Vacunas multivalentes para el virus de la rabia y filovirus.

Un vector del virus de la rabia recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma.

Vacunas multivalentes para el virus de la rabia y filovirus ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, al campo de las vacunas y a métodos y composiciones para el tratamiento y/o la inmunización frente a las infecciones virales. En particular, la presente invención se refiere a vacunas multivalentes como un solo agente terapéutico o inmunización frente a infecciones con uno de un virus de la rabia y/o un filovirus, o con ambos, tales como virus del Ébola o virus de Marburg.

2. Antecedentes Filoviridae es una familia de virus (p. ej., filovirus o familia de filovirus) que incluye principalmente los filovirus virus del Ébola y virus de Marburg y que causa brotes de fiebre hemorrágica altamente letal en seres humanos y primates no humanos que conducen a la muerte de más de 24.000 personas en Ã?frica cada año. El reservorio natural de los filovirus no se conoce, y en la actualidad no hay vacunas disponibles ni tratamientos terapéuticos eficaces para las infecciones por filovirus que sean seguras y efectivas.

Filovirus son virus de ARN monocatenario, de sentido negativo, que tienen un aspecto filiforme que afectan a seres humanos y a primates no humanos. El genoma del virus del Ébola consta de una sola cadena de ARN de sentido negativo que es de aproximadamente 19 kb de longitud. Este ARN contiene siete genes dispuestos secuencialmente que producen 8 ARNms tras la infección (como se representa en la Fig. 1) . Viriones del virus del Ébola (tal como se representa en la Fig. 2) al igual que viriones de otros filovirus, contienen siete proteínas: (1) una glicoproteína de superficie (GP -siglas en inglés) , (2) una nucleoproteína (NP) , (3-6) cuatro proteínas estructurales del virión (VP40, VP35, VP30 y VP24) y una (7) ARN polimerasa dependiente de ARN (L) . La glicoproteína del virus del Ébola es diferente de otros filovirus, debido a que es codificada en dos marcos de lectura abiertos. Se necesita una edición transcripcional para expresar la forma de transmembrana que se incorpora en el virión. La forma sin editar produce una glicoproteína secretada no estructural (sGP-siglas en inglés) que es sintetizada en grandes cantidades en una fase temprana durante el curso de la infección. Poco se sabe sobre las funciones biológicas de estas proteínas y no se conoce por completo qué antígenos contribuyen de manera importante en la protección (p. ej., incluyendo una respuesta de células T humoral y/o citotóxica) .

El virus de Marburg es sustancialmente de estructura idéntica al virus del Ébola, aunque provoca diferentes anticuerpos. El genoma del virus de Marburg consiste de manera similar de una sola cadena de ARN de sentido negativo que es de aproximadamente 19, 1 kb de longitud y que codifica una serie de polipéptidos que corresponden en secuencia y función a los de los virus del Ébola, aunque las regiones intergénicas exactas son diferentes entre los dos virus. Así, el virus de Marburg consiste en siete polipéptidos que son, al igual que en el virus del Ébola, (1) una glicoproteína de superficie (GP) , (2) una nucleoproteína (NP) , (3-6) cuatro proteínas estructurales del virión (VP40, VP35, VP30 y VP24) , y (7) una ARN polimerasa dependiente de ARN (L) .

Los viriones de cada uno de los filovirus tienden a ser largos y filamentosos, esencialmente baciliformes, pero a menudo adoptan una forma de "U", con una longitud de hasta 14.000 nm y un diámetro medio de aproximadamente 80 nm. Estos virus consisten en una nucleocápside, rodeada por una cápside helicoidal estriada transversalmente. Existe un canal axial en la nucleocápside, y todo el virión está rodeado por una unidad de lipoproteínas derivada de la célula huésped. Además, hay picos de 7 nm distanciados 10 nm visibles en la superficie del virión. Véase la Fig. 2.

Al entrar en una célula infectada, los filovirus transcriben su ARN y los virus se replican en el citoplasma de la célula infectada. La replicación es mediada por la síntesis de un cadena de ARN positiva antisentido, que se proporciona como un molde para genomas virales adicionales. Conforme avanza la infección, el citoplasma de la célula infectada desarrolla cuerpos de inclusión que contienen nucleocápsides virales, que luego se convierten en altamente estructuradas. Los virus se ensamblan a continuación y brotan de la célula huésped, obteniendo su envoltorio de lipoproteínas de la membrana externa de la célula infectada.

Los filovirus virus del Ébola y virus de Marburg provocan una fiebre hemorrágica grave después de un período de incubación de aproximadamente cuatro a dieciséis días. Una persona infectada desarrolla típicamente síntomas iniciales que incluyen fiebre repentina, escalofríos, dolores de cabeza intensos, anorexia y mialgia. Náuseas, vómitos, dolor de garganta, dolor abdominal y diarrea se desarrollan pronto, seguido de una hemorragia grave,

choque y fallo multiorgánico entre aproximadamente cinco y siete días. Típicamente, la muerte se produce entre los siete y dieciséis días.

Se reconoce generalmente que el género virus del Ébola comprende cuatro especies principales, cada una de las cuales comprende, además, un cierto número de diferentes cepas. A nivel de género, el virus del Ébola comprende cuatro especies conocidas como virus del Ébola Zaire (ZEBOV) , Sudán (SEBOV) , Costa de Marfil (CEBOV) y Reston (RBOV) . Una quinta especie potencial, Bundibugyo (BEBOV) , se asoció recientemente con un brote de fiebre hemorrágica en Uganda en 2007. Desde la identificación del EBOV Zaire en los años 1970, se han reseñado al menos 20 brotes humanos en el Ã?frica Central. Mientras que las tasas de letalidad varían entre los brotes y entre las especies de EBOV, ZEBOV ha sido asociado con una mortalidad de hasta un 90%. Además, los brotes de infección letal por EBOV han sido reseñados en primates no humanos (NHPs-siglas en inglés) endémicos, incluyendo gorilas y chimpancés. El EBOV también ha surgido como una preocupación significativa de defensa biológica, debido a su extrema virulencia y a su capacidad de inducir la enfermedad por la vía de aerosol.

Si bien no hay vacunas disponibles ni tratamientos terapéuticos eficaces para las infecciones por filovirus, se han empleado varias estrategias para identificar candidatos a vacunas que confieren protección frente a EBOV. La inmunización con la glicoproteína (GP) del EBOV, que media en la fijación y la entrada viral, ha demostrado que confiere protección frente a diversas especies de EBOV en NHPs. El suministro de GP mediante vacunación de ADN, partículas similares a virus, o por expresión de virus recombinantes, incluyendo adenovirus, virus de la estomatitis vesicular, o paramixovirus ha demostrado inducir una inmunidad humoral y celular a EBOV, a pesar de que los mecanismos exactos de la inmunidad protectora permanecen definidos de una manera incompleta. Debido a los estudios de protección cruzada fallidos y a la conocida alta divergencia de la secuencia de aminoácidos de GP a lo largo de las especies del EBOV, puede ser necesaria una vacuna multivalente para proporcionar protección frente a todas las especies del EBOV.

Recientemente, la protección cruzada frente al EBOV Bundibugyo se demostró mediante vacunación de refuerzo principal de ADN/adenovirus con EBOV Sudán y ZEBOV, indicando el potencial de protección heteróloga. En conjunto, estas estrategias de vacunación sugieren que la inmunización eficaz con la GP de EBOV confiere protección contra el desafío letal de EBOV en roedores y NHPs. Dado que el curso de la enfermedad de EBOV en los seres humanos se asemeja al observado en NHPs, es posible que la vacunación de seres humanos sea un medio eficaz de prevención de la enfermedad. A pesar de ello, sigue habiendo obstáculos que dificultan el desarrollo de estas vacunas, incluyendo consideraciones de seguridad, inmunidad del vector preexistente, y problemas de fabricación, dosis u horario. Como tal, se desea en gran medida en la técnica el desarrollo de candidatos de vacunas adicionales para tratar o inmunizar frente a un flavivirus, p. ej. virus del Ébola o virus de Marburg.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a nuevas construcciones de vacunas recombinantes que se basan en la modificación genética de un vector de una vacuna de virus de la rabia para expresar una o más glicoproteínas inmunogénicas de filovirus, p. ej., una glicoproteína (GP) del virus del Ébola o virus de Marburg, de tal manera que las respuestas inmunes humorales y/o celulares son inducidas contra la infección por un virus de la rabia y/o un filovirus tras la administración de una construcción de vacuna recombinante de la invención o un virión recombinante... [Seguir leyendo]

1. Un vector del virus de la rabia recombinante que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma.

2. El vector del virus de la rabia recombinante de la reivindicación 1, en donde la al menos una glicoproteína de filovirus es una glicoproteína del virus del Ébola.

3. Una célula huésped que comprende el vector del virus de la rabia recombinante de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2.

4. Viriones aislados, preparados a partir de células huéspedes infectadas con el vector del virus de la rabia recombinante de una cualquiera de las reivindicaciones 1-2.

5. Una vacuna multivalente, eficaz para proteger tanto frente a la rabia como a filovirus, que comprende un vector del virus de la rabia recombinante que expresa al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma.

6. La vacuna multivalente de acuerdo con la reivindicación 5, en donde la al menos una glicoproteína de filovirus esuna glicoproteína del Ébola.

7. Una célula huésped que comprende la vacuna multivalente de una cualquiera de las reivindicaciones 5-6.

8. Viriones aislados, preparados a partir de células huéspedes infectadas con la vacuna multivalente de la reivindicación 7.

9. Una composición de vacuna que comprende una o más vacunas multivalentes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5-8 y un soporte farmacéuticamente aceptable.

10. Una vacuna de virus que comprende un vector del virus de la rabia recombinante atenuado que expresa la glicoproteína del Ébola, en donde la vacuna de virus protege tanto frente a una infección por el virus de la rabia como una infección del virus del Ébola.

11. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una vacuna multivalente que comprende un vector del virus de la rabia recombinante que expresa al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma, para uso en un método de inducir una respuesta inmune que protege frente a un filovirus y a un virus de la rabia en un sujeto.

12. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una vacuna multivalente que comprende un vector del virus de la rabia recombinante que expresa al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma, para uso en un método de inducir anticuerpos neutralizantes contra un filovirus y/o un virus de la rabia en un sujeto infectado con, o que ha estado expuesto a uno o a ambos de dichos virus.

13. Una cantidad terapéuticamente eficaz de una vacuna multivalente que comprende un vector del virus de la rabia recombinante que expresa al menos una glicoproteína de filovirus o un fragmento inmunogénico de la misma, en donde dicha vacuna induce una respuesta inmune eficaz contra uno o ambos de dichos virus, para uso en un método de tratar a un sujeto infectado con un filovirus y/o un virus de la rabia.

14. Un vector basado en un virus de la rabia, vivo y competente para la replicación que expresa una glicoproteína del Ébola.

15. Un vector basado en un virus de la rabia, vivo y deficiente en la replicación que expresa una glicoproteína del Ébola.