Uso médico de vectores de vacuna de adenovirus.

Un adenovirus recombinante de replicación defectuosa que tiene uno o más polipéptidos heterólogos que contienen uno o más epítopos diana insertados en su proteína de la fibra,

para su uso como una vacuna que genera una respuesta inmunitaria contra dicho epítopo o epítopos diana, caracterizado porque dicho adenovirus para dicho uso es para su administración a un sujeto que tiene una inmunidad humoral preexistente contra un adenovirus

Uso médico de vectores de vacuna de adenovirus La invención se refiere a vectores de vacuna a base de adenovirus para uso como vacunas mediante la administración a individuos que presentan una inmunidad anti-adenovirus preexistente.

Los vectores derivados de adenovirus (Ad) se han usado ampliamente en estudios preclínicos y clínicos dirigidos al cáncer o a enfermedades genéticas. Otros estudios también han investigado su uso como plataformas de vacuna contra diferentes antígenos (TATSIS & ERTL, Mol Ther, 10, 616-29, 2004) . De este modo, el Ad recombinante mostró que induce una fuerte respuesta humoral y celular contra patógenos infecciosos tales como el Ébola (SULLIVAN y col., PLoS Med, 3, e177, 2006) , el VIH (SHU y col., Vaccine, 25, 1398-408, 2007) , o el virus de la Hepatitis C (MARTIN y col., Vaccine, 26, 2471-81, 2008) , pero también contra antígenos asociados a tumores (WARNIER y col., Int J Cancer, 67, 303-10, 1996) . Estos vectores son relativamente fáciles de construir y se pueden producir a alto título. Además, se pueden introducir por transducción en una gran gama de células y desencadenar una respuesta inmunitaria innata que ayuda en el montaje de respuestas inmunitarias a los antígenos heterólogos (BENIHOUD y col., Gene Ther, 14, 533-44, 2007; DESCAMPS & BENIHOUD, Curr Gene Ther, 9, 115-27, 2009) .

La mayoría de los vectores de vacuna basados en adenovirus en seres humanos proceden de adenovirus del serotipo 5 (Ad5) . La preexistencia de anticuerpos neutralizadores anti-Ad dirigidos contra Ad5 en aproximadamente del 50 al 90 % de los seres humanos (SUMIDA y col., J Immunol, 174, 7179-85, 2005) deteriora la transferencia de genes por estos vectores, lo cual es un requisito previo para la expresión del antígeno de interés.

Además, se induce una fuerte inmunidad humoral y celular anti-Ad en receptores no inmunes después de la primera administración que deteriora la eficacia de las siguientes administraciones de Ad (BENIHOUD y col., J Virol, 72, 9514-25, 1998; MCCOY y col., J Virol, 81, 6594-604, 2007) . El uso de regímenes de estímulo primario-refuerzo basados en una primera administración de plásmidos seguidos por una inyección de Ad (MCCONNELL y col., Mol Ther, 15, 203-10, 2007) constituye una forma de aumentar la potencia de las vacunas de Ad, pero aún está limitada por las respuestas humorales anti-Ad.

Se han desarrollado varias estrategias para solucionar el problema asociado con las respuestas humorales anti-Ad. La mayoría de ellas aprovecharon el mejor conocimiento de la estructura de las proteínas de la cápsida, lo que permitió realizar modificaciones genéticas de componentes de la cápsida de Ad tales como proteínas de la fibra y hexón. Un primer enfoque es el desarrollo de un pseudotipo de Ad con una fibra de otro serotipo, permitiéndose así el uso de nuevos regímenes de estímulo primario-refuerzo (XIN y col., Gene Ther, 12, 1769-77, 2005) . En segundo lugar, el reemplazo de la región hipervariable (HVR) de la proteína hexón por la de un serotipo que tiene una baja prevalencia en seres humanos permitió que el vector Ad5 escapara de los anticuerpos neutralizadores (ROBERTS y col., Nature, 441, 239-43, 2006) . En tercer lugar, el desarrollo de vectores de Ad derivados de serotipos humanos distintos de Ad5 (VOGELS y col., J Virol, 77, 8263-71, 2003; LEMCKERT y col., J Virol, 79, 9694-701, 2005) o incluso de xenotipos amplió el conjunto de vectores que se pueden utilizar para la vacunación (FARINA y col., J. Virol, 75, 11603-13, 2001) (TATSIS y col., Gene Ther, 13, 421-9, 2006) .

Como diferentes regiones de las proteínas de la cápsida podrían acomodar péptidos sin que esto afecte al ensamblaje de la cápsida (KRASNYKH y col., Mol Ther, 1, 391-405, 2000) , se propuso una estrategia alternativa para pasar por alto la capacidad de la respuesta humoral anti-Ad para bloquear la expresión de transgenes. Este enfoque ya no requiere la transferencia de genes para la expresión del antígeno, sino que se basa en la inserción genética del epítopo en la cápsida de Ad. La eficacia de este enfoque se demostró mediante la inserción de un epítopo neutralizador de P. aeruginosa en la proteína hexón, dando como resultado una respuesta humoral protectora contra la infección pulmonar por este patógeno (WORGALL y col., J Clin Invest, 115, 1281-9, 2005; WORGALL y col., J Virol, 81, 13801-8, 2007) . La inserción de un epítopo de B. anthracis en una proteína hexón de Ad también mostró que desencadena una fuerte respuesta de anticuerpos (MCCONNELL y col., J Virol, 80, 5361-70, 2006) . Un estudio ha analizado la influencia del sitio de inserción (el hexón, la base pentona, la protuberancia de la fibra o la proteína IX) en la inmunogenicidad del epítopo después de la administración de un Ad con la cápsida modificada. Se obtuvo la mejor respuesta humoral para un epítopo de la proteína hemaglutinina del virus de influenza A después de su inserción en la proteína de la fibra (KRAUSE y col., J Virol, 80, 5523-30, 2006) . Sin embargo, como los Ad con la cápsida modificada se inyectaron solo una vez, no se investigó la influencia del número de administraciones en la eficacia de la vacuna.

Sumario de la invención:

En el estudio que lleva a la presente invención, los inventores caracterizaron mejor la influencia del número y del sitio de inserción del epítopo sobre su inmunogenicidad después de una o varias administraciones de Ad con la cápsida modificada. Para este propósito, se insertó genéticamente OVA323-339, un epítopo que proviene de la ovoalbúmina que contiene un epítopo de linfocito B (RENZ y col., J Immunol, 151, 7206-13, 1993; FIFIS y col., Vaccine, 23, 258-66, 2004) , en el hexón de Ad (AdH-3OVA2 y AdH-OVA) o en las proteínas de la fibra (AdF-3OVA2 y AdF-OVA) de Ad recombinante.

Después de una administración intraperitoneal, todos los virus desencadenaron una respuesta eficiente antiovoalbúmina que duró más de 60 días, siendo el más eficiente AdH-3OVA2. Se obtuvieron niveles comparables de Ac anti-ovoalbúmina con AdF-3OVA2 o una dosis 10 veces más baja de AdH-3OVA2, lo que sugiere un papel directo del número de epítopos en la eficacia de la vacunación. Por el contrario y sorprendentemente, después de dos inyecciones, las respuestas de Ac anti-ovoalbúmina aumentaron de forma espectacular en ratones en los que se inyectó Ad con la fibra modificada en comparación con Ad con el hexón modificado. La transferencia pasiva de suero de ratones inmunes a Ad antes de la exposición a Ad que presentaba el epítopo OVA en la proteína de la fibra o en la del hexón, ayudó a demostrar el papel de los Ac anti-Ad en el aumento o la reducción de la producción de Ac antiovoalbúmina, respectivamente.

Los resultados de los presentes inventores demostraron que la respuesta humoral anti-epítopo no solamente estaba influenciada por el número de epítopos por cápsida, sino también por la inmunidad anti-Ad preexistente, y subrayan que la proteína de la fibra constituye un sitio mejor para la inserción del epítopo en individuos que presentan inmunidad anti-Ad.

La invención, en su sentido más amplio, es como se caracteriza en las reivindicaciones independientes.

La invención, por lo tanto, proporciona un adenovirus recombinante de replicación defectuosa que tiene uno o más polipéptidos heterólogos que contienen uno o más epítopos diana insertados en su proteína de la fibra, para su uso como una vacuna que genera una respuesta inmunitaria contra dichos epítopos diana, caracterizado porque dicho adenovirus para dicho uso es para la administración a un sujeto que tiene una inmunidad humoral preexistente contra un adenovirus.

El adenovirus recombinante de replicación defectuosa se puede obtener a partir de diferentes tipos de adenovirus de replicación defectuosa diseñados para terapia humana o animal, que son conocidos en sí mismos (para revisión, véase por ejemplo (DESCAMPS & BENIHOUD, Curr Gene Ther, 9, 115-27, 2009) mediante la inserción genética de uno o más polipéptidos heterólogos que contienen el epítopo o los epítopos diana en la proteína de la fibra de dicho adenovirus. Preferentemente, proviene de un adenovirus de replicación defectuosa que tiene el mismo serotipo que el adenovirus contra el cual el sujeto que recibe la vacuna ha desarrollado una inmunidad humoral. Por ejemplo, en el caso de un sujeto humano, el adenovirus recombinante de replicación defectuosa se obtendrá generalmente a partir de Ad2 o de Ad5, preferentemente de Ad5. La inmunidad anti-adenovirus también podría ser el resultado de un tratamiento anterior con un vector basado en adenovirus; en este caso, el adenovirus recombinante de replicación defectuosa se obtendrá a partir de un adenovirus del mismo... [Seguir leyendo]

1. Un adenovirus recombinante de replicación defectuosa que tiene uno o más polipéptidos heterólogos que contienen uno o más epítopos diana insertados en su proteína de la fibra, para su uso como una vacuna que genera una respuesta inmunitaria contra dicho epítopo o epítopos diana, caracterizado porque dicho adenovirus para dicho uso es para su administración a un sujeto que tiene una inmunidad humoral preexistente contra un adenovirus.

2. Un adenovirus recombinante de replicación defectuosa que tiene uno o más polipéptidos heterólogos que contienen uno o más epítopos diana insertados en su proteína de la fibra, y opcionalmente uno o más polipéptidos heterólogos que contienen el mismo o los mismos epítopos diana insertados en una proteína de la cápsida distinta de la proteína de la fibra, para su uso como una vacuna que genera una respuesta inmunitaria contra dicho epítopo o epítopos diana, caracterizado porque dicho adenovirus para dicho uso es para su administración repetida a un mismo sujeto.