Tratamiento de tejido cardiovascular.

Un método para hacer un cóctel cardiogénico, que comprende:

(a) cultivar células endodérmicas ventrales en un medio,

en donde dichas células son obtenidas de un embrión tratado con TNF-alpha con la condición de que el embrión no es un embrión humano;

generando por tanto un medio de cultivo condicionado; y

(b) recolectar el medio de cultivo condicionado, obteniendo por lo tanto un cóctel cardiogénico.

Tratamiento de tejido cardiovascular Antecedentes

1. Campo técnico

Este documento se relaciona con métodos y materiales involucrados en el tratamiento de tejido cardiovascular con, por ejemplo, células madre.

2. Información de antecedentes

Las lesiones del miocardio llevan a pérdidas de cardiomiocitos, remodelación ventricular y consecuente incapacidad del funcionamiento del miocardio. Desafortunadamente, la capacidad mitótica de los cardiomiocitos es demasiado limitada para soportar una regeneración del miocardio adecuada. Además, las modalidades terapéuticas actuales atenúan la progresión de la enfermedad sin contribuir significativamente a la reparación del miocardio.

Las células pluripotentes tales como las células madre de embriones pueden proliferar indefinidamente in vitro y pueden diferenciarse, in vitro, en células que recapitulan el fenotipo cardíaco expresando marcadores cardíacos característicos y demostrando acoplamiento de excitación-contracción funcional. Cuando se trasplantan a corazones lesionados, las células madre de embriones pueden generar cardiomiocitos que repueblan las regiones del miocardio disfuncionales y mejoran el rendimiento contráctil. Las células madres pluripotentes, sin embargo, pueden formar células tumorales una vez retiradas del ambiente hematopoyético original.

Resumen

En lo que sigue, los términos "células de embriones", "células madre" y "células pluripotentes" excluirán las derivadas de la utilización de embriones humanos. La invención se relaciona con una materia tal como se define en las reivindicaciones anexas. Este documento describe métodos y materiales relacionados con el tratamiento de tejido cardiovascular (por ejemplo, tejido del corazón o tejido vascular). Por ejemplo, este documento describe células madre, composiciones que contienen células madre, métodos para obtener células madre, composiciones para generar células madre que expresan marcadores particulares y métodos para reparar tejido cardiovascular. Las células madre y las composiciones que contienen células madre descritas aquí pueden ser utilizadas para reparar tejido cardiovascular. Tales células madre pueden permitir que los médicos traten, por ejemplo, lesiones del miocardio puesto que las células madre pueden tener la capacidad de diferenciarse en cardiomiocitos. En algunos casos, tales células madre y composiciones que contienen células madre pueden ser utilizadas para reparar tejido cardiovascular sin producir tumores dentro del tejido. Las composiciones descritas aquí para generar células madre pueden permitir a los profesionales médicos producir grandes cantidades de células madre que pueden expresar marcadores particulares y pueden ser utilizadas para reparar tejido cardiovascular.

En general, este documento describe un método para tratar tejido del corazón o vascular. El método incluye administrar células madre al tejido del corazón o vascular bajo condiciones en donde las células madre no desarrollan células tumorales en el tejido del corazón o vascular. Las células madre pueden ser inyectadas en el corazón de un mamífero (por ejemplo un humano). Las células madre pueden ser células madre de embriones o células madre que expresan uno o más polipéptidos listados en la tercera columna de la Tabla 1. Las células madre pueden ser inyectadas en una cantidad menor de aproximadamente 15 células madre por mg de tejido de corazón o vascular. El tejido de corazón o vascular puede ser tejido que fue puesto en contacto con TNF-a, TGF-p o y-interferón. El método puede incluir poner en contacto el tejido de corazón o vascular con TNF-a, TGF-p o Y-¡nterferón. Esta etapa de contacto puede ocurrir antes, durante o después de que las células madre son administradas.

Las células madre de embrión pueden ser administradas al tejido del corazón o al tejido vascular de tal forma que no se desarrollen tumores. Por ejemplo, pueden necesitarse menos de 1 células madre de embrión por 1 mg de tejido en un mamífero (por ejemplo, humano, primate, caballo, perro, gato, cerdo, vaca o roedor). En algunos casos, pueden administrarse aproximadamente 5 a 15 células (por ejemplo, 1 a 15, 2 a 15, 5 a 15, 2 a 1, o 5 a 1 células) por 1 mg de tejido de corazón a un mamífero sin riesgo de desarrollar tumores. Cuando se inyectan células madre de embrión en un ratón, cuyo corazón pesa aproximadamente 3 mg, pueden administrarse 3 x 15 células. Al inyectar 33 células por 1 mg de tejido de corazón puede dar como resultado un 15% de riesgo de tumor, mientras que al inyectar 1 células por 1 mg de tejido de corazón puede dar como resultado un 72% de riesgo de tumor.

Este documento describe adicionalmente una células madre que expresa (a) al menos un polipéptido seleccionado del grupo consistente de Oct4; DEK; BRCA1; Ect2; y MYC; (b) al menos un polipéptido seleccionado del grupo consistente de

Fosb; NRAP; MEF2A; Furin; TGF(B1; receptora de fibronectina; receptor 1 del dominio de discoidina; bag2; proteína rica en cisteína; CUGBP2; NDRG4; proteína 1 inhibidora de CBP/p3; proteína 1 inducible por interferón; tropomiosina 1, alfa; proteína 1 activadora de Rho GTPasa; carboxipeptidasa D; profilina 2; transcripto inducido por el factor beta 1 de crecimiento transformante; tropomiosina 1, alfa; receptor de la hormona de crecimiento; vinculina; adenilato ciclasa 6; proteína A1 de enlazamiento de calcio S1; tropomiosina 2, beta; proteína 1 de enlazamiento del retinol, celular; Moesina; matriz de metaloproteinasa 2; glicoproteína rica en cisteína ácida secretada; manosidasa 1, alfa; lectina, de enlazamiento a galactosa, soluble 1; proteína A6 de enlazamiento a calcio S1 (calciclina); epóxido hidrolasa 1, microsómico; gen similar a adenoma pleiomórfico 1; factor de crecimiento 2 similar a insulina; proteína 4 similar a proteína Tubby; proteína prion; proteína 1 de enlazamiento a FK56; ciclina D2; reticulocalbina 3, dominio de enlazamiento a calcio del lado EF; selenoproteína M; inhibidor 1A de quinasa dependiente de ciclina (P21); caldesmon 1; integrina beta 1 (beta receptor de fibronectina); transcobalamina 2; anexina A2; inhibidor 1A de quinasa dependiente de ciclina (P21); trombospondina 1; monocito para macrófago asociado a la diferenciación; receptor AXL de tirosina quinasa; anexina A5; similar enlazador a músculos 2; anexina A1; procolágeno, tipo IV, alfa 1; calpaina 2; proteína 1 de membrana epitelial; proteasa serina, 11; tropomiosina 2, beta; lectina, enlazamiento a galactosa, soluble 9; y anexina A3; y (c) al menos un polipéptido seleccionado del grupo consistente de proteína 2A de membrana integral; proteína de enlazamiento al factor de crecimiento similar a insulina 4; antígeno 1 de células del timo, theta; selenoproteína P, plasma, 1; glicoproteína 38; sustrato 8 de la ruta del receptor del factor de crecimiento epidérmico; proteína 1A de choque cardiaco; proteína 1 de enlazamiento del ácido retinoico celular; y 8 específico para placenta; la célula madre puede tener 2, 3, 4 o más de los polipéptidos listados en cada grupo. La célula madre puede expresar los polipéptidos listados en la tercera columna de la Tabla 1. Este documento caracteriza adicionalmente la progenie de estas células madre.

Además, se describen células madre, en donde las células madre exhiben traslocación nuclear de los factores de transcripción cardíaca tales como NKX2.5, Mes2C, y GATA4; y en donde las células madre no comprenden proteínas sarcoméricas tales como anexina A6, factor del crecimiento del tejido conectivo, Smad6, canal de Na+, tipo L canal de Ca2+, Ca2+ATPasa, MLC2V, MLC2a, l-MHC, l-actina, l-actinina, troponina T2, o titina.

Este documento describe adicionalmente una composición (esto es un cóctel cardiogénico) que contiene TGF-(31; TGF-(32; BMP-1; BMP-2; BMP-5; BMP-6; FGF-4; FGF-5; FGF-12; FGF-13; FGF-15; FGF-2; factor inhibidor de leucemia; VEGF-C; factor 1 de crecimiento de insulina; e interleucina 6. El cóctel cardiogénico puede contener caspase-4; ligando 1 de quimioquina; ligando 2 de quimioquina; ligando 5 de quimioquina; ligando 7 de quimioquina; ligando 11 de quimioquina; ligando 2 de quimioquina; haptoglobina; factor estimulante de colonias 1; lectina; colesterol 25-hidroxilasa; sintaxina-8; sintaxina-11; ceruloplasmina; componente complementario 1; componente complementario 3; factor de crecimiento derivado de plaquetas; integrina alfa 6; lipasa 1 ácida lisosómica; -2 microglobulina; ubiquitina; factor inhibidor de la migración de macrófagos; ácido retinoico; cofilina; ciclofilina A; FKBP12; NDPK; profilina 1; cistatina C; calciclina, o cualquier combinación de los anteriores. El cóctel cardiogénico, bajo exposición a células madres de embriones, puede producir que las células madre de... [Seguir leyendo]

1. Un método para hacer un cóctel cardiogénico, que comprende:

(a) cultivar células endodérmicas ventrales en un medio, en donde dichas células son obtenidas de un embrión tratado con TNF-alpha con la condición de que el embrión no es un embrión humano;

generando por tanto un medio de cultivo condicionado; y

(b) recolectar el medio de cultivo condicionado, obteniendo por lo tanto un cóctel cardiogénico.

2. El método de la reivindicación 1, que comprende adicionalmente: agregar uno o más componentes a dicho cóctel cardiogénico, en donde dichos uno o más componentes son seleccionados del grupo consistente de IGF-1, IL-6, FGF-4, TGF-|B, BMP, LIF y ha-trombina.