Uso de parvovirus para eliminar células madre cancerígenas (CSC).

Parvovirus para su uso en un método para destruir terapéuticamente células madre cancerígenas (CSC).

Uso de parvovirus para eliminar células madre cancerígenas (CSC)

La presente invención se refiere al uso de un parvovirus, preferiblemente H-1PV para la eliminación terapéutica de células madre cancerígenas (CSC), preferiblemente células madre de neuroblastoma o glioblastoma.

En niños, los tumores que se originan a partir del sistema nervioso son los tumores sólidos más frecuentes. Entre ellos, el neuroblastoma es el tumor sólido extracraneal más frecuente. Se deriva de células progenitoras del sistema nervioso simpático dando como resultado tumores sumamente malignos a lo largo de la cadena simpática. El neuroblastoma de alto riesgo se caracteriza frecuentemente por una amplificación del oncogén MYCN y la sobreexpresión consecutiva de la proteína N-myc. A pesar de la introducción de conceptos de tratamiento multimodal que incluyen cirugía, tratamiento radiofarmacéutico mediante metayodobencilguanidina, quimioterapia de alta dosis con rescate con células madre autólogas, irradiación local y terapia de mantenimiento con ácido retinoico, los pacientes con neuroblastoma de alto riesgo tienen un desenlace extremadamente malo con tasas de supervivencia a largo plazo de aproximadamente el 3%. Estos tumores siguen siendo un reto terapéutico y los niños supervivientes padecen toxicidades tras dosis única y a largo plazo relacionadas con el tratamiento.

Los glioblastomas humanos malignos representan el mayor número de tumores cerebrales malignos humanos. Los enfoques convencionales para el tratamiento de gliomas incluyen técnicas neuroquirúrgicas (procedimientos de resección o estereotácticos), radioterapia y quimioterapia. La radioterapia (RT) de gliomas malignos aumenta la supervivencia de los pacientes en varios meses pero, como otras terapias convencionales, no puede prevenir la recurrencia tumoral. Sin embargo, a pesar de estas terapias, los glioblastomas se consideran incurables, puesto que el tratamiento con radiación ionizante, la quimioterapia y/o la resección quirúrgica sólo logran una prolongación muy limitada de la duración de vida de los pacientes. Normalmente, la duración de vida promedio tras el diagnóstico es del orden de aproximadamente 12 a 16 meses. Por tanto, se requieren urgentemente modalidades de tratamiento novedosas, en particular para neuroblastoma y glioblastoma. Los documentos WO 29/83232, US 24/22124 y Di Piazza Matteo et al, Journal of Virology, Vol. 81, N.° 8, abril de 27, págs. 4186-4198 dan a conocer cada uno el tratamiento de tumores cerebrales tales como glioblastoma con un parvovirus tal como parvovirus H1 o un parvovirus de roedor relacionado. Por tanto, el objeto de la presente invención es proporcionar medios para la terapia eficaz de tumores, preferiblemente neuroblastoma o glioblastoma, que superen las desventajas de las terapias actuales.

Según la invención, esto se logra mediante el contenido definido en las reivindicaciones. Se encontró sorprendentemente que pueden usarse satisfactoriamente parvovirus para la terapia eficaz mediante la destrucción

de células madre cancerígenas.

Los virus oncolíticos son una clase novedosa prometedora de agentes biológicos específicos para células cancerígenas, que infectan y destruyen células transformadas a la vez que respetan los tejidos normales. Además del efecto oncolítico observado tanto in vitro como in vivo, estos virus también proporcionan señales inmunoestimuladoras que inducen la eliminación de células tumorales infectadas por virus. De ese modo, los sistemas inmunitarios innato y adaptativo obtienen el acceso a antígenos tumorales, I I lo que da como resultado efectos de sensibilización cruzada y vacunación. En modelos de neuroblastoma, se ha aplicado una variedad de virus oncolíticos modificados mediante ingeniería genética incluyendo virus de la enfermedad de Newcastle, poliovirus atenuado y virus del herpes simple 1 y 2 oncolíticos.

Se mostró que algunos parvovirus de roedor autónomos destruían preferentemente líneas celulares humanas y de roedores derivadas de tumores y transformadas in vitro, mientras que no se observó ninguna acción citocida en células no transformadas. En particular, se encontró que H-1PV se replica y ejerce efectos citopáticos en una variedad de células transformadas o derivadas de tumores, mientras que las células no transformadas permanecían sin afectar in vitro e in vivo. Los efectos oncolíticos de H-1PV observados se han atribuido a diferentes programas de muerte celular, incluyendo apoptosis, necrosis de las células infectadas o permeabilización de membrana lisosómica, que produce la liberación de catepsinas desde la luz lisosómica al citoplasma. El mecanismo individual mediante la inducción de muerte celular en diferentes tumores malignos parece depender principalmente del contexto celular individual.

H-1PV es un parvovirus sin envuelta pequeño (de 2-25 nm) que contiene un genoma de ADN monocatenario lineal de aproximadamente 5 kb. Su replicación en el núcleo depende estrictamente de factores asociados con la fase S y que se complete el ciclo infeccioso lítico depende enormemente de factores celulares que se expresan como consecuencia de procesos de proliferación y diferenciación. La proteína no estructural NS1 desempeña un papel esencial en el inicio de la replicación parvoviral y en la inducción de su citotoxicidad. Los parvovirus no puede inducir que células quiescentes entren en la fase S, y la infección sigue siendo críptica hasta que las células huésped entran en la replicación de ADN por sí mismas. Esta dependencia de la replicación de las células huésped representa, en parte, la especificidad tisular, oncotropismo y actividad oncolítica de parvovirus de roedores autónomos.

Las ratas son el huésped natural de H-1PV, pero podrían infectarse de manera experimental otros roedores tales

como hámster y Mastomys. Ocasionalmente, se han notificado la infección y seroconversión de seres humanos. H- 1PV parece ser no tóxico en seres humanos, incluso cuando se aplica de manera sistémica. Se han estudiado los efectos oncolíticos de H-1PV in vitro e in vivo sobre una variedad de entidades humanas tales como lineas celulares de linfoma, cáncer de páncreas, glioblastoma, hepatoma y cáncer de mama. Sin embargo, el efecto oncolitico de H- 1PV sobre tumores pediátricos no se había estudiado hasta la fecha.

En los estudios que dieron como resultado la presente invención, se realizó una evaluación preclínica in vitro de la aplicación de H-1PV oncolitico para el tratamiento de células de neuroblastoma. Se analizaron la eficacia de infección, replicación viral y actividad litica de H-1PV en once lineas celulares de neuroblastoma con diferente estado de MYCN. Se confirmó la oncoselectividad del virus mediante la infección de cultivos a corto plazo de células de lactante no malignas de diferente origen. El cultivo mezclado de células de la glía, células neuronales, astrocitos en cultivos a corto plazo no reveló ningún efecto de H-1PV sobre la viabilidad o la morfología de las células. En cambio, se indujo una infección litica en todas las líneas celulares de neuroblastoma examinadas a MOI de entre ,1 y 1 ufp/célula. H-1PV se replicó de manera activa con títulos virales que aumentaron hasta 1. veces en el plazo de 48 a 96 horas tras infección. Se observó el efecto litico de H-1PV independientemente del estado de diferenciación o amplificación del oncogén MYCN. Además, la expresión de proteínas virales en una línea celular de neuroblastoma con MYCN amplificado se correlacionó con la regulación por disminución de la expresión de N-myc. La eficacia de infección, la rápida replicación viral y los efectos Uticos exhaustivos sobre células de neuroblastoma junto con la baja toxicidad de H-1PV para células no transformadas, convierte a este parvovirus en un candidato prometedor para la viroterapia oncolítica de neuroblastoma.

En resumen, los experimentos que dieron como resultado la presente invención muestran que la infección de células madre cancerígenas, por ejemplo, células madre de neuroblastoma, con parvovirus representa una terapia nueva y sumamente eficaz sólo con efectos secundarios muy bajos. Esta clase de terapia es incluso eficaz con respecto a CSC que son resistentes a quimioterapia y radioterapia.

Por tanto, la presente invención proporciona un parvovirus, preferiblemente un parvovirus de roedor para su uso en un método para destruir terapéuticamente células madre cancerígenas (CSC).

El término "células madre cancerígenas (CSC)" tal como se usa en el presente documento se refiere a células cancerígenas (que se encuentran dentro de tumores o cánceres hematológicos) que presenta características asociadas con células madre normales,... [Seguir leyendo]

1. Parvovirus para su uso en un método para destruir terapéuticamente células madre cancerígenas (CSC).

2. Parvovirus para el uso según la reivindicación 1, en el que dichas células madre cancerígenas son (a) células

madre cancerígenas resistentes a quimioterapia o radioterapia, o (b) células madre cancerígenas que pueden producir potencialmente recidiva.

3. Parvovirus para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que dichas células madre cancerígenas son células 1 madre de neuroblastoma o células madre de glioblastoma.

4. Parvovirus para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho parvovirus es H1 (H- 1PV) o un parvovirus de roedor relacionado seleccionado del grupo que consiste en Lulll, virus minúsculo de ratón (MMV), parvovirus de ratón (MPV), virus minúsculo de rata (RMV), parvovirus de rata (RPV) o virus de rata (RV).

5. Parvovirus para el uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho parvovirus se administra mediante administración intravenosa (i.v.), intratumoral, intracraneal o intracerebral.

6. Uso de un parvovirus para la preparación de una composición farmacéutica para destruir CSC.