Anticuerpos humanos anti-CD38 y usos para ellos.

Un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región HCDR1,

H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 5; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:13.

Anticuerpos humanos anti-CD38 y usos para ellos

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

CD38 es una glicoproteína membránica de tipo II y pertenece a la familia de ectoenzimas, debido a su actividad enzimática como ADP ribosil-ciclasa y cADP-hidrolasa. Durante la ontogenia, CD38 aparece en células madre comprometidas con CD34+ y progenitores de células linfoides, eritroides y mieloides comprometidos con el linaje. Se entiende que la expresión de CD38 persiste solamente en el linaje linfoide, a través de las etapas tempranas de desarrollo de linfocitos T y B.

El aumento de CD38 sirve como un marcador para la activación de linfocitos – en particular la diferenciación de linfocitos B a lo largo de la ruta plasmacitoide. Se postulan funciones (co) receptoras de CD38 que conducen a señalización intracelular o comunicación intercelular vía su ligando, CD31, así como su papel como un regulador intracelular de un segundo mensajero, ADPr cíclica, en una variedad de cascadas de señalización. Sin embargo, todavía está por elucidar su importancia fisiológica, puesto que la genosupresión del análogo murino o los autoanticuerpos anti-CD38 en seres humanos no parece ser perjudicial.

Aparte de observar su expresión en el sistema hematopoyético, los investigadores han observado el aumento de CD38 en diversas estirpes celulares derivadas de tumores de linfocitos B, T, y tumores mieloides/monocíticos, incluyendo la leucemia linfoblástica aguda (ALL) de linfocitos B o T, leucemia mieloide aguda (AML) , linfoma no de Hodgkin (NHL) y mieloma múltiple (MM) . En MM, por ejemplo, la fuerte expresión de CD38 se observa en la mayoría de todas las muestras de pacientes.

Por tanto, la sobreexpresión de CD38 en células neoplásicas proporciona una diana terapéutica atractiva para inmunoterapia. De especial atracción es el hecho de que la mayoría de las células madre pluripotentes primitivas del sistema hematopoyético son CD38-negativas, y que el grado de efectos citotóxicos por ADCC o CDC se correlaciona bien con los niveles de expresión de la diana respectiva.

Los enfoques actuales de terapias anti-CD38 se pueden dividir en dos grupos: enfoques in vivo y ex vivo. En los enfoques in vivo, los anticuerpos anti-CD38 se administran a un sujeto que necesita terapia a fin de provocar el agotamiento, mediado por anticuerpos, de células neoplásicas que sobreexpresan CD38. El agotamiento se puede lograr mediante ADCC mediada por anticuerpos y/o CDC mediante células efectoras, o usando los anticuerpos anti-CD38 como directores para el transporte de sustancias citotóxicas, por ejemplo saporina, a las células diana, e internalización subsiguiente. En el enfoque ex vivo, la población celular, por ejemplo células de médula ósea, que comprende células neoplásicas que sobreexpresan CD38, se eliminan de un individuo que necesite tratamiento y se ponen en contacto con anticuerpos anti-CD38. Las células diana son destruidas mediante sustancias citotóxicas, por ejemplo saporina, como se describe para el enfoque in vivo, o se eliminan poniendo en contacto la población celular con anticuerpos anti-CD38 inmovilizados, eliminando así de la mezcla células diana que sobreexpresan CD38. Después, la población celular agotada se reinserta en el paciente.

Los anticuerpos específicos para CD38 se pueden dividir en grupos diferentes, dependiendo de diversas propiedades. Un anticuerpo humanizado y uno quimérico derivados del anticuerpo de alta afinidad murino AT13/5 desarrollados contra CD38 dirigen de forma eficaz la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo contra líneas celulares CD38-positivas (Ellis et al., 1995) . Se utilizó un anticuerpo quimérico preparado a partir del anticuerpo OKT10 en estudios preliminares en pacientes con un mieloma florido (Stevenson et al., 1991) . La unión de algunos anticuerpos a la molécula CD38 (predominantemente aa 220-300) puede accionar actividades en la célula diana, tales como la liberación de Ca2+, liberación de citocinas, sucesos de fosforilación y estimulación del crecimiento en base a la especificidad del anticuerpo respectivo (Konopleva et al., 1998; Ausiello et al., 2000) , pero no se ha podido observar ninguna correlación clara entre el sitio de unión de los diversos anticuerpos conocidos y sus propiedades (no) agonistas (Funaro et al., 1990) .

Se sabe relativamente poco sobre la eficacia de anticuerpos anti-CD38 publicados. Lo que se sabe es que todos los anticuerpos conocidos parecen reconocer exclusivamente epítopos (restos de aminoácidos 220 a 300) situados en el parte C-terminal de CD38. No se conocen hasta ahora anticuerpos que sean específicos para epítopos en la parte N-terminal de CD38 distante del sitio activo en la secuencia proteica primaria. Sin embargo, se ha encontrado que OKT10, que ha estado en ensayos clínicos, tiene una afinidad y eficacia relativamente bajas cuando se analiza como constructo quimérico que comprende una parte Fc humana. Además, OKT10 es un anticuerpo murino que lo hace inadecuado para la administración a seres humanos. Recientemente se ha descrito (documento WO 02/06347) un fragmento de anticuerpo scFv anti-CD38 humano. Sin embargo, ese anticuerpo es específico para un epítopo de CD38 expresado selectivamente.

Correspondientemente, a la luz del gran potencial para la terapia con anticuerpos anti-CD38, existe una gran necesidad de anticuerpos anti-CD38 humanos con afinidad elevada y con eficacia elevada a la hora de mediar la muerte mediante ADCC y/o CDC de células neoplásicas que sobreexpresan CD38.

La presente invención satisface estas y otras necesidades al proporcionar anticuerpos anti-CD38 completamente

humanos y muy eficaces, como se describen más abajo.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la invención es proporcionar anticuerpos humanos que puedan mediar de forma eficaz el exterminio de células que sobreexpresan CD38.

Es otro objeto de la invención proporcionar anticuerpos que sean seguros para la administración a seres humanos.

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-CD38 humano específico o un fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 5; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:13. En una realización, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO:13. La presente invención proporciona además una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo anterior o fragmento funcional del mismo. En una realización, la composición comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 9.

La presente invención proporciona además un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 6; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO: 14. En una realización, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO:6 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO:14. La presente invención proporciona además una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo humano anterior o fragmento funcional del mismo. En una realización, la composición comprende SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 10.

La presente invención proporciona además un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 7; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:15. En una realización, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO:7 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO:15. La presente invención proporciona además una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo anterior o fragmento funcional del mismo. En una realización, la composición comprende SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 11.

La presente invención proporciona además un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 8; y una región L-CDR1, LCDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:16. En una realización, el anticuerpo o fragmento funcional del mismo comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO:8 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO: 16. La presente invención proporciona además una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 5; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:13.

2. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo según la reivindicación 1, que comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO: 5 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO: 13.

3. Un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 6; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:14.

4. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo según la reivindicación 3, que comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO: 6 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO: 14.

5. Un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 7; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:15.

6. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo según la reivindicación 5, que comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO: 7 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO: 15.

7. Un anticuerpo anti-CD38 humano específico o fragmento funcional del mismo que comprende una región H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3 representada en SEQ ID NO: 8; y una región L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3 representada en SEQ ID NO:16.

8. El anticuerpo o fragmento funcional del mismo según la reivindicación 7, que comprende una cadena pesada variable representada en SEQ ID NO: 8 y una cadena ligera variable representada en SEQ ID NO: 16.

9. El anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el anticuerpo humano es un anticuerpo humano sintético.

10. El anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que es una IgG.

11. El anticuerpo según la reivindicación 10, que es una IgG1.

12. Una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo de la reivindicación 1 o 2.

13. La composición de la reivindicación 12 que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 9.

14. Una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo de la reivindicación 3 o 4.

15. La composición de la reivindicación 14 que comprende SEQ ID NO: 2 y SEQ ID NO: 10.

16. Una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo de la reivindicación 5 o 6.

17. La composición de la reivindicación 16 que comprende SEQ ID NO: 3 y SEQ ID NO: 11.

18. Una composición que comprende ácidos nucleicos que codifican la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo de la reivindicación 7 u 8.

19. La composición de la reivindicación 18 que comprende SEQ ID NO: 4 y SEQ ID NO: 12.

20. Una composición que comprende vectores que comprenden los ácidos nucleicos definidos en una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 19.

21. Una célula que comprende los vectores definidos en la reivindicación 20.

22. La célula según la reivindicación 21, en la que dicha célula es una célula bacteriana.

23. La célula según la reivindicación 21, en la que dicha célula es una célula de mamífero.

24. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

25. Uso del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad hematológica.

26. El uso de acuerdo con la reivindicación 25, en la que la enfermedad hematológica pertenece a la lista constituida

por mieloma múltiple, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielogenosa crónica, leucemia mielogenosa aguda y 5 leucemia linfocítica aguda.

27. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable para uso en un método para tratar una enfermedad hematológica.

28. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 27, en la que la enfermedad

hematológica pertenece a la lista constituida por mieloma múltiple, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielogenosa crónica, leucemia mielogenosa aguda y leucemia linfocítica aguda.

29. Un método para método para seleccionar como dianas a células CD38+ en una muestra celular, que comprende la etapa de permitir que dichas células CD38+ se pongan en contacto con el anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.

Fig. 14: ADCC con diferentes estirpes celulares

Estirpe celular Colección de cultivo Origen Expresión [MFI] Muerte espec. máx [%] en ADCCa, c

Mab#1 Mab#2 Mab#3 PC

RPMI 8226 ATCC CCL-155 MM 405, 71 56 58 54 46

KMS-12-BM DSMZ ACC551 MM 142, 29 26 32 30 34

NCI-H929 ECACC95050415 MM 45, 01 68 73 38 54

OPM-2 DSMZ ACC50 MM 37, 99 6 13 3 7

U-266 ECACC85051003 MM 26, 14 17 14 12 16

KMS-11 Namba et al., 1989b MM 26, 81d 22 30 26 28

JVM-13 DSMZACC19 CLL 463, 93 11 20 12 15

JVM-2 DSMZACC12 CLL 140, 84 22 28 10 24

CCRF-CEM ECACC85112105 ALL 301, 46 24 29 20 22

Jurkat DSMZ ACC282 ALL 202, 99 7 8 13 12

AML-193 DSMZ ACC549 AML 62, 69d 33 26 39 33

OCI-AML5 DSMZ ACC247 AML 207, 55d 20 21 16 26

NB-4 DSMZ ACC207 AML 164, 7d 36 38 32 37

THP-1 DSMZ ACC16 AML 34, 41 64 59 38 43

HL-60d DSMZ ACC3 AML 18, 43d 29 35 29 29

Raji Linfoma de Burkitt Linfoma de Burkitt n.d. 53 62 48 n.d.

Fig. 15: ADCC con muestras de MM

Anticuerpos Parámetros: Mab#1 Mab#2 Mab#3 PC

Muestras de MM: EC50 [nM]a: 0, 116-0, 202 0, 006-0, 185 0, 027-0, 249 0, 282-0, 356

Muestras de MM: Muerte espec. máx [%] 13, 1-61, 6 16, 2-57, 9 13, 6-36, 0 15, 5-49, 5