Cepa de Lactobacillus fermentum CECT 7472 con propiedades probióticas.

Una cepa aislada de Lactobacillus fermentum depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) bajo el número de acceso CECT 7472.

Cepa de Lactobacillus fermentum CECT 7472 con propiedades probióticas La presente invención se relaciona con los campos de microbiología y tecnología de alimentos y particularmente, con una cepa probiótica novedosa de Lactobacillus fermentum para uso en el beneficio de la salud.

Técnica antecedente La Listeria monocytogenes es uno de los agentes causantes de infecciones transmitidas por alimentos potencialmente fatales. Los síntomas clínicos van desde gastroenteritis febril hasta formas invasivas graves que incluyen meningitis, encefalitis, abortos, septisemia e infecciones perinatales. Esta bacteria es un patógeno facultativo Gram-positivo, que desarrolló múltiples estrategias para hacer frente a los mecanismos de defensa innatos del anfitrión. La L. monocytogenes puede contaminar la leche directamente como consecuencia de mastitis por Listeria y es una bacteria que se puede encontrar en el queso, yogur y otros alimentos, ya que puede resistir el proceso de maduración de la mayoría de estos derivados lácteos.

Debido a los grandes porcentajes de mortalidad (meningitis, 70%; septicemia, 50%; e infecciones perinatales, 80%) , hay un creciente interés en la búsqueda de buenas estrategias terapéuticas contra la listeriosis (infección provocada por L. monocytogenes) .

Hoy en día, la listeriosis se trata rápidamente con penicilina o ampicilina parenteral, y para los pacientes alérgicos a la penicilina, se utiliza trimetoprim-sulfamotoxazol. Todos estos métodos terapéuticos se basan en composiciones farmacéuticas, que aparte de los efectos secundarios asociados a las mismas, no tienden a ser beneficiosos para el paciente.

Por otro lado, la Yersinia enterocolitica, que es una bacteria en forma de cocobacillus Gram-negativa, provoca diarrea severa en los humanos, junto con necrosis parcelar de Peyer, linfadenopatía crónica y abscesos hepáticos o esplénicos. Otros síntomas pueden incluir entero-colitis, fiebre, adenitis mesentérica, eritema nudoso e ileítis terminal aguda, que se puede confundir con apendicitis o enfermedad de Crohn. Debido a que la Yersinia es una bacteria siderófila (amante al hierro) , las personas con hemocromatosis hereditaria (una enfermedad que resulta en altos niveles de hierro en el cuerpo) son más susceptibles a la infección por Yersinia (y otras bacterias siderófilas) . De hecho, el contaminante más común de la sangre almacenada es Y. enterocolitica.

El tratamiento de las infecciones por Y. enterocolitica a menudo requiere terapia antibiótica agresiva, que normalmente suele implicar ciprofloxacina, cloranfenicol, ampicilina, y polimixina.

La Lactobacillus fermentum es una bacteria de ácido láctico Gram-positiva (LAB) , que se encuentra comúnmente en muchos productos alimenticios fermentados, especialmente los productos lácteos. Las cepas de L. fermentum son especialmente adecuadas para la preparación industrial de productos alimenticios fermentados gracias a su buen índice de supervivencia a través del proceso industrial y el período de conservación, así como también su alto perfil de acidificación y buenas propiedades organolépticas. Algunas cepas de L. fermentum también se consideran como probióticos. Los probióticos son microorganismos vivos que, cuando se administra en cantidades adecuadas, proporcionan beneficios para la salud del anfitrión. Para ser denominadas como probióticas, las bacterias deben cumplir varios requisitos relacionados con su falta de toxicidad, su resistencia a los ambientes ácidos y sales biliares, su viabilidad en alcanzar vivas el tracto gastrointestinal inferior (GIT) , y su adhesión a las células de la mucosa intestinal, entre otros. La mayoría de las bacterias probióticas pertenecen al grupo LAB pero, sin embargo, se sabe en general que las características y beneficios probióticos son extremadamente dependientes de la cepa, incluso entre LAB de la misma especie, como es ampliamente aceptado y con el consenso de los comités científicos.

Algunas cepas de Lactobacillus han mostrado cierta actividad contra infecciones por L. monocytogenes. Con respecto a esto, el informe de Kotsou et al, "In vitro Assessment of Probiotic Properties of Lactobacillus Strains from Infant Gut Microflora", Food Biotechnology 2008, Vol. 22, pp. 1-17, representa diferentes especies de Lactobacillus con propiedades probióticas y reporta una actividad in vitro contra la L. monocytogenes. Aunque una de las especies de Lactobacillus es una cepa de L. fermentum (denominada LF-B21) , los datos del informe no permiten correlacionar la actividad contra el patógeno con esta cepa. La LF-B21 adicionalmente tiene la desventaja de que es pobremente resistente al ambiente de las sales biliares. Por otra parte, Kotsou et al. indican claramente que con el fin de tener de datos concluyentes se requieren pruebas en animales, es decir, el comportamiento in vitro no es una condición indispensable para que los ensayos in vivo tengan éxito.

Para enfrentar infecciones por Y. enterocolitica se debe mencionar el documento de Frick et al., "Lactobacillus fermentum Attenuates the Proinflammator y Effect of Yersinia enterocolitica on Human Epithelial Cells", Inflamm. Bowel Disease -2007, Vol. 13, pp. 83-90. Este documento muestra una cepa de L. fermentum (DSMZ 20052) que reporta actividad in vitro como un inmunomodulador y un agente anti-inflamatorio contra una cepa de Yersinia

enterocolitica no virulenta (curada con plásmido, pYV-) cuando se produce la infección por Y. enterocolitica. A saber, la cepa DSMZ 20052 tiene la capacidad de inhibir la secreción de IL-8 inducida por Y. enterocolitica. Los autores informan que el efecto anti-inflamatorio se debe a un fosfolípido soluble producido por la cepa de L. fermentum. No obstante, ni la adhesión a ni la invasión de Y. enterocolitica en células HeLa se inhibe por la coinfección con L. fermentum. Finalmente se concluyó que esta cepa de L. fermentum puede tener propiedades probióticas que modulan las respuestas inflamatorias intestinales, ofreciendo de esta manera nuevas estrategias terapéuticas, y que se deben realizar pruebas adicionales en modelos animales. Como se expuso anteriormente, se obtuvo este plásmido curado pYV-Yersinia enterocolitica como se indica en la referencia bibliográfica Heesemann et al., "Genetic manipulación de virulence of Yersinia enterocolitica", Contrib Microbila Immunol -1987, Vol. 9, pp. 312-316. Se sabe ampliamente que las cepas de plásmidos Curados se utilizan por ser cepas no virulentas. Por lo tanto, Frick et al. no muestran la capacidad o la función de la L. fermentum para tratar y limpiar infecciones por Yersinia enterocolitica. Muestran la capacidad de inhibir la inflamación inducida por Yersinia.

Varios documentos describen cepas de Lactobacillus y algunas de L. fermentum que muestran actividad in vitro contra un amplio espectro de patógenos, como Listeria monocytogenes, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Escherichia coli, Yersinia enterocolitica, Staphylococcus aureus, Shigella flexneri, Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa, entre otros. Ejemplos de dichos documentos son los informes de Bao et al., "Screening of potential properties of Lactobacillus fermentum isolated from traditional dair y products", Food Control 2010, Vol. 21, pp. 695-701; y el informe de Mojgani et al., "Screening of locally Isolated Acid Bacteria for Use as Probiotics in Poultr y in Iran", The Journal of Poultr y Science 2007, Vol. 44, pp. 357-365. Cabe de señalar que las diferentes cepas de L. fermentum descritas ya sea por Bao et al. o por Mojgani et al. proceden de múltiples fuentes (productos lácteos no bien definidos de nacionalidades minoritarias, o de aves de corral, respectivamente) . Esta variabilidad en la fuente de los microorganismos conduce a diferentes especímenes (cepas) con propiedades in vitro específicas.

No obstante, hay que mencionar que todos estos documentos mencionados anteriormente muestran datos in vitro que no se pueden extrapolar directamente a los datos in vivo. De hecho, es ampliamente aceptado que no existe una relación entre la capacidad in vitro de una cepa para inhibir el crecimiento de enteropatógenos y la posible protección conferida por la misma cepa en un modelo in vivo. Los ensayos in vitro no representan un entorno entérico real o equivalente. En este contexto, y sin estar limitado por la teoría, pueden suceder diversas situaciones no concurrentes. Por ejemplo, una cepa de L. fermentum puede ser activa contra un enteropatógeno in vitro debido a la secreción de una bacteriocina, cuya bacteriocina nunca será secretada una vez que la cepa esté en un ambiente entérico, probablemente debido a la complejidad de este sistema alternativo in vivo.

Por lo tanto, la técnica falla en el suministro de cepas de L. fermentum... [Seguir leyendo]

1. Una cepa aislada de Lactobacillus fermentum depositada en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT) bajo el número de acceso CECT 7472.

2. Un cultivo puro bacteriano que comprende la cepa de la reivindicación 1.

3. Un producto comestible que comprende una cantidad nutricionalmente efectiva de la cepa como se define en la reivindicación 1, junto con cantidades adecuadas de otros ingredientes comestibles.

4. El producto comestible de acuerdo con la reivindicación 3, que se selecciona del grupo que consiste de un producto lácteo, un yogurt, una cuajada, un queso, una leche fermentada, una leche en polvo, un producto fermentado a base de leche, un producto fermentado a base de carne, un helado en crema, un producto fermentado a base de cereal, una bebida, una harina, una goma para mascar, un dulce, un alimento dulce, una comida para mascotas, un complemento dietético, un alimento funcional, una fórmula de nutrición clínica, un complemento nutricional, una fórmula para las personas mayores y una fórmula para los niños.

5. Un proceso para la preparación de un producto comestible como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4, que comprende agregar la cepa como se define en la reivindicación 1 o un cultivo como se 15 define en la reivindicación 2 en dicho producto comestible.

6. La cepa de Lactobacillus fermentum CECT 7472 como se define en la reivindicación 1 para uso como un agente probiótico.

7. La cepa de Lactobacillus fermentum CECT 7472 como se define en la reivindicación 1 para uso como promotor de la salud del tracto gastrointestinal.

8. La cepa de acuerdo con la reivindicación 7, como promotor de la salud del tracto gastrointestinal cuando el tracto está invadido por un patógeno seleccionado del grupo que consiste de Yersinia enterocolitica y Listeria monocytogenes.

9. Un producto comestible como se define en cualquiera de las reivindicaciones 3 a 4 como un promotor de la salud del tracto gastrointestinal.

10. El producto comestible de la reivindicación 9, que promueve la salud del tracto gastrointestinal cuando el tracto está invadido por un patógeno seleccionado de los grupos que consisten de Yersinia enterocolitica y Listeria monocytogenes.