Quimioterapia e inmunoterapia simultáneas.

Un péptido EGFRvIII y temozolomida o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable para su uso en el tratamiento de un tumor en un sujeto,

en donde el péptido EGFRvIII comprende de 10 a 30 aminoácidos de la proteína EGFRvIII y abarca el punto de unión de empalme mutado de la proteína EGFRvIII.

Quimioterapia e inmunoterapia simultáneas

Campo técnico de la invención La presente invención se refiere al área de inmunoterapia del cáncer. En particular, se refiere a mejorar la respuesta a vacunas tumorales.

Antecedentes de la invención A pesar de la resección quirúrgica agresiva, la radioterapia enfocada en dosis altas, y la quimioterapia, los pacientes diagnosticados de GBM tienen una supervivencia media de menos de 15 meses después de la diagnosis (Stupp et al., Optimal role of temozolomide in the treatment of glioma malignos. Curr Neurol Neurosci Rep. 2005 May; 15 5 (3) :198-206) . El fracaso de la terapia puede atribuirse, al menos en parte, a un índice terapéutico relativamente estrecho de manera que los intentos de aumento escalonado de la dosis dan lugar a una toxicidad sistémica o neurológica limitante de la dosis. El uso de inmunoterapia ha sido prometedor para el posible tratamiento de estos tumores pero, hasta hace poco, unos cuantos han demostrado una eficacia clínica. Diversos ensayos clínicos, con pacientes seleccionados, que implican la vacunación de pacientes con glioma con células dendríticas (CD) y, o bien péptidos eluídos con ácido (Ashkenazi et al., A selective impairment of the IL-2 system in lymphocytes of patients with glioblastomas: increased level of soluble IL-2R and reduced protein tyrosine phosphor y lation. Neuroimmunomodulation. 1997; Kolenko et al., Tumor-induced suppression of T lymphocyte proliferation coincides with inhibition of Jak3 expression and IL-2 receptor signaling: role of soluble products from human renal cell carcinomas. J Immunol. 15 sep. 1997; 159 (6) :3057-67; Liau et al., Dendritic cell vaccination in glioblastoma patients 25 induces systemic and intracranial T-cell responses modulated by the local central nervous system tumor microenvironment. Clin Cancer Res. 1 de agosto 2005 (15) :5515-25) , o un péptido específico de antígeno (Heimberger AB, Archer GE, et al., Dendritic cells pulsed with a tumor-specific peptide induce long-lasting immunity and are effective against murine intracerebral melanoma. Neurosurger y . Ene. 2002; 50 (1) :158-64; análisis 164-6) han resultado esperanzadoras al aumentar el tiempo de supervivencia medio a un intervalo de 20 a 31 meses. Así mismo, en un ensayo clínico de fase II completado recientemente que utilizó un enfoque inmunoterapéutico específico de antígeno, el tiempo de progresión (TTP, por sus siglas en inglés) en pacientes con GBM se retrasó a 15 meses, lo que contrasta notablemente con el protocolo que consiste en radioterapia y temozolomida que tenía un TTP de 7 meses (Stupp et al., 2005, supra) , y la supervivencia media fue de 29 meses (Heimberger et al, J Transl Med. 19 oct 2005; 3:38 The natural histor y of EGFR and EGFRvIII in glioblastoma patients.) . De forma acumulativa,

estos ensayos de inmunoterapia sugieren que, a pesar de la inmunosupresión intrínseca de pacientes con glioma maligno, pueden generarse respuestas inmunitarias eficaces. Sin embargo, existe una reticencia a no tratar a los pacientes que padecen GBM con alguna forma de quimioterapia dado el protocolo recientemente establecido y el pronóstico global precario.

Existe una necesidad continua en la materia de desarrollar métodos mejores para tratar tumores en general y glioblastomas en particular.

Sumario de la invención 45 Se proporciona un método para tratar un tumor en un sujeto según se define en las reivindicaciones adjuntas.

Estas y otras realizaciones que resultarán obvias para los expertos en la materia una vez leídas las especificaciones, proporcionan a la materia métodos adicionales para tratar tumores refractarios al tratamiento.

Descripción detallada de la invención La administración simultánea de quimioterapia e inmunoterapia se ha considerado una contraindicación por la preocupación de que la linfopenia inducida por quimioterapia eliminaría la eficacia terapéutica de la inmunoterapia. Se ha demostrado que la temozolomida es una quimioterapia efectiva para los pacientes con gliomas malignos y que 55 eliminar este agente en los pacientes con glioblastoma (GBM) para tratar con inmunoterapia es discutible. A pesar del dogma convencional, los inventores demuestran que tanto la quimioterapia como la inmunoterapia pueden proporcionarse simultáneamente sin negar los efectos de la inmunoterapia. De hecho, la linfopenia inducida por quimioterapia puede actuar efectivamente de modo sinérgico con una vacuna peptídica. Si bien los solicitantes no desean vincularse a ninguna teoría en particular relativa al mecanismo de acción, la sinergia observada puede ser menos importante que la inhibición de células Treg o el hecho de no recuperar células Treg, lo que permite un aumento de linfocitos T CD8+ citotóxicos efectoros. Existen otros mecanismos que también pueden participar.

La "EGFRvIII" o "Mutación del Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico III" es una forma mutante conocida del Receptor del Factor de Crecimiento Epidérmico. Véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos Nº 65 6.503.503.; véanse también las patentes de Estados Unidos Nos 6.900.221, 6.673.602, 6.479.286 y 6.129.915. La mutación que causa la producción de la proteína vIII se suele caracterizar por una supresión en fase específica de

tumor de 801 pares de bases del dominio extracelular que divide un codón y produce una glicina nueva en el punto de unión.

El "péptido EGFRvIII", según se utiliza en el presente documento, se refiere a un péptido de longitud adecuada, es decir, al menos 10 o 12 aminoácidos, y hasta 16, 20 o 30 aminoácidos, que abarca el punto de unión mutado de la correspondiente proteína EGFRvIII. Algunos ejemplos incluyen, a modo meramente enunciativo, H-LF-EKKGNYVVTDHS-OH, o "PEP-3." El péptido EGFRvIII puede venir del (o corresponder en secuencia al) EGFRvIII de cualquier especie de mamífero, pero es preferentemente de ser humano. En las SEC ID Nos: 6 a 9 se muestran secuencias de tipo silvestre específicas de EGFR.

"Proteína portadora", según se utiliza en el presente documento, se refiere a una proteína que no posee una alta homología con una proteína encontrada en la especie que está recibiendo una composición de la invención y suscita una respuesta inmunitaria. Una proteína posee una alta homología si es idéntica al 75 % como mínimo, más preferentemente idéntica al 85 % como mínimo, o idéntica al 90 % como mínimo, a una proteína determinada por

cualquier algoritmo matemático conocido utilizado para la comparación de dos secuencias de aminoácidos (véase, por ejemplo, Karlin y Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268; Karlin y Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877; Torellis y Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10: 3-5; y Pearson y Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. 85: 2444-8) . Preferentemente, la identidad porcentual de las dos secuencias de aminoácidos se determina mediante búsquedas de proteínas BLAST con el programa XBLAST, puntuación=50, longitud de palabra=3. Algunos ejemplos de proteínas vehículo heterólogas incluyen, a modo meramente enunciativo, KLH, PhoE, mLT, TraT, o gD del virus BhV-1. Véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos nº 6.887.472. Dichas proteínas vehículo pueden conjugarse o se al antígeno tumoral directamente o mediante un segmento engarzador intermedio, tal como una cadena de uno o más (por ejemplo, 2, 4, 6) aminoácidos intermedios (por ejemplo, un resto CYS intermedio) , de acuerdo con las técnicas conocidas.

La "KLH" o "hemocianina de lapa californiana" es una proteína vehículo conocida con la que puede conjugarse otra proteína de acuerdo con las técnicas conocidas. Véase, por ejemplo la patente de Estados Unidos Nº 6.911.204.

"Adyuvante", según se utiliza en el presente documento, se refiere a cualquiera de una clase distinta de compuestos que mejoran la eficacia terapéutica de una vacuna que se administra simultáneamente con el adyuvante. En algunas realizaciones el adyuvante es un factor de crecimiento hematopoyético tal como GM- CSF. Algunos ejemplos habituales de adyuvantes incluyen, a modo meramente enunciativo, emulsiones de hidróxido, fosfato u óxido de aluminio, de aceite en agua o de agua en aceite basadas en, por ejemplo, un aceite mineral tal como Bayol Fo o Marcol 52TM, o un aceite vegetal tal como acetato de vitamina E, saponinas, BCG, M vaccae, toxoide tetánico,

toxoide diftérico, Bordetella pertussis, interleucina 2, interleucina 12, interleucina 4, interleucina 7, Adyuvante Completo de Freund, Adyuvante Incompleto de Freund, y un adyuvante no específico. Véase, por ejemplo la patente de Estados Unidos Nº 6.699.483.

Los "factores de crecimiento hematopoyético" o "FCH" son conocidos. Véase, por ejemplo... [Seguir leyendo]

1. Un péptido EGFRvIII y temozolomida o una sal de la misma farmacéuticamente aceptable para su uso en el

tratamiento de un tumor en un sujeto, en donde el péptido EGFRvIII comprende de 10 a 30 aminoácidos de la 5 proteína EGFRvIII y abarca el punto de unión de empalme mutado de la proteína EGFRvIII.

2. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido EGFRvIII y la temozolomida se encuentran en distintas formulaciones.

3. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido EGFRvIII es un componente de una vacuna antitumoral.

4. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido EGFRvIII está conjugado con hemocianina de lapa californiana (KLH) . 15

5. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 y 4, en donde el péptido EGFRvIII es para administrar simultáneamente con GM-CSF.

6. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido 20 EGFRvIII tiene la secuencia H- LEEKKGNYVVTDHS-OH (SEC ID NO: 1) .

7. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido EGFRvIII tiene la secuencia LEU-GLU- GLU-LYS-LYS-GLY-ASN-TYR-VAL-VAL-THR-ASP-HIS (SEC ID NO: 2) .

8. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el péptido EGFRvIII tiene la secuencia LEU-GLU-GLU-LYS-LYS-GLY-ASN-TYR-VAL-VAL-THR-ASP-HIS-CYS (SEC ID NO: 3) , y en donde la KLH está conjugada con el resto de CYS.

9. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el péptido 30 EGFRvIII está conjugado con la KLH con un reticulante heterobifuncional.

10. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el reticulante heterobifuncional es sulfosuccinimidil 6-[31’ (2-piridilditio) -propionamido] hexanoato.

11. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el tumor es un glioma maligno.

12. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5,

en donde el tumor es un astrocitoma. 40

13. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el tumor es un tumor de pulmón.

14. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, 45 en donde el tumor es un tumor de mama.

15. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el tumor es un cáncer de cabeza y cuello.

16. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde la vacuna antitumoral comprende adicionalmente un antígeno aislado.

17. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde la vacuna antitumoral comprende adicionalmente células tumorales destruidas. 55

18. El péptido EGFRvIII y la temozolomida para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en donde la vacuna antitumoral comprende adicionalmente una fracción de células tumorales.

19. Un péptido EGFRvIII para su uso en combinación con temozolomida o una sal de la misma farmacéuticamente

aceptable para tratar un tumor en un sujeto, en donde el péptido EGFRvIII comprende de 10 a 30 aminoácidos de proteína EGFRvIII y abarca el punto de unión de empalme mutado de la proteína EGFRvIII.

20. El péptido EGFRvIII para su uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el péptido EGFRvIII tiene la secuencia LEU-GLU-GLU-LYS-LYS-GLY-ASN-TYR-VAL-VAL-THR-ASP-HIS-CYS (SEC ID NO: 3) y en el que la 65 KLH está conjugada con el resto de CYS.

21. El péptido EGFRvIII para su uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el tumor es un glioma maligno.