrifilm-USA, CompactDr y -Japón y productos similares de estos mismos 15 paises) que permiten la absorción en fria de 1 mi de muestra, de diversas maneras, lo que permite tener un medio preparado similar a la placa preparada, con una caducidad muy superior, aproximadamente de un año, aunque tiene inconvenientes ya que se requieren forzosamente aplicadores para difundir la muestra en el primer caso, y la aparición de colonias deformes en el segundo caso.

DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

El medio de cultivo para control microbiológico según la invención, viene a resolver

los problemas anteriormente referidos, dando incluso un paso adelante respecto de los métodos referidos en el último párrafo del apartado anterior,

de manera que según la invención, es posible conseguir la autodifusión de la muestra a analizar sin necesidad de aplicadores, así como obtener colonias prácticamente idénticas a las obtenidas con el método microbiológico convencional.

Más concretamente, según la invención, se parte de un medio deshidratado en polvo fino que incluye gelificantes que permiten la autodifusión tridimensional de la muestra en frío, sin necesidad de calentar y enfriar el medio, estando éste embebido en una lámina absorbente de una matriz fibrosa que reparte la muestra 15 a analizar, de manera que el conjunto de dichos tres componentes, denominado " disco nutriente" , va envasado en, por ejemplo, una bolsa autosellable de aluminio, o cualquier otro medio que protege esos discos nutrientes de la humedad y de la luz, agentes éstos que son los que más estropean todos los medios de cultivo.

Finalmente, el medio de cultivo referido es esterilizado, permitiendo al

usuario poder utilizarlo en el soporte que desee, preferentemente en placas Petri estériles de 55-60 mm de diámetro.

Los medios de cultivo empleados en la invención, serán a menudo agares cromogénicos para cada parámetro microbiológico: recuento y detección de bacterias aerobias, recuento y detección de hongos (levaduras y mohos) ,

recuento y detección de Enterobacterias, recuento y detección de E. coli y

demás coliformes, recuento y detección de Staphylococcus aureus, recuento y detección de Pseudomonas aeruginosa, recuento y detección de Burkholderia cepacia, recuento y detección de Listeria monocytogenes, recuento y detección de Bacillus cereus, detección de Salmonella spp., recuento y detección de Vibrio spp, recuento y detección de Candida albicans .. , que en este caso su agar

agar no interviene en la gelificación del medio, pero si ayuda a estabilizar,

tamponar y robustecer la mezcla, pudiéndose utilizar cualquier medio de cultivo deshidratado en polvo, sea cual sea su granulometría, siempre que incluya gelificantes en frío y se incluya en láminas de fibra absorbente.

En cuanto a los gelificantes utilizados, y que permiten la autodifusión tridimensional de la muestra en frío, podrá utilizarse cualquiera que absorba agua en frío, sea sintético o natural , añadido al medio de cultivo y embebido en seco en la lámina de fibra.

Por su parte, la lámina absorbente de matriz fibrosa, que se acaba de comentar en el párrafo anterior, ayuda al medio a absorber la muestra en frío, sin necesidad de calentar y enfriar el medio, todo ello sin necesidad de aplicadores,

repartiéndola de forma homogénea y prácticamente instantánea por capilaridad , siendo sus poros lo suficientemente amplios como para absorber y mantener el

medio de cultivo en polvo y para absorber la muestra, pero lo suficientemente finos como para que las colonias crezcan con aspectos prácticamente idénticos a las colonias crecidas en medios convencionales.

La polimerización del medio se consigue en las tres dimensiones gracias a la composición del gelificante en la matriz fibrosa, pudiéndose utilizar una lámina de fibra absorbente cualquiera , ya sea sintética o natural , sea cual sea su tamaño en cualquiera de sus tres dimensiones, sea cual sea el diámetro medio de su malla, su forma geométrica (circular, cuadrada, hexagonal, etc.) , siempre que embeba mecánicamente el medio de cultivo en polvo con gelificante en frío.

La esterilización en un medio cerrado se llevará a cabo preferentemente en bolsas autosellables de aluminio, que protegen de la humedad, de la luz y de la contaminación externa, aunque puede utilizarse cualquier medio para guardar/almacenar el cultivo propiamente dicho.

En cuanto a la esterilización, la misma se realizará mediante irradiación, aunque puede uti lizarse cualquier sistema o método conocido de esterilización .

En cuanto al soporte sobre el que el usuario puede utilizar, podrá ser también cualquiera siempre que dicho soporte sea hidrófugo y preferentemente transparente por ambas caras, para observar mejor las colonias por arriba y/o por

abajo, resultando óptima la utilización de una placa Petri por cada disco nutriente, para que el usuario no tenga que buscarse soportes.

Añadir que utilizando el disco nutriente estéril sobre un 1 mi de muestra, el peso del

mismo atrapa la muestra y sus microorganismos, autodifundiéndose instantáneamente sin necesidad de calentar ni enfriar y, tras la incubación tiempo/temperatura adecuados para el microorganismo buscado, aparecen aproximadamente tantas colonias como unidades formadoras de colonias vivifica bies había en la muestra. Y que algunos medios requieren la adición de la muestra sobre el disco, en vez de la adición del disco sobre la muestra.

La transparencia de la matriz fibrosa y los componentes cromogénicos del medio,

perm iten ver las colonias crecidas en todo el grosor del disco nutriente , tanto desde arriba como desde abajo.

A menudo la sinergia de los componentes permite acortar los tiempos de incubación, obteniendo resultados más rápidos que el método convencional; por

ejemplo permite recuentos estimativos en sólo 24 h para aerobios, Pseudomonas ...

que en el método tradicional requieren 2-3 días de incubación.... [Seguir leyendo]

1. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, utilizando medios de cultivo preparados de una u otra forma para conseguir un producto con medio deshidratado y estéril, que se comporta como medio preparado y listo para su uso, caracterizado porque incluye un medio deshidratado en polvo fino, que incluye gelificantes que permiten la autodifusión tridimensional de la muestra en frío; con la particularidad de que dicho medio de 10 cultivo está impregnado en una lámina absorbente de una matriz fibrosa que reparte la muestra a analizar; habiéndose previsto que el producto resultante de la combinación del medio deshidratado en polvo fino, los gelificantes y la lámina absorbente, es esterilizado por irradiación en ambiente cerrado herméticamente, permitiendo su colocación y utilización final sobre un soporte.

1.

2. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, según reivindicación 1, caracterizado porque el medio de cultivo deshidratado en polvo, es susceptible de tener cualquier granulometria.

2.

3. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, según reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el gelificante en frío es susceptible de ser sintético o natural, y siempre añadido al med io de cultivo y embebido en seco en la lámina de fibra.

.

4. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, según reivindicaciones anteriores, caracterizado porque la lámina absorbente de matriz fibrosa presenta unos poros suficientemente amplios para permitir absorber y mantener el medio de cultivo en polvo y para absorber la muestra y sus microorganismos, y lo suficientemente finos para que las colonias 10 crezcan con aspecto prácticamente idéntico a las colonias crecidas en med ios convencionales; habiéndose previsto que dicha lámina absorbente de matriz fibrosa es susceptible de ser sintética o natural, tener cualquier tamaño y diámetro medio de su malla, así como tener cualquier forma geométrica.

1.

5. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, según reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el soporte sobre el que el usuario puede emplear el medio de cultivo resultante es hidrófugo y

preferentemente transparente por ambas caras.

2.

6. Control microbiológico para recuento de microorganismos y aislamiento de patógenos, según reivindicación 5, caracterizado porque el soporte estará constituido preferentemente por una placa Petri o material similar.