Nuevos derivados de auristatina y su uso.

Compuesto de fórmula (I)**Fórmula**

en la que

R1 representa hidrógeno,

alquilo (C1-C6) o un grupo

de la fórmula Q1-L1-* o Q2-L2-*, en donde * caracteriza el lugar de enlace con el átomo de nitrógeno,

Q1 significa hidroxicarbonilo, alcoxi (C1-C4)-carbonilo o benciloxicarbonilo,

L1 significa alcano (C1-C12)-diilo de cadena lineal que puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el que (a) dos átomos de carbono, en la relación 1,2, 1.3 o 1,4 entre sí, incluyendo los átomos de carbono eventualmente existentes entre ellos, pueden estar puenteados para formar un anillo cicloalquilo (C3-C6) o un anillo fenilo, o (b) hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

Q2 significa hidroxi, amino o mono-alquil (C1-C4)-amino, y y

L2 significa alcano (C2-C12)-diilo de cadena lineal que puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el que (a) dos átomos de carbono, en la relación 1,2, 1,3 o 1,4 entre sí, incluyendo los átomos de carbono eventualmente existentes entre ellos, pueden estar puenteados para formar un anillo cicloalquilo (C3-C6) o un anillo fenilo, o (b) hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

R2 representa metilo o hidroxi,

R3 representa hidrógeno o metilo,

R4 representa isopropilo, isobutilo, sec.-butilo, terc.-butilo, fenilo, bencilo, 4-hidroxibencilo, 4-hidroxi-3- nitrobencilo, 1-feniletilo, difenilmetilo, 1H-imidazol-4-ilmetilo o 1H-indol-3-ilmetilo, o

R3 y R4, junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos, forman un grupo 2-fenil-ciclopropan-1,1-diilo de la fórmula**Fórmula**

en donde

caracteriza los lugares de enlace con las partes restantes de la molécula, y

el anillo A, con la agrupación N-O contenida en él, representa un heterociclo mono- o bi-cíclico, eventualmente sustituido, de la fórmula**Fórmula**

en donde caracteriza el lugar de enlace con el grupo carbonilo,

R5 y R6 significan, en cada caso, hidrógeno, hidroxi, alcoxi (C1-C4) o benciloxi, y

R7 significa hidrógeno, flúor, cloro, ciano, metilo o trifluorometilo,

así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

Nuevos derivados de auristatina y su uso

La presente solicitud se refiere a nuevos derivados de monometilauristatina F, a procedimientos para la preparación de estos derivados, al uso de estos derivados para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades, así como al uso de estos derivados para la preparación de medicamentos para el tratamiento y/o prevención de enfermedades, en particular de enfermedades hiperproliferativas y/o angiogénicas tales como, por ejemplo, enfermedades cancerígenas. Tratamientos de este tipo pueden tener lugar como monoterapia o también combinación con otros medicamentos u otras medidas terapéuticas.

Las enfermedades cancerígenas son la consecuencia de un crecimiento incontrolado de células de los más diversos tejidos. En muchos casos, las nuevas células penetran en el tejido existente (crecimiento invasivo), o metastatizan en órganos alejados. Las enfermedades cancerígenas se manifiestan en los más diversos órganos y, a menudo, tienen cursos de la enfermedad específicos para el tejido. Por lo tanto, la designación enfermedad cancerígena como concepto genérico describe un gran grupo de enfermeaddes definidas de diferentes órganos, tejidos y tipos de células.

Tumores de estadios anteriores se pueden eliminar eventualmente mediante medidas quirúrgicas y radioterapéuticas. Por norma general, tumores metastatizados pueden tratarse mediante agentes quimioterapéuticos sólo de forma paliativa. El objetivo en este caso es alcanzar la combinación óptima de una mejora de la calidad de vida y una prolongación del tiempo de vida.

La mayoría de los agentes quimioterapéuticos administrados hoy en día por vía parenteral no están, a menudo, dirigidos metódicamente al tejido tumoral o a las células tumorales, sino que, por la administración sistémica, están distribuidos en el cuerpo de manera inespecífica, es decir, también en lugares en los que no se desea una exposición de la sustancia activa tales como, por ejemplo, en células, tejidos y órganos sanos. Esto puede conducir a efectos secundarios indeseados hasta alcanzar efectos generalmente tóxicos agravantes, que entonces limitan, a menudo fuertemente, el intervalo de dosis terapéuticamente útil o requieren una supresión completa de la medflcaclón.

La disponibilidad mejorada y selectiva de estos agentes quimioterapéuticos en la célula tumoral o el tejido directamente circundante y el aumento de la actividad ligada con ello, por una parte, y la minimización de efectos secundarios tóxicos por otra, se encuentra desde hace muchos años en el foco del desarrollo de nuevos agentes quimioterapéuticos. Hasta la fecha se han acometido muchos intentos para desarrollar métodos eficaces para la incorporación de la sustancia activa en la célula diana. La optimización de la asociación entre sustancia activa y diana intracelular y la minimización de la distribución intercelular de la sustancia activa, por ejemplo en células vecinas, sigue representando una misión difícil.

Para el direccionamiento metódico de tejido tumoral y células tumorales son adecuados, por ejemplo, anticuerpos monoclonales. La importancia de este tipo de anticuerpos para el tratamiento clínico de enfermedades cancerígenas ha aumentado considerablemente, en general, en los últimos años, basado en la actividad de este tipo de agentes tales como Trastuzumab (Herceptina), Rituximab (Rituxan), Cetuximab (Erbitux) y Bevacizumab (Avastina), que entretanto están admitidos para la terapia de enfermedades cancerígenas individuales y específicas [véase, p. ej., G. P. Adams y L. M. Weiner, Nat. Blotechnol. 23, 1147-1157 (25)]. Como consecuencia de ello, también ha aumentado claramente el interés por los denominados inmunoconjugados, en los que un anticuerpo internalizado, dirigido contra un antígeno asociado a un tumor está unido de manera covalente, a través de una unidad de enlace ("enlazador") con un agente de acción citotóxica, el cual, después de la infiltración y subsiguiente disociación del conjugado dentro de la célula tumoral y puede desplegar allí, directa y selñectivamente, su acción. De este modo el deterioro de tejido normal podría mantenerse en límites significativamente más estrechos en comparación con una quimioterapia convencional de la enfermedad cancerígena [véase, p. ej. J. M. Lambert, Curr. Opin. Pharmacol. 5, 543-549 (25); A. M. Wu y P. D. Senter, Nat. Biotechnol. 23, 1137-1146 (25); P. D. Senter, Curr. Opin. Chem. Biol. 13, 235-244 (29); L. Ducry y B. Stump, Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (21)].

En lugar de anticuerpos también pueden utilizarse ligandos del sector de sustancias activas de pequeñas moléculas, que se unen selectivamente a un sitio diana especial ("diana") tal como, por ejemplo, a un receptor [véase, p. ej., E. Ruoslahtl et al., Science 279, 377-38 (1998); D. Karkan et al., PLoS ONE 3 (6), e2469 (25 de junio de 28)]. Se conocen también conjugados a base de una sustancia activa citotóxica y ligando, que entre el ligando y la sustancia activa presentan una hendidyra definida para la liberación de la sustancia activa. Un "lugar de ruptura nominal" de este tipo puede consistir, por ejemplo, en una cadena peptídica que en lugar determinado puede ser disociada selectivamente por una enzima especial en el lugar del efecto [véase, p. ej., R. A. Firestone y L. A. Telan, solicitud de patente de EE.UU. US 22/147138],

Auristatina E (AE) y monometilauristatina E (MMAE) son análogos sintéticos de la dolastatlna, un grupo especial de pseudo-péptidos lineales que originalmente fueron aislados de fuentes marinas y que en parte presentan una actividad citotóxica muy potente frente a células tumorales [para una recopilación, véase, p. ej., G. R. Pettit, Prog.

Chem. Org. Nat. Prod. 7, 1-79 (1997); G. R. Pettit et al., Anti-Cancer Drug Design 1, 529-544 (1995); G. R. Pettit et al., Anti-Cancer Drug Design 13, 243-277 (1998)].

Auristatina E (AE): R = CHj Monometilauristatina E (MMAE): R = H

No obstante, MMAE posee el inconveniente de una toxicidad sistémica relativamente elevada. Además, este compuesto, en el caso de su empleo en forma de conjugados de anticuerpo-sustancia activa (inmunoconjugados) no es compatible con unidades de enlace (enlazadores) entre anticuerpo y sustancia activa, que no presentan lugar de ruptura nominal enzimáticamente disociable alguno [S. O. Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17, 114-124 (26)].

Monometilauristatina F (MMAF) es un derivado de auristatina con una unidad fenilalanina C-terminal, que presenta un efecto anti-proliferativo sólo moderado en comparación con MMAE. Muy probablemente, esto se ha de atribuir al grupo carboxilo libre el cual, en virtud de su polaridad y carga, influye negativamente sobre la accesibilidad a la célula de este compuesto. A este respecto, el éster metílico de MMAF (MMAF-OMe) se describió como un derivado de profármaco cargado de forma neutra y accesible a las células que, en comparación con MMAF, muestra una citotoxicidad in vitro incrementada en varios órdenes de magnitud con respecto a diferentes líneas de células de carcinoma [S. O. Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17, 114-124 (26)]. Se ha de asumir que este efecto es provocado por la propia MMAF, la cual, después de la absorción del profármaco en las células, es liberada rápidamente mediante hidrólisis intracelular del éster.

Ester metílico de monometilauristatina F (MMAF-OMe): R = CHE

Compuestos de sustancias activas a base de derivados de éster sencillos se ven sometidos, en general, al riesgo de una inestabilidad química como consecuencia de una hidrólisis del éster inespecífica, independiente del lugar de acción previsto, por ejemplo por esterasas presentes en el plasma sanguíneo; esto puede limitar claramente la aplicabilidad de este tipo de compuestos en terapia.

Misión de la presente Invención era, por lo tanto, partiendo de monometilauristatina F (MMAF) sólo moderadamente activa, identificar nuevos compuestos y habilitarlos para el tratamiento en especial de aquellas enfermedades cancerígenas que, por una parte, presenten una actividad cltotóxlca claramente más intensa en ensayos con células enteras y, por otra parte, posean una estabilidad en plasma Incrementada en comparación con derivados de ásteres sencillos tales como MMAF-OMe. Sustancias de este tipo se podrían adecuar, de manera particular, como toxóforos para el enlace con proteínas tales como, por ejemplo, anticuerpos, o también con ligandos de bajo peso molecular a (inmuno) conjugados de acción anti-proliferativa.

Monometilauristatina F (MMAF) así como diferentes derivados de ásteres y amidas de la misma se dieron a conocer en el documento WO 25/81711-A2. Otros análogos de auristatina con una unidad de fenilalanina C-termlnal, sustituida... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de fórmula (I)

en la que

R1 representa hidrógeno, alquilo (Ci-C6) o un grupo de la fórmula Q1-L1-* o Q2-L2-*, en donde * caracteriza el lugar de enlace con el átomo de nitrógeno,

Q1 significa hidroxicarbonilo, alcoxi (Ci-C4)-carbonilo o benciloxicarbonilo,

L1 significa alcano (Ci-Ci2)-diilo de cadena lineal que puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el que (a) dos átomos de carbono, en la relación 1,2, 1.3 o 1,4 entre sí, incluyendo los átomos de carbono eventualmente existentes entre ellos, pueden estar puenteados para formar un anillo cicloalquilo (C3-C6) o un anillo fenilo, o (b) hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

Q2 significa hidroxi, amino o mono-alquil (Ci-C4)-am¡no, y

y

L2 significa alcano (C2-Ci2)-diilo de cadena lineal que puede estar sustituido hasta cuatro veces con metilo y en el que (a) dos átomos de carbono, en la relación 1,2, 1,3 o 1,4 entre sí, incluyendo los átomos de carbono eventualmente existentes entre ellos, pueden estar puenteados para formar un anillo cicloalquilo (C3-C6) o un anillo fenilo, o (b) hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

R2 representa metilo o hidroxi,

R3 representa hidrógeno o metilo,

R4 representa isopropilo, isobutilo, sec.-butilo, terc.-butilo, fenilo, bencilo, 4-hidroxibencilo, 4-hidrox¡-3- nitrobencilo, 1-feniletilo, difenilmetilo, 1/-/-¡midazol-4-ilmetilo o 1/-/-¡ndol-3-ilmet¡lo,

o

R3 y R4, junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos, forman un grupo 2-fenil-ciclopropan-1,1 -diilo de la fórmula

* #

en donde

# caracteriza los lugares de enlace con las partes restantes de la molécula,

y

el anillo A, con la agrupación N- contenida en él, representa un heterociclo mono- o bi-cíclico, eventualmente sustituido, de la fórmula

en donde

** caracteriza el lugar de enlace con el grupo carbonilo,

R5 y R6 significan, en cada caso, hidrógeno, hidroxi, alcoxi (C1-C4) o benciloxi,

y

R7 significa hidrógeno, flúor, cloro, daño, metilo o trifluorometilo, así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

2. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, en el que

R1 representa hidrógeno, alquilo (C1-C4) o un grupo de la fórmula Q1-L1-* o Q2-L2-*, en donde * caracteriza el lugar de enlace con el átomo de nitrógeno,

Q1 significa hidroxicarbonilo o alcoxi (Ci-C4)-carbonilo,

L1 significa alcano (Ci-Ci2)-diilo de cadena lineal, en el que (a) dos átomos de carbono en la relación 1,3 o 1,4 entre sí, bajo la inclusión de uno o de los dos átomos de carbono situados entre ellos pueden estar puenteados para formar un anillo fenilo o (b) hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

Q2 significa hidroxi, amino o metilamino,

y

L2 significa alcano (C2-Ci2)-diilo de cadena lineal, que puede estar sustituido una o dos veces con metilo y en el que hasta tres grupos CH2 no contiguos entre sí pueden estar intercambiados por -O-,

R2 representa metilo o hidroxi,

R3 representa hidrógeno,

R4 representa bencilo, 4-hidroxibencilo, 1-feniletilo o 1H-indol-3-ilmetilo,

o R3 y R4, junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos, forman un grupo 2-fenil-ciclopropan-1,1-diilo de la fórmula

* a

en donde

# caracteriza los lugares de enlace con las partes restantes de la molécula,

y

el anillo A, con la agrupación N- contenida en él, representa un heterociclo mono- o bi-cíclico, eventualmente sustituido, de la fórmula

** 4* 44 44

í í

en donde

** caracteriza el lugar de enlace con el grupo carbonilo,

y

R5 significa hidrógeno, hidroxi o benciloxi,

así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

3. Compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 ó 2, en el que R1 representa hidrógeno, metilo o un grupo de la fórmula Q1-L1-* o Q2-L2-*, en donde * caracteriza el lugar de enlace con el átomo de nitrógeno,

Q1 significa hidroxicarbonilo, metoxicarbonilo o etoxicarbonilo,

L1 significa alcano (Ci-C6)-diilo de cadena lineal, en el que dos átomos de carbono en la relación 1,4 entre sí, bajo la inclusión de los dos átomos de carbono situados entre ellos pueden estar puenteados para formar un anillo fenilo,

Q2 significa hidroxi o amino,

y

L3 significa alcano (Ci-C6)-diilo de cadena lineal,

R2 representa metilo,

R3 representa hidrógeno,

R4 representa bencilo, 1-feniletilo o 1/-/-indol-3-ilmetilo, o

R3 y R4, junto con el átomo de carbono al que ambos están unidos, forman un grupo (1S,2R)-2-fenil-ciclopropan-1,1- diilo de la fórmula

"X"

en donde

#1 caracteriza el lugar de enlace con el átomo de nitrógeno contiguo

y

#2 caracteriza el lugar de enlace con el grupo carbonilo,

y

el anillo A, con la agrupación N- contenida en él, representa un heterociclo mono- o bi-cíclico, eventualmente sustituido, de la fórmula

N

I

**

en donde

** caracteriza el lugar de enlace con el grupo carbonilo,

y

R5 significa hidrógeno, hidroxi o benciloxi,

así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

4. Compuesto según la reivindicación 1, 2 ó 3 con la fórmula (1-A)

n-A),

en la que R1, R2, R3, R4 y el anillo A tienen los significados definidos en la reivindicación 1, 2 ó 3 y el átomo de carbono Cxque porta los radicales R3 y R4 presenta la configuración S representada,

así como sus sales, solvatos y solvatos de las sales.

5. El compuesto de la reivindicación 1, en donde dicho compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

y

6. Procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) tal como se define en las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque un compuesto de la fórmula (II)

en la que R2 tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 4 1 y

PG representa un grupo protector de amino tal como, por ejemplo, (9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonilo, terc.- butoxicarbonilo o benciloxicarbonilo,

en un disolvente inerte y bajo activación de la función carboxilo en (II)

[A] se acopla primero con el compuesto de la fórmula (III)

OH

O

ch3 (ni)

o una sal del mismo, para formar un compuesto de la fórmula (IV)

(IV),

en la que R2 y PG tienen los significados arriba indicados,

y éste, a continuación, en un disolvente inerte y bajo activación de la función carboxilo, se acopla con un compuesto de fórmula (V)

(V).

en la que R3, R4 y el anillo Atienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 4, o una sal de este compuesto, para formar un compuesto de la fórmula (VI)

en la que R2, R\R4, el anillo Ay PG tienen los significados arriba indicados,

[B] se acopla con un compuesto de la fórmula (Vil)

(VII),

en la que R3, R4 y el anillo Atienen los significados indicados en las reivindicaciones 1 a 4, o una sal de este compuesto, asimismo para formar el compuesto de la fórmula (VI)

en la que R2, R3, R4, el anillo Ay PG tienen los significados arriba indicados,

y el compuesto que resulta en cada caso de la fórmula (VI) se desprotege entonces, según métodos habituales de la química de los péptidos, para formar un compuesto de fórmula (1-B) de acuerdo con la invención

en la que R2, R3, R4y el anillo Atienen los significados arriba indicados,

y éste a continuación, en caso de que se desee, se transforma (i) mediante alquilación inducida por bases con un compuesto de la fórmula (VIII)

R1A-X (VIII),

en la que

R1A tiene el significado indicado en las reivindicaciones 1 a 4 de R1, pero no representa hidrógeno,

y

X representa un grupo lábil tal como, por ejemplo, cloruro, bromuro, yoduro, mesilato, triflato o tosilato, en un compuesto de acuerdo con la invención de la fórmula (l-C)

en la que R1A, R2, R3, R4y el anillo A tienen los significados arriba indicados, o (¡i) mediante reacción con un compuesto de la fórmula (IX)

H (IX),

en la que

R18 tiene el significado arriba indicado de R1A, pero acortado en la longitud de cadena de alquilo en una unidad CH2,

en presencia de un agente reductor adecuado, se transforma en un compuesto de acuerdo con la invención de la fórmula (l-D)

en la que R1B, R2, R3, R4y el anillo A tienen los significados arriba indicados,

y los compuestos de las fórmulas (l-B), (l-C) o bien (l-D), así obtenidos, se separan eventualmente en sus enantiómeros y/o diastereómeros y/o se hacen reaccionar con los correspondientes (i) disolventes y/o (i¡) bases o 5 ácidos para dar sus solvatos, sales y/o solvatos de las sales.

7. Compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades.

8. Compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 5, para uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades cancerígenas y tumorales.

9. Uso de un compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 5, para la preparación de un

medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades cancerígenas y tumorales.

10. Medicamento, que contiene un compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 5, en combinación con uno o varios coadyuvantes inertes, no tóxicos y farmacéuticamente adecuados.

11. Medicamento, que contiene un compuesto tal como se define en una de las reivindicaciones 1 a 5, en 15 combinación con una o varias de otras sustancias activas.

12. Medicamento según la reivindicación 1 u 11 para uso en un procedimiento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades cancerígenas y tumorales.

13. Conjugado de acción antiproliferativa, en el que un compuesto según una o varias de las reivindicaciones 1-5 está enlazado con una proteína.

14. Conjugado de acción antiproliferativa según la reivindicación 13, en donde la proteína es un anticuerpo.