Procedimiento novedoso de prevención o tratamiento de infección por M. tuberculosis.

Una composición farmacéutica que comprende:

(i) una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis y un adyuvante,

o

(ii) un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis;

para su uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

Procedimiento novedoso de prevención o tratamiento de infección por M. tuberculosis Campo de la invención La presente invención se refiere a procedimientos para reducir el curso del tiempo de la quimioterapia contra una infección por M. tuberculosis.

Antecedentes de la invención La tuberculosis es una enfermedad infecciosa crónica causada por la infección con M. tuberculosis y otras especies de Mycobacterium. Es una enfermedad principal en los países en desarrollo, así como un problema creciente en las áreas desarrolladas del mundo, con aproximadamente 8 millones de nuevos casos y 3 millones de muertes cada año. Aunque la infección puede ser asintomática durante un período de tiempo considerable, la enfermedad se manifiesta más comúnmente como una inflamación aguda de los pulmones, dando como resultado fiebre y una tos no productora. Si no se trata, resultan típicamente complicaciones graves y la muerte.

Aunque la tuberculosis se puede controlar en general empleando terapia prolongada con antibióticos, este tratamiento no es suficiente para evitar la propagación de la enfermedad. Los individuos infectados pueden ser asintomáticos, pero contagiosos, durante algún tiempo. Además, aunque es crítico el cumplimiento con el régimen de tratamiento, es difícil monitorear el comportamiento del paciente. Algunos pacientes no terminan el periodo de tratamiento, lo que puede conducir a un tratamiento inefectivo y al desarrollo de resistencia a los fármacos. Inclusive cuando se ha terminado un curso completo de tratamiento, la infección con M. tuberculosis no se erradica del individuo infectado, sino que permanece como una infección latente que se puede reactivar.

Con el objeto de controlar la propagación de la tuberculosis, es de primordial importancia una vacunación efectiva y un diagnóstico precoz preciso de la enfermedad. En la actualidad, la vacunación con bacterias vivas es el procedimiento más eficiente para inducir una inmunidad protectora. La micobacteria más común empleada para este propósito es Bacillus Calmette-Guerin (BCG) , una cepa avirulenta de M. bovis. Sin embargo, la seguridad y eficacia de BCG es una fuente de controversia y algunos países, tales como los Estados Unidos, no vacunan al público en general con este agente.

El diagnóstico de la tuberculosis se logra comúnmente utilizando una prueba de piel, que involucra la exposición intradérmica a la tuberculina PPD (derivado purificado de proteína) . Las respuestas de las células-T específicas del antígeno dan como resultado una induración mensurable en el sitio de inyección a las 48-72 horas después de la inyección, lo que indica la exposición a los antígenos micobacterianos. Sin embargo, la sensibilidad y la especificidad han sido un problema con esta prueba y los individuos vacunados con BCG no se pueden distinguir de los individuos infectados.

Aunque se ha demostrado que los macrófagos actúan como los efectores principales de la inmunidad a Mycobacterium, las células-T son los inductores predominantes de esta inmunidad. El papel esencial de las células-T en la protección contra la infección por Mycobacterium se ilustra por la frecuente aparición de infección por Mycobacterium en los pacientes de SIDA, debido al agotamiento de las células-T CD4+ asociado con la infección por el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) . Se ha demostrado que las células-T CD4+ que reaccionan con Mycobacterium son potentes productores del interferón- (IFN-) , que, a su vez, se ha demostrado que desencadena los efectos anti-micobacterianos de los macrófagos en los ratones. Aunque está menos claro el papel del IFN- en los seres humanos, los estudios han demostrado que la 1, 25-dihidroxi-vitamina D3, ya sea sola o en combinación con IFN- o con el factor de necrosis tumoral-alfa, activa los macrófagos humanos para inhibir la infección por M. tuberculosis. Adicionalmente, se sabe que el IFN- estimula los macrófagos humanos para hacer la 1, 25-dihidroxivitamina D3. De una manera similar, se ha demostrado que la interleucina-12 (IL-12) tiene un papel en el estímulo de la resistencia a la infección por M. tuberculosis. Para una revisión de la inmunología de la infección por M. tuberculosis, véase Chan y Kaufmann, Tuberculosis: Pathogenesis, Protection and Control (Bloom, editor, 1994) , Tuberculosis (2ª edición, Rom y Garay, editores, 2003) y Harrison's Principles of Internal Medicine, Capítulo 150, páginas 953-966 (16ª edición, Braunwald y colaboradores, editores, 2005) .

Brandt y colaboradores Infection and Immunity 2004 72 (11) : 6622-6632 muestra como el efecto protector de la vacuna de Mycobacterium bovis BCG se puede incrementar por coadministración con la Mtb72F en cobayas.

Descripción de las secuencias enumeradas

SEC ID Nº :1: Mtb72f con etiqueta 6 His N-terminal (ADN) .

SEC ID Nº :2: Mtb72f con etiqueta 6 His N-terminal (proteína) .

SEC ID Nº :3: M72 (variante de Mtb72f) con inserción de 2 His N-terminal (ADN) .

2

SEC ID Nº :4: M72 (variante de Mtb72f) con inserción de 2 His N-terminal (proteína) .

SEC ID Nº :5: Mtb72f sin inserción de His N-terminal (ADN) .

SEC ID Nº :6: Mtb72f sin inserción de His N-terminal (proteína) .

Breve sumario de la invención La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma, de una especie de Mycobacterium del complejo de tuberculosis junto con uno o más adyuvantes, incluyendo AS01B y AS02A, para uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

También se proporciona una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma, de una especie de Mycobacterium del complejo de tuberculosis para uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

Las composiciones se pueden emplear en procedimientos para reducir el tiempo de la quimioterapia contra una infección por M. tuberculosis. Al reducir el tiempo de la quimioterapia contra una infección por M. tuberculosis, los procedimientos también son efectivos para mejorar la conformidad de un individuo que esté siendo tratado por una infección por M. tuberculosis, en la realización de un periodo entero de tratamiento.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra una representación gráfica del modelo de reactivación de M. tuberculosis en ratones Swiss Webster (SWR/J) . La figura muestra los puntos del tiempo para la infección, el tratamiento con quimioterapia (50 miligramos de rifampina/85 miligramos de isoniazida por litro del agua para beber) , las inmunizaciones y la enumeración de la carga bacteriana/las unidades formadoras de colonias (CFU) .

La Figura 2 muestra las respuestas inmunes de los anticuerpos IgG1 e IgG2a en ratones SWR/J infectados con M. tuberculosis tratados con quimioterapia y luego inmunizados con Mtb72f. Los ratones se dejaron sin tratamiento, se trataron con quimioterapia (50 miligramos de rifampina/85 miligramos de isoniazida por litro del agua potable) , o bien se trataron con quimioterapia y se inmunizaron tres veces intramuscularmente con 8 microgramos por dosis de Mtb72f formulada sin adyuvante. 10 días después de la última inmunización, los ratones se sangraron y se probaron los sueros para determinar la respuesta del anticuerpo anti-Mtb72f para ambos isótopos IgG1 (rojo) e IgG2a (negro) mediante ELISA.

La Figura 3 muestra las respuestas inmunes de los anticuerpos IgG1 e IgG2a en los ratones SWR/J infectados por M. tuberculosis tratados con quimioterapia y luego inmunizados con Mtb72f. Los ratones se dejaron sin tratamiento, se trataron con quimioterapia (50 miligramos de rifampina/85 miligramos de isoniazida por litro del agua potable) , o se trataron con quimioterapia y se inmunizaron tres veces intramuscularmente con 8 microgramos por dosis de Mtb72f formulada con el adyuvante AS01B. 10 días después de la última inmunización, los ratones se sangraron y se probaron los sueros para determinar la respuesta del anticuerpo anti-Mtb72f para ambos isótopos IgG1 (rojo) e IgG2a (negro) mediante ELISA.

La Figura 4 muestra las respuestas del interferón-gamma (IFN-) en los ratones SWR/J infectados por M. tuberculosis tratados con quimioterapia y luego inmunizados con Mtb72f. Se obtuvieron células de bazo de los ratones en diferentes puntos del tiempo y se estimularon in vitro durante 3 días con 10 microgramos/mililitro ya sea de rMtb72f o bien de los componentes (Mtb32C y Mtb39) , como se indica. Como... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende:

(i) una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis y un adyuvante, o

(ii) un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis;

para su uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis y un adyuvante, para su uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis para uso como un medicamento para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

4. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que la Mtb72f es un polipéptido que comprende residuos 8-729 de la SEC ID Nº : 2.

5. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que la Mtb72f es un polipéptido que comprende residuos 4-725 de la SEC ID Nº : 4.

6. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que el adyuvante es seleccionado del grupo que consiste e.

3. MPL y QS21 en una formulación de liposomas .

3. MPL y QS21 y una emulsión de aceite en agua.

7. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 2, en la que los uno o más agentes quimioterapéuticos son seleccionados de isoniazida y rifampicina.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, para su uso en prevenir o tratar reactivación de tuberculosis en un mamífero ya infectado con Mycobacterium tuberculosis.

9. Uso de:

(i) una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis y un adyuvante, o

(ii) un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis;

en la fabricación de una composición farmacéutica para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

10. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, de una proteína de fusión de Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis y un adyuvante en la fabricación de una composición farmacéutica para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, de un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis en la fabricación de una composición farmacéutica para administración con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en la Mtb72f es un polipéptido que comprende residuos 8-729 de SEC ID Nº : 2.

13. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en la Mtb72f es un polipéptido que comprende residuos 4-725 de SEC ID Nº : 4.

14. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el adyuvante es seleccionado del grupo que consiste e.

3. MPL y QS21 en una formulación de liposomas .

3. MPL y QS21 y una emulsión de aceite en agua. 59

15. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el uno o más agentes quimioterapéuticos son seleccionados de isoniazida y rifampicina.

16. El uso de acuerdo con la reivindicación 9, de un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión Mtb72f o un fragmento inmunógeno de la misma de una especie de Mycobacterium del complejo de la tuberculosis en la fabricación de una composición farmacéutica para prevención o tratamiento de reactivación de tuberculosis en un mamífero ya infectado con Mycobacterium tuberculosis con uno o más agentes quimioterapéuticos efectivos contra una infección por M. tuberculosis.

Figura 4A

días de tratamiento SWR Medio Días después de la infección Figura 4B

días de tratamiento SWR Mtb72f

Días después de la infección Figura 4C

días de tratamiento SWR conA

Días después de la infección Figura 4D

días de tratamiento SWR MtbH9

Días después de la infección Figura 4E

días de tratamiento SWR PPD

Días después de la infección Figura 4F

días de tratamiento SWR MtbRa12

Días después de la infección Figura 4G

días de tratamiento SWR Lisado de BCG

Días después de la infección Figura 5A

días de tratamiento, 72f + ASO1B SWR

Medio Días después de la infección Figura 5B

días de tratamiento, 72f + ASO1B SWR

Mtb72f

Días después de la infección Figura 5C

días de tratamiento, 72f + ASO1B SWR

conA

Días después de la infección Figura 5D

días de tratamiento, 72f + ASO1B SWR

MtbRa12

Días después de la infección Figura 5E

días de tratamiento SWR PPD

Días después de la infección Figura 5F

días de tratamiento SWR MtbTbH9

Días después de la infección Figura 5G

días de tratamiento SWR Lisado de BCG

Días después de la infección