Una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina y un método para obtener dicha vacuna.

Una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina, que comprende por ml 25 unidades de las repeticiones en toxinas ApxI,

ApxII, ApxIII y una proteína de membrana externa de 42 kD, y el LPS en una cantidad de aproximadamente 5 - 6 x 105 UI/ml, caracterizada por que la vacuna comprende además 30 μg/ml de polimixina B o 5 30 μg/ml de polimixina E.

Una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina y un método para obtener dicha vacuna Descripción La presente invención se refiere a una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina, una enfermedad de distribución mundial que causa unas pérdidas económicas sustanciales a la industria porcina. El agente etiológico de la pleuroneumonía porcina es Actinobacillus pleuropneumoniae (APP) , una bacteria gramnegativa que pertenece a la familia Pasteurellaceae. La enfermedad se transmite por la vía del aerosol o por contacto directo con un cerdo infectado, y se caracteriza por lesiones pulmonares hemorrágicas, fibrinosas y necróticas. El cuadro clínico puede variar desde hiperagudo hasta crónico y los cerdos portadores asintomáticos pueden transmitir la enfermedad cuando son introducidos en piaras no infectadas. Se han descrito 15 serovares según los componentes polisacáridos y los lipopolisacáridos (LPS) de cadena-O capsulares. El serotipado y otros métodos de tipado genético para Actinobacillus pleuropneumoniae han contribuido grandemente a la vigilancia y a los estudios epidemiológicos. Estas herramientas proporcionan información importante para la toma de decisiones en programas de control destinados a la erradicación de los tipos virulentos de la bacteria. En Norteamérica, se describen los serovares 1, 5 y 7 como los más prevalentes, mientras que los serovares 2 y 9 son más aislados más comúnmente en Europa, y el serovar 15 es la cepa predominante de los cerdos australianos.

Los factores de virulencia descritos para A. pleuropneumoniae incluyen los LPS, los polisacáridos capsulares, las toxinas Apx I-IV (las denominadas repeticiones en las toxinas o toxinas RTX) , las proteínas de membrana externa (PMEs) y varios sistemas de adquisición de hierro. Sin embargo, la contribución global de cada componente al proceso de la infección permanece dudosa, al igual que los mecanismos de patogenia de esta bacteria. Casi todas las vacunas disponibles actualmente contra A. pleuropneumoniae son bien de bacterinas de células completas inactivadas o bien de combinaciones de subunidades de toxinas y proteínas Apx, opcionalmente combinadas con fracciones de la membrana externa. En cualquier caso, se ha convertido en comúnmente entendido que para obtener una protección adecuada, preferiblemente entre diferentes serovares, el lipopolisacárido (LPS) tiene que estar presente en una vacuna (Julien Gouré y col. en: BMC Genomics 2009, 10: 88, publicado el 24 de febrero de 2009; Dubreuil y col. en: Animal Health Research Reviews 1 (2) : 73 -93, diciembre de 2000) . Aún más, desde la década de los 80 se sabe que una vacuna basada en lipopolisacárido solo ya tiene un efecto positivo en la reducción del nivel de infección o de los signos clínicos de la enfermedad e induce una protección cruzada (Fenwick y col. en: the American Journal of Veterinar y Research, volumen 47, número 9, septiembre de 1986; Rapp y col. en: Canadian Veterinar y Journal, 1988, volumen 29, número 7, págs.. 585 -587; Rioux y col. en: Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases 20 (1) :63 -74, enero de 1997) .

Una desventaja importante del lipopolisacárido es su naturaleza endotóxica, estando por tanto asociado con múltiples efectos secundarios no deseados tales como letargia, diarrea, vómitos, pérdida de apetito e incluso la muerte. A primera vista es por lo tanto tentador disminuir la cantidad de LPS en una vacuna o destoxificar el LPS. Sin embargo, una vacuna contra la APP adecuada depende de la presencia del LPS y por lo tanto, como se sabe comúnmente, una disminución en la cantidad de LPS disminuye inherentemente la eficacia de la vacuna. Además, se han hecho varios intentos de reducir la naturaleza endotóxica del LPS y aun así llegar a una vacuna efectiva. Rioux y col. (mencionado en el presente documento anteriormente) investigaron el efecto de la destoxificción del LPS sobre la eficacia de una vacuna contra la APP y concluyeron que los ratones inmunizados con LPS (no destoxificado) estaban protegidos, mientras que una vacuna basada en el LPS destoxificado no consiguió proteger a los ratones (véase la página 71 de la publicación de Rioux, tercer párrafo) . Este estudio se repitió en cerdos (Research in Veterinar y Science 1998, 65, 165 -167) . Se demostró que una vacuna bacterina comercial (que contiene el LPS no destoxificado) proporcionó buena protección frente a una prueba con la APP naturalesnatural. Una vacuna basada en el LPS destoxificado pareció ser mucho menos efectiva (el 60 % de los cerdos aún presentaba lesiones pulmonares) . De hecho, esto está en línea con el entendimiento común que cuando el LPS está destoxificado es mucho menos inmunogénico.

El objetivo de la presente invención es proporcionar una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina, que tiene una eficacia comparable a la de las vacunas obtenibles comercialmente, pero que tiene unos síntomas de choque endotóxico significativamente reducidos, en particular que no muestra ningún o casi ningún signo de diarrea, vómitos y respiración incrementada en cerdos después de la administración de una dosis eficaz de la vacuna.

Para este fin, se ha ideado una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina, que comprende por ml 25 unidades de las repeticiones en toxinas ApxI, ApxII, ApIII y una proteína de membrana externa de 42 kD, y el LPS en una cantidad de 5 -6 x 105 UI/ml, caracterizada porque la vacuna además comprende 30 pg/ml de polimixina B o 30 μg/ml de polimixina E. Sorprendentemente se ha encontrado que la destoxificación del LPS mediante una polimixina no tiene un efecto negativo significativo en la inmunogenicidad del LPS, y por lo tanto en la eficacia de la vacuna. Parece que mediante el uso de una polimixina los síntomas del choque endotóxico, tales como diarrea, vómitos y respiración incrementada, se pueden reducir significativamente mientras que se mantiene la eficacia de la vacuna en un nivel adecuado. En particular, parece que la vacuna puede tener incluso la misma eficacia que una vacuna sin polimixina añadida.

Una vacuna en el sentido de la presente invención es una constitución que tiene por objeto prevenir o reducir una infección por un microorganismo o los síntomas clínicos de la enfermedad o el trastorno causado por esa infección a través de la inducción de anticuerpos que interfieren con el microorganismo o con sus procesos metabólicos (ya sea dentro del microorganismo, o inducida por él) en el hospedador. Una vacuna puede contener una subunidad del microorganismo (tal como, por ejemplo, un LPS) como antígeno básico, pero puede comprender también microorganismos completos atenuados o muertos, o por ejemplo, un metabolito del organismo (tal como una toxina excretada) . La vacuna contiene una cantidad inmunológicamente eficaz del antígeno (es decir, una cantidad capaz de estimular el sistema inmunitario del animal objetivo lo suficiente como para al menos reducir los efectos negativos de una prueba con microorganismos natural, normalmente combinado con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como un líquido que contiene agua (a menudo suero salino tamponado con fosfato) , que comprende opcionalmente agentes inmunoestimulantes (adyuvantes) , estabilizantes, modificadores de la viscosidad u otros componentes dependiendo del uso previsto o de las propiedades requeridas de la vacuna. Además, los antígenos adicionales de otros microorganismos pueden estar presentes de tal forma que la vacuna proteja contra múltiples organismos naturales.

Las polimixinas son compuestos con propiedades antibacterianas que se pueden aislar a partir de Bacillus polymyxa (B. aerospora) , o producirse artificialmente, y los compuestos con propiedades antibacterianas derivables directamente de las mismas. Las polimixinas producidas por B. polymyxa tienen una estructura general que consiste en un péptido cíclico con una cola hidrófoba larga. Las polimixinas típicas son: polimixina A (también llamada aerosporina) , polimixina B (a menudo también denominada polimixina) , polimixina E (también llamada colistina) , polimixina M (también conocida como matacina) y el nonapéptido de polimixina.

Se observa que se ha descrito antes que las polimixinas se pueden utilizar para destoxificar lipopolisacáridos con éxito en composiciones inmunogénicas que contienen bacterias gramnegativas. Por ejemplo, Cooperstock y col. desvelan en la revista "Infection and Immunity", de julio de 1981, págs.. 315 -318 que mediante el uso de la polimixina B, disminuía marcadamente la actividad endotóxica de suspensiones de varias bacterias gramnegativas (a saber Bordetella pertussis, Escherichia coli, Haemophilus influenzae y Pseudomonas aeruginosa) . Sin embargo, Cooperstock también observa claramente que "sigue siendo... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna dirigida contra la pleuroneumonía porcina, que comprende por ml 25 unidades de las repeticiones en toxinas ApxI, ApxII, ApxIII y una proteína de membrana externa de 42 kD, y el LPS en una cantidad de aproximadament.

5. 6 x 105 UI/ml, caracterizada por que la vacuna comprende además 30 μg/ml de polimixina B o 30 μg/ml de polimixina E.