Vacuna basada en células B cargadas con el ligando de células T asesinas naturales y antígeno.

Una vacuna inmunogénica y profiláctica que comprende:

ligando de células T asesinas naturales y células B sometidas a pulsos conjuntos con antígenos o las células B que expresan antígeno cargadas con ligando.

Vacuna basada en células B cargadas con el ligando de células T asesinas naturales y antlgeno [Campo de la invención]

La presente invención se refiere a una vacuna basada en células B cargada con el ligando de las células T asesinas naturales y con antígeno para la prevención y tratamiento de enfermedad infecciosa y cáncer, de forma más precisa, una vacuna inmunoterapéutica y profiláctica mediada por células B cargadas con a-galactosilceramida, una clase de glucolípido que puede estimular célula T asesina natural, conjuntamente con antígeno.

[Antecedentes de la invención]

En general, los antígenos tumorales no se pueden presentar de forma eficiente por una célula presentadora de antígenos, es decir, la respuesta inmune no se induce de de forma eficaz. Una vacuna antitumoral es una vacuna terapéutica novedosa que se caracteriza por activar sistema inmune específico de tumores (por ejemplo, presentando antígenos tumorales a células presentadoras de antígenos) para inducir una respuesta inmune fuerte para destruir las células cancerosas.

De los enfoques de vacunas disponibles, las vacunas celulares que usan células presentadoras de antígenos (APC) tales como células dendríticas (DC) se conocen por ser fiables en generar inmunidad de células T efectiva (Rosenberg, S. A. et al., Nat. Med., 1, 99-915, 24). Debido a que las vacunas basadas en DC en particular han estado mostrando inducir eficientemente células T de memoria y células T efectoras específicas de antígeno, se están tomando en cuenta para inmunoterapia antitumoral en un número de ensayos clínicos (Rosenberg, S. A. et al., Nat. Med., 1, 99-915, 24). Las células dendríticas son células presentadoras de antígenos (APC) ideales para inmunoterapia debido a que ellas capturan antígeno y después migran dentro de los órganos linfoides, donde presentan el antígeno a la célula T relevante. De forma más importante, ellas proporcionan fuerte co-estimulación a las células T (Figdor, C. G. et al., Nat. Med., 1, 475^8, 24; y Banchereau, J. et al., Cell, 16, 271-274, 21). El enfoque de la vacuna de DC está bien establecido tanto para estudios experimentales como para estudios clínicos. Sin embargo, las DC son relativamente escasas en la sangre y en los tejidos linfoides y es difícil incrementar sus números ex vivo a partir de los monocitos de la sangre, ambas de estas cosas presentan inconvenientes principales para su uso amplio en vacunas (Schultze, J. L. et al., Trends Immunol., 25, 659-664, 24).

Las células B ofrecen una fuente alternativa atractiva a vacunas celulares porque son abundantes en tejidos linfoides y sangre y se expanden fácilmente ex vivo (Schultze, J. L. et al., Trends Immunol., 25, 659-664, 24; von Bergwelt-Baildon, M.S. et al., Blood, 99, 3319-3325, 22; y Schultze, J. L. et al., J. Clin. Invest., 1, 2757-2757, 1997) y se dirigen a los órganos linfoides después de administración parenteral.

A pesar de estas ventajas, las células B se han ignorado como fuente de vacunas celulares debido a que son pobremente inmunógenas. De hecho, la evidencia acumulativa muestra que inducen tolerancia inmune tanto en células T CD4 como en células T CD8 directamente, debido probablemente a la falta de co-estimulación (Bennett, S. R. et al., J. Exp. Med., 188, 1977-1983, 1998; y Eynon, E. E. et al., J. Exp. Med., 175:131-138 (1992)). Sin embargo, las células B 'activadas' pueden cebar tanto células T CD4 como células T CD8 (von Bergwelt-Baildon, M. S. etal., Blood, 99, 3319-3325, 22; Schultze, J. L. et al., J. Clin. Invest., 1, 2757-2765, 1997; Lapointe, R. et al., Cáncer Res., 63, 2836-2843, 23; y Heit, A. et al., J. Immunol., 172, 151-157, 24), sugiriendo que, cuando se activan por los estímulos apropiados, las células B pueden actuar como APC inmunógenas capaces de inducir inmunidad de células T específicas de antígeno.

Está bien establecido que las células ¡NKT juegan un papel crucial en una diversidad de respuestas inmunes y en inmunopatología como un todo. Aunque ellas representan menos del 1 % de los linfocitos en ratones, las células ¡NKT rigen la respuesta a autoantígenos y a antígenos externos y determinan si se induce tolerancia o inmunidad (Kronenberg, M., Annu. Rev. Immunol., 23, 877-9, 25; y Park, S. H. & Bendelac, A., Nature, 46, 788-792, 2). Ellas actúan como supresores de inmunidad en tumor, diabetes y en sitio de privilegio inmune (Sonoda, K. H., et al., J. Exp. Med., 19: 1215-1226 (1999)).

En contraste, la activación mediada por ligandos de células ¡NKT conduce a la activación de células T, B y NK así como de DC. La inyección de aGalCer, un ligando de ¡NKT, genera inmunidad antitumoral por medio de la mediación de células NK y células T (Moodycliffe, A. M., et al., Nat. Immunol., 1, 521-525, 2).

La alfa-galactosilceramida (aGalCer) es una clase de glucolípido extraído de esponja marina, que es el ligando de células asesinas naturales que tienen receptor de células T Va14+ (TCR) y presentado por CD1d en una célula presentadora de antígenos (APC) (Kawano et al., Science, 278: 1626, 1997). La activación de las células T asesinas naturales conduce a la producción masiva de IFN-y e IL-4, por la que las respuestas inmunes contra enfermedad infecciosa o cáncer se pueden controlar (Chen et al., J. Immunol., 159: 224, 1997; Wilson et al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU, 1: 1913, 23).

Fujii et al., Nat Immunol. 2 Sep.; 3 (9): 867-74 describe una respuesta de NTK que producen IFN-y prolongada inducida con DC cargadas con a-galactosilceramida así como mayor resistencia a metástasis del melanoma B16, que

la respuesta vista con fármaco solo.

Los ratones a los que se han coadmlnlstrado antfgeno proteico y aGalCer desarrollan inmunidad humoral y mediada por células incluyendo respuestas de células T cltotóxlcas (Hermans, I. F., et al., J. Immunol, 171, 514-5147, 23; y Stober, D. et al., J. Immunol., 17, 254-2548, 23). Además, un estudio reciente ha demostrado que DC cargadas con aGalCer generan respuestas celulares de ¡NTK que resisten durante un tiempo más largo de lo que lo hace la forma libre de aGalCer, sugiriendo que la coadyuvancla de /'NKT-ligandos podría potenciarse para APC profesional.

Los inventores presentes confirmaron que la presentación de las /NKT-ligando en células B pudo convertir a las células B de tolerogénicas a inmunogénicas, generando de este modo inmunidad fuerte contra el antígeno mostrado en moléculas MHC de las células B. Para verificar la confirmación y completar de este modo esta invención, los inventores presentes confirmaron adicionalmente la eficiencia de células cargadas con aGalCer, células B sometidas a un pulso peptídico y células B cargadas con aGalCer, células B transducidas por adenovirus en generar inmunidad específica de antígenos y actividad antitumoral.

ÍDivulaaciónl

ÍProblema técnico!

Es un objeto de la presente invención proporcionar una vacuna inmunoterapéutica/profiláctica y una vacuna antitumoral que es capaz de inducir respuestas inmunes específicas de antígeno mediadas por células B presentadoras de antígenos. Las células T asesinas naturales estimuladas con aGalCer en molécula CD1d de células B cargadas de antígeno convierten células B tolerogénicas en células presentadoras de antígenos inmunogénicas.

ÍSolución técnica!

La presente invención proporciona una vacuna inmunoterapéutica/profiláctica y una vacuna antitumoral mediada por células B cargadas con el ligando de la célula T asesina natural y el antígeno.

La presente invención también proporciona una vacuna antitumoral mediada por células B cargadas con el ligando de célula T asesina natural y que expresan un antígeno tumoral.

La presente invención proporciona adicionalmente un activador de células T asesinas naturales mediado por células B cargadas con aGalCer.

A continuación, la presente invención proporciona un inductor de respuesta citotóxica mediada por células B que expresan antígeno tumoral.

En adelante, la presente invención se describe en detalle.

La presente invención proporciona una vacuna inmunoterapéutica/profiláctica y una vacuna antitumoral mediada por células B cargadas con el ligando de la célula T asesina natural o con antígeno.

El ligando de células T asesinas naturales incluye alfa-galacturonosilceramida y alfa-glucuronosilceramida originadas a partir de Sphingomonas spp. (Mattner, J. et al. Nature 434: 525, 25, Kinjo, Y. et al. Nature 434: 52, 25), fosfatidilinositoltetramanósido originado a partir de M. tuberculosis (Fischer, K. et al. PNAS 11: 1685, 24), autoantígenos isoglobotrihexosilceramida (Zhou, D. et al. Science 36:1786, 24) y gangliósido GD3 (Wu, D. Y. et al. J. Exp. Med. 198:... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna inmunogénica y profiláctica que comprende:

ligando de células T asesinas naturales y células B sometidas a pulsos conjuntos con antígenos o las células B que expresan antígeno cargadas con ligando.

2. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el ligando de las células T asesinas naturales es seleccionado de un grupo que consiste en a-galacturonosilceramida, a-glucuronosilceramlda, fosfatldlllnositoltetramanósido, isoglobotrihexosllceramida, gangliósido GD3, fosfatidilcolina, b-galactosllceramlda, llpofosfoglicano, fosfolípido de glucoinosltol, derivados de aGalCer galactosllceramlda b-anomérlca y galactosllceramida a-anomérica, antígeno lipídlco de bacterias y variantes de aGalCer.

3. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el antígeno es originario bien a partir de patógenos que incluyen bacterias patógenas, virus y parásitos o bien a partir de antígeno tumoral.

4. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el antígeno derivado de las bacterias patógenas es seleccionado de un grupo que consiste en antígeno de Bordetella pertussis (toxina pertúsica, hemaglutinina filamentosa y pertactina), toxoide del tétanos, antígeno de la difteria (toxoide de la difteria), antígeno de Helicobacter pylori (polisacáridos de cápsula de serogrupo A, B, C, Y y W-135), antígeno pneumocócico (polisacárido capsular de tipo 3 de Streptococcus pnemoniae), antígeno de la tuberculosis, antígeno del cólera (subunidad B de toxina colérica), antígeno estafilocócico (enterotoxina estafilocócica B), antígeno de Shigella (polisacáridos de Shigella), antígeno de Borrelia sp., antígeno de Candida albicans y antígeno de Plasmodium.

5. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el antígeno derivado de virus es seleccionado de un grupo que consiste en virus de la gripe (antígeno de hemaglutinina y antígeno de neuraminidasa), antígeno del virus del papiloma humano (HPV) (glucoproteína), antígeno del virus de la estomatitis vesicular (glucoproteína del virus de la estomatitis vesicular), antígeno del citomegalovirus (CMV), antígeno del virus de la hepatitis (antígenos de la hepatitis A (HAV), de la hepatitis B (HBV), de la hepatitis C (HCV), de la hepatitis D (HDV) y de la hepatitis G (HGV) (antígeno del núcleo y antígeno de la superficie), antígeno del virus respiratorio sincitial (RSV), antígeno del virus herpes simplex (HSV), antígeno del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (GP-12, GP-16, p18, Tat, Gag, Pol y Env) y las combinaciones de los mismos.

6. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el antígeno tumoral es seleccionado de un grupo que consiste en HPV E6/E7, gp1, tirosinasa, TRP-1 (proteína-1 relacionada con tirosinasa), TRP-2 (proteína-2 relacionada con tirosinasa), MAGE, MUC-1, CEA (antígeno carcinoembriónico), p53, alfa-fetoproteína y Her-2/neu.

7. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el antígeno está característicamente en forma de péptido, lipopolisacárido, glucoproteína polisacárido, glucoproteína o polinucleótido.

8. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el antígeno es expresado portransducción con un virus recombinante.

9. La vacuna inmunoterapéutica y profiláctica de acuerdo con la reivindicación 8, en la que el virus recombinante es seleccionado de un grupo que consiste en adenovirus, virus adeno-asociado, retrovirus, virus de la vacuna, poxvirus y virus Sindbis para introducir un gen que codifica un antígeno.

1. Un activador de células T asesinas naturales que comprende células B que expresan antígeno cargado con aGalCer o aGalCer y células B que expresan antígeno.

11. Un inductor de respuesta citotóxica que comprende células B que expresan antígeno tumoral cargado con aGalCer.