Biomarcadores para la detección sensible de toxicidad muscular inducida por estatina.

Un método para determinar si un sujeto está en riesgo de desarrollar,

o está sufriendo toxicidad muscular inducida por estatina o toxicidad muscular inducida por estatina y una o más complicaciones seleccionadas de mialgia, miositis, miopatía y rabdomiólisis, que comprende determinar en una muestra de dicho sujeto la(s) concentración (concentraciones) de uno o más lípidos, en el que una concentración (concentraciones) elevada(s) o reducida(s) en dicha muestra, cuando se compara(n) con un control, es (son) indicativa(s) de que dicho sujeto padece o está en riesgo de desarrollar dicha toxicidad muscular inducida por estatina y/o dicha(s) complicación (complicaciones), en el que el uno o más lípidos cuyo aumento en concentración se compara con el control se selecciona de: 12-HETE, 15- HETE, AA, Cer(d18:1/20:0), 12-HEPE y PGE2; y en el que el uno o más lípidos cuya disminución en concentración se compara con el control se seleccionan de: 14_15-DHET y 8_9-DHET.

Biomarcadores para la detección sensible de toxicidad muscular inducida por estatina 5 Campo de la invención

[0001] La presente Invención se refiere a métodos y usos que Implican niveles de lípidos para predecir o diagnosticar toxicidad muscular Inducida por estatina. La invención es aplicable, entre otras cosas, a determinar si un sujeto requiere ajuste del tratamiento con estatina y a la evaluación de toxicidad muscular inducida por nuevos 10 fármacos hipolipemiantes. Los métodos incluyen analizar niveles de lípidos de una muestra biológica, y compararlos con un control.

Antecedentes de la invención

15 [0002] Las estatinas son actualmente los fármacos hipolipemiantes más ampliamente usados debido a que reducen del 25 % al 35 % la incidencia de criterios de valoración consistentes cardiovasculares (muerte cardiovascular, infarto de miocardio y accidente cerebrovascular) en diferentes poblaciones de pacientes. Estas poblaciones incluyen aquellas con enfermedad estable o inestable de las arterias coronarias, diabéticos y pacientes hipertensores con otros factores de riesgo. En general, las estatinas son bien toleradas, aunque pueden producirse 20 efectos secundarios musculares, hepáticos y gastrointestinales. Las estatinas pueden asociarse a una gran diversidad de efectos secundarios musculares, desde mialgias no específicas o atípicas, hasta miopatía y el síndrome de rabdomiólisis completo.

[0003] Las mialgias se definen como dolor muscular o enfermedades de músculos doloridos que pueden tanto ser 25 generalizadas como localizadas. Tales síntomas se producen en hasta el 10 % de los pacientes y pueden obligar a

los médicos a reducir la dosis, cambiar a otra estatina usando un enfoque de ensayo y error o detener la medicación completamente. Estos síntomas musculares también pueden contribuir a la tasa relativamente alta de pacientes que detienen la terapia con estatina dentro de los dos primeros años de tratamiento. Así, incluso los síntomas musculares más benignos pueden tener importantes consecuencias y limitar los grandes beneficios clínicos y socio- 30 económicos posiblemente ofrecidos por estos agentes.

[0004] La miopatía, aunque es menos devastadora que la rabdomiólisis, también puede producirse después del tratamiento con estatinas y se define como dolor muscular y/o debilidad con elevados niveles de creatina cinasa (CK) al menos 10 veces del límite superior del normal. La incidencia de miopatía es aproximadamente del 1-5%.

35 Los factores de riesgo predisponentes conocidos para la toxicidad muscular relacionada con estatina incluyen insuficiencia renal, hipotiroidismo, enfermedades musculares hereditarias o adquiridas, historia de toxicidad muscular con otra estatina o un fibrato, uso concomitante de un derivado de ácido fíbrico, alcoholismo, práctica clínica en la que podrían producirse elevados niveles en plasma de estatinas, además de antepasados asiáticos.

40 [0005] La rabdomiólisis es un evento raro (muy por debajo del 0,1 % de los usuarios de estatina), pero constituye una afección potencialmente mortal caracterizada por toxicidad muscular grave, gran aumento en los niveles de creatina cinasa (CK) en plasma (que superan 10.000 U/l) e insuficiencia renal secundaria a toxicidad por mioglobina. La rabdomiólisis ha causado varias muertes de pacientes y ha conducido a la retirada de una estatina del mercado, la cerivastatina, (Baycol, Bayer). También se mostró recientemente que la incidencia de la rabdomiólisis aumentaba 45 con otro inhibidor de la HMG-CoA reductasa, la simvastatina (Zocor, Merck & Co.), cuando se administraba a una dosis alta (ensayo A a Z).

[0006] Actualmente se usa medición de creatina cinasa (CK) en plasma/suero como biomarcador para la toxicidad muscular inducida por estatina. Para la gran mayoría de casos, la medición de CK sigue siendo poco informativa a

50 pesar de la presencia de síntomas. La CK en plasma/suero es un marcador inespecífico debido a que puede elevarse por muchos otros motivos, que incluyen ejercicio físico. Una limitación incluso mayor es su mala sensibilidad, ya que es indicativa solo después de un daño sustancial a células musculares que implican la fuga de CK al plasma de tejidos. Así, para este fin está bien justificado desarrollar nuevos biomarcadores para el diagnóstico de toxicidad muscular inducida por estatina. Estudios previos (Phillips PS et al.: "Statin-associated myopathy with 55 normal creatine kinase levels". Ann Intern Med. 1 oct 2002; 137(7):581-5) sobre especímenes de músculo obtenidos de pacientes durante dolor muscular agudo han demostrado, por ejemplo, una acumulación de células inflamatorias en estudios histopatológicos.

[0007] El número de mediadores lipidíeos en el cuerpo humano es abrumador. Se han hecho intentos para facilitar 60 su identificación y cuantificación por avances en espectrometría de masas y bioquímica de lípidos, que hoy en día

permiten la identificación y cuantificación simultánea de alta resolución de cientos de especies de lípidos moleculares en varias clases de lípidos (Ejsing CS, et al: Global analysis of the yeast lipidome by quantitative shotgun mass spectrometry. Proc Nati Acad Sci U S A 2009, 106:2136-2141; Stahlman M, et al: High-throughput shotgun lipidomics by quadrupole time-of-flight mass spectrometry. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 65 2009 Hiukka A, et al: ApoCIII-enriched LDL in type 2 diabetes displays altered lipid composition, increased

susceptibility for sphingomyelinase, and increased binding to biglycan. Diabetes 2009, 58:2018-2026; Linden D, et al: Liver-directed overexpression of mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase results in hepatic steatosis, increased triacylglycerol secretion and reduced fatty acid oxidation. FASEB J 2006, 20:434-443) denominadas conjuntamente el lipidoma. Estudios lipidómicos han buscado identificar la distribución de lípidos celulares y describir 5 sus mecanismos bioquímicos, interacciones y dinámicas. La lipidómica es capaz en principio de cuantificar la composición química exacta de lipidomas (Han X, Gross RW: Global analyses of cellular lipidomes directly from crude extracts of biological samples by ESI mass spectrometry: a bridge to lipidomics. J Lipid Res 2003, 44:1071- 1079).

10 [0008] La mayoría de los datos de lípidos en la materia hoy en día presenta lípidos en un formato de composición en suma, es decir, fosfatidilcolina (PC) 34:1 (Brugger B, et al: Quantitative analysis of biological membrane lipids at the low picomole level by nano-electrospray ionization tándem mass spectrometry. Proc Nati Acad Sci USA 1997, 94:2339-2344) en la que el lípido molecular y las colas de ácido graso unidas siguen sin identificar. La identificación de especies de lípidos moleculares, por ejemplo, PC 16:0/18:1 (Ekroos K, et al: Charting molecular composition of

15 phosphatidylcholines by fatty acid scanning and ion trap MS3 fragmentation. J Lipid Res 2003, 44:2181-2192) es la principal característica de la lipidómica avanzada, que suministra especies de lípidos moleculares altamente resueltas en vez de información sumada de ácidos grasos. Por ejemplo, se revela la información del tipo de ácidos grasos y sus posiciones de unión con respecto al esqueleto de glicerol que constituye la molécula de PC particular. Hay técnicas convencionales tales como cromatografía en capa fina combinada con cromatografía de gases, pero

20 no solo requieren cantidades de muestra considerablemente mayores y preparación de muestras laboriosa, sino que no suministran especies de lípido molecular. A pesar de las múltiples técnicas de espectrometría de masas que pueden caracterizar entidades de lípidos, la mayoría de ellas son todavía incapaces de dar datos cuantitativos de alta calidad fiables en términos de concentraciones absolutas o próximas a absolutas.

25 [0009] Existe la necesidad de métodos específicos y fiables para la detección y diagnóstico de toxicidad muscular inducida por estatina, además de marcadores útiles a este respecto. También existe la necesidad de mejoras de las pautas de tratamiento existentes con estatinas o fármacos hipolipemiantes.

Sumario de la invención

[0010] La presente invención proporciona, entre otras cosas, novedosos marcadores lipidómicos, también denominados en el presente documento "blomarcadores", para la detección y diagnóstico de toxicidad muscular inducida por estatina, tal como toxicidad muscular Inducida por estatina asociada a enfermedad muscular, distrofia muscular, mialgia, miositis, miopatía o rabdomiólisis.

[0011] En un aspecto de la presente Invención, métodos, anticuerpos y usos de los anticuerpos o kits se reivindican en el presente documento para... [Seguir leyendo]

1. Un método para determinar si un sujeto está en riesgo de desarrollar, o está sufriendo toxicidad muscular inducida por estatina o toxicidad muscular inducida por estatina y una o más complicaciones seleccionadas de mialgia,

5 miositis, miopatía y rabdomiólisis, que comprende determinar en una muestra de dicho sujeto la(s) concentración (concentraciones) de uno o más lípidos, en el que una concentración (concentraciones) elevada(s) o reducida(s) en dicha muestra, cuando se compara(n) con un control, es (son) indicativa(s) de que dicho sujeto padece o está en riesgo de desarrollar dicha toxicidad muscular inducida por estatina y/o dicha(s) complicación (complicaciones), en el que el uno o más lípidos cuyo aumento en concentración se compara con el control se selecciona de: 12-HETE, 15- 10 HETE, AA, Cer(d18:1/20:0), 12-HEPE y PGE2; y en el que el uno o más lípidos cuya disminución en concentración se compara con el control se seleccionan de: 14_15-DHET y 8_9-DHET.

2. Un método para determinar si el tratamiento con una estatina y/o un fármaco hipolipemiante a un sujeto que necesita ajuste, que comprende determinar en una muestra de dicho sujeto la(s) concentración (concentraciones) de

15 uno o más lípidos, en el que (una) concentración (concentraciones) elevada(s) o reducida(s) en dicha muestra, cuando se compara(n) con un control, es (son) indicativa(s) de que dicho tratamiento requiere un ajuste, en el que el uno o más lípidos cuyo aumento en concentración se compara con el control se selecciona(n) de: 12-HETE, 15- HETE, AA, Cer(d18:1/20:0), 12-HEPE y PGE2; y en el que el uno o más lípidos cuya disminución en concentración se compara con el control se selecciona(n) de: 14_15-DHET y 8_9-DHET.

3. El método de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el lípido cuyo aumento en concentración se compara con el control es 12-HETE.

4. El método de la reivindicación 2 ó 3, en el que el ajuste de dicho tratamiento con una estatina y/o un fármaco

25 hipolipemiante comprende

(a) una reducción de la dosis de estatina;

(b) un cese del tratamiento con estatina;

(c) un reinicio del tratamiento con estatina;

30 (d) un cambio a un fármaco de estatina diferente; o

(e) un cambio a un fármaco hipolipemiante diferente.

5. El método de la reivindicación 1 ó 3, en el que el método para determinar si un sujeto está sufriendo toxicidad muscular inducida por estatina es específicamente para evaluar el grado de toxicidad muscular inducida por una

35 nueva estatina o una nueva medicación hipolipemiante en un sujeto que recibe tratamiento con dicha estatina o medicación hipolipemiante.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que

40 (a) el método para determinar si un sujeto está en riesgo de desarrollar miopatía inducida por estatina es

específicamente para determinar signos de aviso precoces de toxicidad muscular en dicho sujeto, y/o

(b) el método para determinar si un sujeto está sufriendo toxicidad muscular inducida por estatina es específicamente para determinar si los síntomas de toxicidad muscular encontrados en un sujeto se deben a toxicidad muscular inducida por estatina.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende determinar al menos 2, al menos 3, al menos 4, o al menos 5, de dichas concentraciones de lípidos.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que

(a) dicho sujeto está siendo tratado con una o más estatinas;

(b) dicho sujeto había recibido tratamiento con estatina, pero suspendió dicho tratamiento debido a la aparición de dolor muscular; o

(c) dicho sujeto todavía no ha sido tratado con estatinas.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el sujeto tiene un alto riesgo de desarrollar toxicidad muscular inducida por estatina.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho control con el que se hace la 60 comparación es:

(a) una muestra de control del mismo sujeto que recibe tratamiento con estatina antes de la aparición de toxicidad muscular;

(b) una muestra de control del mismo sujeto antes del tratamiento con estatina o durante la suspensión del 65 tratamiento con estatina;

(c) una muestra de control de un sujeto sin signos o historia de toxicidad muscular inducida por estatina;

(d) una muestra de control de una población de sujetos sin signos o historia de toxicidad muscular inducida por estatina;

(e) un valor de control establecido de uno o más sujetos no en tratamiento con estatina y sin signos o historia 5 de toxicidad muscular; o

(f) un valor de control establecido de uno o más sujetos en tratamiento con estatina y sin signos o historia de toxicidad muscular.

11. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además determinar o evaluar el 10 nivel de creatina quinasa en una muestra de dicho sujeto, opcionalmente en el que el sujeto tiene o no tiene niveles

de creatina quinasa elevados.

12. El método de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que

15 (a) la muestra es sangre, plasma, suero, una fracción de lipoproteina de sangre, orina o tejido de biopsia de

músculo; y/o

(b) la(s) concentración (concentraciones) de Ifpidos se determina(n) usando espectrometría de masas, espectroscopia de resonancia magnética nuclear, espectroscopia de fluorescencia o interferometrfa de doble polarización, un método de separación de alto rendimiento tal como HPLC o UPLC, un inmunoensayo tal como 20 un ELISA y/o con una porción de unión capaz de unirse específicamente al analito.

13. Uso de un anticuerpo que puede unirse a cualquiera de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2 para predecir o diagnosticar toxicidad muscular inducida por estatina o toxicidad muscular inducida por estatina y una o más de sus complicaciones seleccionadas de mialgia, miositis, miopatía y rabdomiólisis en un sujeto, en el que el

25 uso de dicho anticuerpo es para analizar el nivel de dicho uno o más de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2 en una muestra biológica, y compararlo con un control.

14. Uso de un kit para (i) predecir toxicidad muscular inducida por estatina o toxicidad muscular inducida por estatina y una o más de sus complicaciones seleccionadas de mialgia, miositis, miopatía y rabdomiólisis, en el que el uso de

30 dicho kit es para analizar el nivel de dicho uno o más de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2 en una muestra biológica, y compararlo con un control; o para (ii) realizar los métodos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12; en el que el kit comprende:

(a) un patrón (o patrones) de lípidos seleccionado(s) de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2; y 35 opcionalmente uno o más compuestos de referencia adicionales seleccionados de:

(b) uno o más marcadores de control, tales como un lípido o lípidos, por ejemplo, un lípido como se define en las reivindicaciones 1 ó 2, o una protema;

(c) controles positivos y/o negativos;

(d) patrones internos y/o externos;

40 (e) controles de la línea de calibración; y

(f) un agente, opcionalmente un anticuerpo, capaz de unirse a cualquiera de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2; y

(g) un reactivo (o reactivos) para realizar dichos métodos o usos.

45 15. El uso de la reivindicación 14(¡¡), en el que la(s) concentración (concentraciones) de lípidos en una muestra de un sujeto se determina(n) usando espectrometría de masas.

16. El método o uso de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que:

50 (a) dicha estatina se selecciona del grupo que consiste en atorvastatina, cerivastatina, fluvastatina, fluvastatina

XL, lovastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y/o simvastatina;

(b) dicho fármaco hipolipemiante puede seleccionarse de cualquiera de los siguientes: un inhibidor de la HMG- CoA reductasa, niacina (ácido nicotínico), un inhibidor de la absorción de colesterol, un inhibidor de la proteína de transferencia de ásteres de colesterilo (CETP), un secuestrante de ácidos biliares; un fibrato o un fitosterol;

55 en el que opcionalmente dicho inhibidor de la absorción de colesterol es ezetimiba o SCH-48461; dicho inhibidor de la proteína de transferencia de ásteres de colesterilo (CETP) es torcetrapib, anacetrapib o dalcetrapib; dicho secuestrante de ácidos biliares es colesevelam, colestiramina o colestipol; y dicho fibrato es fenofibrato, gemfibrozilo, clofibrato o bezafibrato; o

(c) la toxicidad muscular está asociada a una enfermedad muscular, por ejemplo, una distrofia muscular.

17. Un anticuerpo capaz de unirse a cualquiera de los lípidos definidos en las reivindicaciones 1 ó 2, para su uso en la prevención o tratamiento de la toxicidad muscular inducida por estatina o toxicidad muscular inducida por estatina y una o más de sus complicaciones en un sujeto seleccionadas de mialgia, miositis, miopatía y rabdomiólisis.