Composiciones inmunomoduladoras y métodos de uso de las mismas.

Un kit de diagnóstico para medir niveles de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4,

y así determinar la sensibilidad de un sujeto que se ha expuesto a glucanos medioambientales, a una composición farmacéutica que comprende b-1,6-glucano, que comprende:

(i) una composición que comprende b-1,6-glucano que se corresponde con o es un fragmento de, o es altamente homólogo al glucano en la composición farmacéutica para la que está siendo determinada la sensibilidad; y

(ii) reactivos para detectar anticuerpos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 unidos al b-1,6-glucano de la etapa (i) en una muestra de sangre.

Composiciones inmunomoduladoras y métodos de uso de las mismas Antecedentes de la invención Las paredes celulares de los hongos provocan una poderosa respuesta inmunoestimulante, y se han propuesto para uso como posibles fármacos antiinfecciosos y antitumorales. Las células fúngicas también pueden activar células dendríticas y sensibilizar respuestas de linfocitos T específicas de antígeno limitadas a la clase II. La mayoría de la pared celular (50-60 %) de los hongos patógenos (Candida albicans) y no patógenos (Saccharomyces cerevisiae) está compuesta por una capa interna de ß-glucano (ß-1, 3-y ß-1, 6-glucano) ligado covalentemente a una variedad de manoproteínas de la superficie celular [Klis, F. M. et al. Med Mycol 39 Suppl 1, 1-8, 2001; Klis, F. M. et al., FEMS Microbiol Rev 26, 239-56, 2002].

El reconocimiento de ß-glucanos por macrófagos se lleva a cabo principalmente mediante dectina-1 con cooperación de TLR, que incluyen TLR2 [Brown, G. D. et al. Nature 413, 36-7, 2001]. La actividad de la dectina-1 se inhibe por ß1, 3-glucanos y ß-1, 6-glucanos, teniendo las laminarinas de ß-1, 3-glucano el mayor efecto. Sin embargo, los resultados de micromatrices de oligosacáridos muestran que la dectina-1 se une específicamente a ß-1, 3-glucanos. Los neutrófilos son asesinos profesionales, cuya función en la fagocitosis y destrucción de bacterias y hongos está bien caracterizada. Los individuos neutropénicos son mucho más susceptibles a infecciones bacterianas y fúngicas, desempeñando el regreso a cifras normales una función importante en la resolución de la infección. Los neutrófilos, a diferencia de los macrófagos, requieren suero para la fagocitosis y destrucción óptima. Los principales receptores opsónicos son el receptor del complemento CR3 y el receptor de unión a inmunoglobulina FcR. CR3 tiene un dominio de lectina [Brown, G. D. et al. Immunity 19, 311-5, 2003] que media en la elevada motilidad de neutrófilos hacia una mezcla de ß-1, 3-glucano y ß-1, 6-glucano (PGG-glucano) [Wakshull, E. et al. Immunopharmacology 41, 89107, 1999].

Se ha encontrado que los ß-1, 6-glucanos proporcionan potente actividad antifúngica, y, entre otros, poseen actividad de adyuvante y activan el complemento.

El sistema del complemento (C) de los seres humanos y otros mamíferos implica más de 20 componentes que participan en una secuencia de reacciones ordenada que produce la activación del complemento. Productos derivados de la activación de componentes de C incluyen moléculas no de auto-reconocimiento C3b, C4b y C5b, además de las anafilotoxinas C3a, C4a y C5a que influyen en una variedad de respuestas inmunitarias celulares (Hugli et al. (1982) 15th International Leucocyte Conference, Asilomar, CA (Resumen) ; Fujii et al. (1993) Protein Science 2:1301-1312; Morgan et al. (1982) J. Exp. Med. 155:1412-1426; Morgan (1993) Complement Today 1:56-75; Morgan et al. (1983) J. Immunol. 130:1257-1261) . La activación del complemento se produce principalmente mediante la ruta "clásica" o la ruta "alternativa". La ruta clásica se inicia por la unión del primer componente del complemento (C1) a inmunocomplejos mediante C1q, un subcomponente que participa en la unión al anticuerpo. El complejo c1 está compuesto por C1q y dos serina proteasas homólogas, C1r y C1s (relación molar 1:2:2) . Después de la unión a inmunocomplejos, C1q experimenta un cambio conformacional que produce las conversiones de C1r y C1s en sus formas activadas. C1s activado escinde C4 y C2 para generar un complejo de sus fragmentos C4b2a, que a su vez escinde C3 en C3a y C3b. C3b se une a inmunocomplejos.

La ruta alternativa se activa sin participación del anticuerpo. Moléculas de C3b generadas a partir de C3 por interacción de C3 con dos serina proteasas, factores B y D, se depositan sobre la superficie microbiana en la que se amplifica la activación de C3. C3b producido por la activación de cualquier ruta actúa de molécula central en la posterior formación de complejos de ataque de la membrana que pueden lisar microbios y también de opsonina.

Se desconoce si los ß-1, 6-glucanos producen una robusta respuesta inmunitaria en todos los sujetos y por qué mecanismo se genera tal respuesta.

El documento US5480642 desvela la regulación de respuestas inmunitarias a un antígeno con derivados de polisacáridos polianiónicos: (1) que tienen un peso molecular de entre 1.000 y 600.000; (2) seleccionados por corresponderse con el antígeno; (3) que no son citotóxicos a una dosificación eficaz; y (4) que estimulan una respuesta inmunitaria mediada por célula.

El documento US2006160766 desvela composiciones terapéuticas para el tratamiento de cáncer que comprenden una composición de glucano que es adecuada para administración por vía oral y para absorción a través del tubo gastrointestinal del mamífero, y al menos un anticuerpo para el cáncer.

BONALDO ALESSIO et al. ITALIAN JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE, vol. 6, nº 2, Abril de 2007, páginas 151-164, desvelan la influencia de beta-glucanos dietéticos sobre las respuestas inmunitarias adaptivas e innatas en róbalo europeo.

El documento US2005208079 desvela un método para detectar la cantidad de IgG secretada en respuesta a beta1, 6-glucano, y composiciones inmunogénicas que comprenden un glucano y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

RUBIN-BEJERANO et al. CELL HOST MICROBE, vol. 2, nº 1, 12 de julio de 2007, páginas 55 - 67, describen la estimulación de la fagocitosis de neutrófilos por beta-1, 6-glucano.

El documento WO2008057501 desvela composiciones que comprenden beta-1, 6-glucanos para modular respuestas inmunitarias. 10 Resumen de la invención La presente invención proporciona un kit de diagnóstico para medir niveles de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, y así determinar la sensibilidad de un sujeto que se ha expuesto a glucanos ambientales a una composición farmacéutica que comprende ß-1, 6-glucano, que comprende: (i) una composición que comprende ß-1, 6-glucano que se corresponde con o es un fragmento de, o es altamente homólogo al glucano en la composición farmacéutica para la que está siendo determinada la sensibilidad; y (ii) reactivos para detectar anticuerpos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 unidos al ß-1, 6-glucano de la etapa (i) en una muestra de sangre.

En una realización, el ß-1, 6-glucano está en disolución o liofilizado.

En otra realización, el ß-1, 6-glucano se inmoviliza sobre un sustrato. Dicho sustrato puede comprender un material seleccionado de: plástico, vidrio, gel, celuloide, papel, resina magnética, poli (fluoruro de vinilideno) , nailon, nitrocelulosa, agarosa, látex y poliestireno, o puede comprender una placa de ELISA, tira reactiva, placa de microtitulación, placa de radioinmunoensayo, perlas, perlas de agarosa, perlas de plástico, perlas de látex, membranas de inmunotransferencia y papeles de inmunotransferencia.

Los reactivos pueden conjugarse con un marcador detectable. Dicho marcador detectable puede seleccionarse del grupo que consiste en una marca radiactiva, marca fluorescente, marca quimioluminiscente, marca cromófora, 30 ligando, fluoresceína, radioisótopo, fosfatasa, biotina, compuesto relacionado con biotina, avidina, compuesto relacionado con avidina y peroxidasa.

En otro aspecto, la invención contempla el uso del kit de la invención para predecir la robustez de una respuesta a ß1, 6-glucanos en un sujeto.

En otro aspecto, la invención contempla el uso del kit de la invención para predecir la sensibilidad de un sujeto a vacunas o adyuvantes basados en glucanos.

Si se facilitan en este documento intervalos numéricos, los puntos extremos están incluidos dentro del intervalo.

Además, debe entenderse que, a menos que se indique lo contrario o sea de otro modo evidente del contexto y entendimiento de un experto habitual en la materia, los valores que se expresan como intervalos pueden asumir cualquier valor específico o subintervalo dentro de los intervalos establecidos, que opcionalmente incluyen o que excluyen cualquier punto extremo o ambos, en diferentes realizaciones de la invención, al décimo de la unidad del límite inferior del intervalo, a menos que el contexto dicte claramente de otro modo. Si se cita un porcentaje en 45 referencia a un valor que tiene intrínsecamente unidades que son números enteros, cualquier fracción resultante puede redondearse al número entero más próximo.

Breve descripción de los dibujos 50 La Figura 1 demuestra que la engullición de perlas recubiertas de ß-1, 6-glucano (A) y la producción de ROS (B) son dependientes de anticuerpo, independientemente de la presencia del complemento (C) .

La Figura 2 demuestra que los anticuerpos para ß-1, 6-glucano son predominantes... [Seguir leyendo]

1. Un kit de diagnóstico para medir niveles de IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4, y así determinar la sensibilidad de un sujeto que se ha expuesto a glucanos medioambientales, a una composición farmacéutica que comprende ß-1, 6-glucano, 5 que comprende:

(i) una composición que comprende ß-1, 6-glucano que se corresponde con o es un fragmento de, o es altamente homólogo al glucano en la composición farmacéutica para la que está siendo determinada la sensibilidad; y (ii) reactivos para detectar anticuerpos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 unidos al ß-1, 6-glucano de la etapa (i) en una muestra de sangre.

2. El kit de la reivindicación 1, en el que el ß-1, 6-glucano está en disolución o liofilizado.

3. El kit de la reivindicación 1, en el que el ß-1, 6-glucano está inmovilizado sobre un sustrato.

4. El kit de la reivindicación 3, en el que dicho sustrato comprende un material seleccionado de: plástico, vidrio, gel, celuloide, papel, resina magnética, poli (fluoruro de vinilideno) , nailon, nitrocelulosa, agarosa, látex y poliestireno.

5. El kit de la reivindicación 3, en el que dicho sustrato comprende una placa de ELISA, tira reactiva, placa de microtitulación, placa de radioinmunoensayo, perlas, perlas de agarosa, perlas de plástico, perlas de látex, membranas de inmunotransferencia y papeles de inmunotransferencia.

6. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dichos reactivos están conjugados con un 25 marcador detectable.

7. El kit de la reivindicación 6, en el que dicho marcador detectable está seleccionado del grupo que consiste en una marca radiactiva, marca fluorescente, marca quimioluminiscente, marca cromófora, ligando, fluoresceína, radioisótopo, fosfatasa, biotina, compuesto relacionado con biotina, avidina, compuesto relacionado con avidina y peroxidasa.

8. Uso del kit de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para establecer la fuerza de una respuesta a ß1, 6-glucanos en un sujeto.

9. Uso del kit de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes para predecir la sensibilidad de un sujeto a vacunas o a adyuvantes basados en glucano.