Prevención y tratamiento de afecciones oculares asociadas con el complemento.

Un anticuerpo antagonista anti-Factor D o un fragmento de unión a antígeno del mismo para uso en un método para la prevención o el tratamiento de una afección ocular asociada con el complemento en un ser humano,

en donde el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno son:

(i) anticuerpo 20D12 que tiene las secuencias de cadena ligera y pesada mostradas en SEC ID Nº 1 y 2 o un fragmento de unión a antígeno del mismo; o

(ii) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que compite en un ensayo de bloqueo cruzado con el anticuerpo de (i) por la unión con el epítopo con el que se une el anticuerpo de (i) y que se une con el sitio activo del Factor D y/o se une con un epítopo que incluye restos de sitios activos del Factor D.

Prevención y tratamiento de afecciones oculares asociadas con el complemento Campo de la invención

La presente invención se refiere a la prevención y el tratamiento de afecciones oculares asociadas con el complemento, tales como neovascularización coroidal (NVC) y degeneración macular relacionada con la edad (DME).

Antecedentes de la invención

El sistema de complemento es una cascada enzimática compleja compuesta de una serie de glucoproteínas del suero, que existen normalmente en forma proenzimática, inactiva. Dos rutas principales, la ruta clásica y la alternativa, pueden activar el complemento, que se fusionan al nivel de C3, donde dos convertasas C3 similares escinden C3 en C3a y C3b.

Los macrófagos son células especialistas que han desarrollado una capacidad innata para reconocer diferencias sutiles en la estructura de marcadores de identificación expresados en la superficie celular, denominados patrones moleculares (Taylor, et al., Eur J Immunol 33, 29-297 (23); Taylor, et al., Annu Rev Immunol 23, 91-944 (25)). Aunque el reconocimiento directo de estas estructuras de superficie es un aspecto fundamental de la inmunidad innata, la opsonización permite que los receptores de macrófagos genéricos medien en el atrapamiento, aumentando la eficacia y diversificando el repertorio de reconocimiento del fagocito (Stuart y Ezekowitz, Immunity 22, 539-55 (25)). El proceso de fagocitosis implica múltiples interacciones ligando-receptor, y está claro ahora que diversas opsoninas, incluyendo inmunoglobulinas, colectinas y componentes del complemento, guían las actividades celulares requeridas para la internalización del patógeno mediante interacción con receptores de superficie celular de macrófagos (revisado en Aderem y Underhill, Annu Rev Immunol 17, 593-623 (1999); Underhill y Ozinsky, Annu Rev Immunol 2, 825-852 (22)). Aunque las inmunoglobulinas naturales codificadas por genes de línea germinal pueden reconocer una amplia serie de patógenos, la mayoría de la opsonización IgG se genera mediante inmunidad adaptativa, y por lo tanto la eliminación eficaz mediante receptores de Fe no es inmediata (Carroll, Nat Immunol 5, 981-986 (24)). El complemento, por otro lado, reconoce rápidamente moléculas de superficie de patógenos y prepara la partícula para su captación por receptores del complemento (Brown, Infect Agents Dis 1,63-7 (1991)).

El complemento consiste en más de 3 proteínas del suero que opsonizan una amplia serie de patógenos para su reconocimiento por receptores del complemento. Dependiendo del desencadenante inicial de la cascada, pueden distinguirse tres rutas (revisadas en Walport, N Engl J Med 344, 158-166 (21)). Las tres comparten la etapa común de activar el componente central C3, pero difieren según la naturaleza del reconocimiento y las etapas bioquímicas iniciales que conducen a la activación de C3. La ruta clásica se activa por anticuerpos unidos a la superficie del patógeno, que a su vez se unen con el componente de complemento C1q, desencadenando una cascada de serina proteasa que en última instancia escinde C3 en su forma activa, C3b. La ruta de lectina se activa después de reconocimiento de motivos de carbohidratos por proteínas lectina. Hasta la fecha, se han identificado tres miembros de esta ruta: las lectinas de unión a mañosa (MBL), la familia de SIGN-R1 de lectinas y las ficolinas (Pyz et al., Ann Med 38, 242-251 (26)). Tanto las MBL como las ficolinas están asociadas con serina proteasas, que actúan como C1 en la ruta clásica, activando los componentes C2 y C4 lo que conduce a la etapa C3 central. La ruta alternativa contrasta con las rutas tanto clásicas como de lectina porque se activa debido a una reacción directa del éster C3 interno con motivos de reconocimiento en la superficie del patógeno. La unión de C3 inicial con una superficie activadora conduce a amplificación rápida de la deposición de C3b mediante la acción de las proteasas de ruta alternativa Factor B y Factor D. Resulta importante que C3b depositada por la ruta clásica o la lectina también puede conducir a amplificación de la deposición de C3b mediante las acciones de los Factores B y D. En las tres rutas de la activación del complemento, la etapa clave en la opsonización es la conversión del componente C3 a C3b. La escisión de C3 por enzimas de la cascada del complemento expone el tioéster a un ataque nucleófilo, permitiendo la unión covalente de C3b en superficies de antígenos mediante el dominio de tioéster. Esta es la etapa inicial en la opsonización del complemento. La proteólisis posterior del C3b unido produce iC3b, C3c y C3dg, fragmentos que se reconocen por receptores diferentes (Ross y Medof, Adv Immunol 37, 217-267 (1985)). Esta escisión anula la capacidad de C3b para amplificar adicionalmente la deposición de C3b y activar los componentes tardíos de la cascada del complemento, incluyendo el complejo de ataque membrana, capaz de dirigir el daño de membrana. Sin embargo, los receptores fagocíticos de macrófagos reconocen C3b y sus fragmentos preferentemente; debido a la versatilidad de la formación de enlace éster, la opsonización mediada por C3 es central para el reconocimiento de patógenos (Holers et al., Immunol Today 13, 231-236 (1992)), y los receptores de los diversos productos de degradación de C3 desempeñan por lo tanto un papel importante en la respuesta inmunitaria del hospedador.

C3 en sí misma es una proteína compleja y flexible que consiste en 13 dominios distintos. El núcleo de la molécula está compuesto de 8 dominios llamados de macroglobulina (MG), que constituyen las cadenas a y P estrechamente empaquetadas de C3. En esta estructura están insertos los dominios CUB (proteína morfogenética del Hueso y Uegf

C1r/C1s-1) y TED, conteniendo estos últimos el enlace tioéster que permite la asociación covalente de C3b con superficies de patógenos. Los dominios restantes contienen C3a o actúan como enlazadores y espaciadores de los dominios del núcleo. La comparación de las estructuras de C3b y C3c con C3 demuestra que la molécula experimenta reordenamientos conformacionales importantes con cada proteólisis, lo que expone no solamente el TED, sino superficies nuevas adicionales de la molécula que pueden interaccionar con receptores celulares (Janssen y Gros, Mol Immunol 44, 3-1 (27)).

La degeneración macular relacionada con la edad (DME) es la principal causa de ceguera en todo el mundo en los ancianos. La DME se caracteriza por una pérdida progresiva de visión central atribuible a cambios degenerativos y neovasculares de la mácula, una región altamente especializada de la retina ocular responsable de la agudeza visual fina. Las estimaciones recientes indican que 14 millones de personas están ciegas o tienen una visión gravemente deteriorada debido a la DME. La enfermedad tiene una influencia enorme en la salud física y mental de la población geriátrica y sus familias y se está convirtiendo en una carga sanitaria pública importante.

Nuevos descubrimientos, sin embargo, están comenzando a proporcionar una imagen más clara de los acontecimientos celulares relevantes, factores genéticos y procesos bioquímicos asociados con la DME temprana. El gen del Factor H del complemento es el primer gen identificado en múltiples estudios independientes que confiere un riesgo genético significativo para el desarrollo de DME. De este modo, tres grupos separados han indicado que un polimorfismo de tirosina-histidina en el aminoácido 42 del Factor H está asociado con el desarrollo de DME (Klein et al., Science 38:385-389 (25); Haines et al., Science 38:419-421 (25); y Edwards et al., Science 38:421-424 (25)). Se ha sugerido que la inhibición de la ruta alternativa alterada por el alelo de Factor H asociado con la enfermedad provoca o contribuye significativamente al desarrollo de DME (Thurman y Holers, J Immunol 176:135-131 (26)).

El documento WO 26/42329 desvela la caracterización del miembro de la ruta de complemento alternativa CRIg, e implica la ruta alternativa defectuosa en el desarrollo de la enfermedad ocular asociada con el complemento.

Bora et al., J Immunol. 25; 147(1): 491-497 desvela que la activación del complemento, incluyendo a través de la ruta alternativa, está implicada en el desarrollo de NVC e identifica un anticuerpo anti-C6 que inhibe C6 y reduce NVC.

Tanhehco et al., Transplan Proc. 1999; 31(5): 2168-71 desvela el mAb anti-Factor D 166-32, su inhibición de la ruta del complemento alternativa, y su uso potencial para evitar el rechazo de xenoinjertos.

Petrukhin et al., Expert Opin Ther Targets. 27; 11 (5): 625-39 desvela el uso de anticuerpos monoclonales para el Factor D para la regulación negativa de la ruta de complemento alternativa como una terapia potencial para DME.

El... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo antagonista anti-Factor D o un fragmento de unión a antígeno del mismo para uso en un método para la prevención o el tratamiento de una afección ocular asociada con el complemento en un ser humano, en donde el anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno son:

(i) anticuerpo 2D12 que tiene las secuencias de cadena ligera y pesada mostradas en SEC ID N2 1 y 2 o un fragmento de unión a antígeno del mismo; o

(ii) un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que compite en un ensayo de bloqueo cruzado con el anticuerpo de (i) por la unión con el epítopo con el que se une el anticuerpo de (i) y que se une con el sitio activo del Factor D y/o se une con un epítopo que incluye restos de sitios activos del Factor D.

2. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de unión a antígeno del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 1, que es una variante del anticuerpo o del fragmento de anticuerpo de unión a antígeno de (i) que tienen al menosun 9 % de identidad de secuencia con las secuencias de dominio variable del mismo.

3. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de unión a antígeno del mismo para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprenden las secuencias de CDR de cadena pesada y ligera (definidas de acuerdo con Kabat) del anticuerpo de (i).

4. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de anticuerpo de unión a antígeno para uso de acuerdo cualquier reivindicación anterior, que es un anticuerpo humano, humanizado o quimérico o fragmento de unión a antígeno del mismo.

5. El fragmento de anticuerpo de unión a antígeno antagonista anti-Factor D para uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, que se selecciona del grupo que consiste en Fab, Fab, F(ab)2, scFv, (scFv)2, anticuerpos lineales, moléculas de anticuerpos monocatenarios, minicuerpos, diacuerpos y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.

6. El fragmento de anticuerpo de unión a antígeno antagonista anti-Factor D para uso de acuerdo con la reivindicación 5, que es un fragmento Fab, Fab, F(ab)2, scFvo (scFv)2.

7. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de unión a antígeno para uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, que se unen con el Factor D humano con un valor de Kd de no más de 5 nM.

8. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de unión a antígeno para uso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en donde la afección ocular asociada con el complemento se selecciona del grupo que consiste en degeneración macular relacionada con la edad (DME), neovascularización coroidal (NVC), uveítis, retinopatías diabéticas y otras relacionadas con la isquemia, edema macular diabético, miopía patológica, enfermedad de von Hippel-Lindau, histoplasmosis del ojo, Oclusión de la Vena Retiniana Central (OVEC), neovascularización corneana y neovascularización retiniana.

9. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de anticuerpo de unión a antígeno para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicha afección ocular asociada con el complemento es DME seca.

1. El anticuerpo antagonista anti-Factor D o el fragmento de anticuerpo de unión a antígeno para uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicha afección ocular asociada con el complemento es DME húmeda.

11. El uso de un anticuerpo antagonista anti-Factor D o de un fragmento de unión a antígeno del mismo como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una afección ocular asociada con el complemento.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la afección ocular asociada con el complemento es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 1.