Nuevo péptido antígeno del melanoma y usos del mismo.

Un péptido antígeno de melanoma que es una secuencia de aminoácidos de menos de 50 aminoácidos de longitud,

que comprende el motivo de aminoácidos:

- TX2NDECWPX9 (SEC ID Nº: 2)

en el que X2 es leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina, o

- RX2PPKPPLX9 (SEC ID Nº: 3)

en el que X2 es cisteína, leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina.

Nuevo péptido antígeno del melanoma y usos del mismo Sector de la técnica La invención se refiere a péptidos antígenos de melanoma llamados MELOE y su uso para prevenir, tratar y diagnosticar el melanoma.

Estado de la técnica Los melanomas son tumores agresivos, frecuentemente metastásicos derivados de melanocitos o células névicas relacionadas con melanocitos. Los melanomas representan aproximadamente el tres por ciento de todos los cánceres cutáneos e incluso cuando está localizado aparentemente en la piel, hasta el 30 % de los pacientes desarrollan metástasis sistémica. Las modalidades clínicas de tratamiento del melanoma incluyen cirugía, radiación y quimioterapia. Después ha surgido la inmunoterapia y la terapia génica como métodos prometedores para tratar el melanoma. Los resultados de Rosenberg han mostrado que la transferencia adoptiva a pacientes con melanoma metastásico de linfocitos que se infiltran en tumores (TIL) que reconocen antígenos de cáncer, son capaces de mediar en la regresión de cáncer metastásico en el 35 al 40 % de los pacientes con melanoma.

En los últimos veinte años, se han identificado muchos antígenos de melanoma humano reconocidos por linfocitos T (documento WO 96/21734) usando diversos métodos tales como clonación de ADNc, purificación de péptido unido a MHC o inducción de linfocitos T contra péptidos o proteínas candidatos. Estos antígenos se han clasificado en varios grupos: antígenos de diferenciación melanocítica (tales como Melan-A/MART-1) (1) , antígenos de línea germinal de cáncer, compartidos por varios tumores y células de línea germinal masculina (tales como antígenos MAGE) (2, 3) , antígenos mutados generados por alteraciones genéticas (tales como CDK4) (4) , antígenos sobreexpresados en diversos tipos tumorales (tales como PRAME) (5) , y antígenos expresados de forma aberrante en tumores (tales como NA17-A y NA88-A) (6, 7) . Sin embargo, a pesar de su alto número, la inmunogenicidad de estos antígenos no se ha dilucidado aún, a excepción de Melan-A/MART-1. De hecho, la inmunogenicidad del antígeno Melan-A en melanoma se ha sugerido fuertemente por el análisis de varios protocolos de inmunoterapia activa (8, 9) y pasiva (10-15) que se dirigen a este antígeno.

La identificación de antígenos de melanoma adicionales con un potencial inmunogénico documentado sigue siendo un asunto importante para abordar para la inmunoterapia de cáncer, especialmente para el melanoma.

Objeto de la invención Un objeto de la invención es un péptido antígeno de melanoma que es una secuencia de aminoácidos de menos de 50 aminoácidos de longitud, que comprende el motivo de aminoácidos:

-TX2NDECWPX9 (SEC ID Nº : 2)

en el que X2 es leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina,

o -RX2PPKPPLX9 (SEC ID Nº : 3)

en el que X2 es cisteína, leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina.

Otro objeto de la invención es un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido antígeno de melanoma de la invención.

Otro objeto de la invención es una célula hospedadora que comprende dicho vector de expresión.

Otro objeto de la invención es un anticuerpo o fragmento del mismo que se une con MELOE-1 o MELOE-2.

Otro objeto de la invención es un multímero de MHC/péptido que comprenden un péptido antígeno de melanoma de la invención.

Otro objeto de la invención es una composición inmunizante que comprende

(a) al menos un péptido antígeno de melanoma de la invención,

(b) al menos un vector de expresión de la invención,

(c) al menos una célula hospedadora de la invención,

(d) al menos un anticuerpo de la invención o

(e) al menos una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos un péptido antígeno de melanoma de la invención.

Otro objeto de la invención es un linfocito T que reconoce específicamente un péptido antígeno de melanoma de la

invención.

Otro objeto de la invención es una composición para terapia adoptiva que comprende dichos linfocitos T.

Otro objeto de la invención es un método para producir dichos linfocitos T que comprenden las etapas de:

(a) estimular las PBMC o los TIL obtenidos de un sujeto con al menos un péptido antígeno de melanoma de la invención,

(b) enriquecer la población de linfocitos T específicos para el péptido o los péptidos antígenos de melanoma usados en (a) ,

(c) opcionalmente clonar dicha población de linfocitos T específicos para el péptido o los péptidos antígenos de melanoma usados en (a) .

Otro objeto de la invención es dicha composición inmunizante para prevenir o tratar el melanoma en un sujeto que lo necesite.

Otro objeto de la invención es un método in vitro para diagnosticar un melanoma en un sujeto que lo necesite, que comprende detectar la expresión de al menos uno de:

-ARNm de MELOE (SEC ID Nº : 1) , -polipéptido MELOE-1 (SEC ID Nº : 4) , -polipéptido MELOE-2 (SEC ID Nº : 5) ,

en una muestra obtenida de dicho sujeto.

Otro objeto de la invención es un método para controlar un melanoma en un sujeto que lo necesite, que comprende determinar la frecuencia de linfocitos T que reconocen específicamente un péptido antígeno de melanoma de la invención.

Descripción detallada de la invención Definiciones Como se usa en el presente documento, el término “péptido” se refiere a una secuencia de aminoácidos que tiene menos de 50 aminoácidos. Como se usa en el presente documento, el término “péptido” abarca secuencias de aminoácidos que tienen menos de 50 aminoácidos, menos de 40 aminoácidos, menos de 30 aminoácidos, menos de 25 aminoácidos, menos de 20 aminoácidos, menos de 15 aminoácidos o menos de 10 aminoácidos.

Como se usa en el presente documento, el término “anticuerpo” se refiere a una proteína capaz de unirse específicamente con un antígeno, típicamente y preferentemente uniéndose con un epítopo o determinante antigénico o dicho antígeno. El término “anticuerpo” también incluye proteínas recombinantes que comprenden los dominios de unión, así como variantes y fragmentos de anticuerpos. Los ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen Fv, Fab, Fab’, F (ab’) 2, dsFv, scFv, sc (Fv) 2, diacuerpos y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

“Variantes conservativas para función” como se usa en el presente documento se refiere a en las que un resto de aminoácido dado en una proteína o enzima se ha cambiado (insertado, suprimido o sustituido) sin alterar la conformación y función general del polipéptido. Dichas variantes incluyen proteínas que tienen alteraciones de aminoácidos tales como deleciones, inserciones y/o sustituciones. Una “deleción” se refiere a la ausencia de uno o más aminoácidos en la proteína. Una “inserción” se refiere a la adición de uno o más aminoácidos en la proteína. Una “sustitución” se refiere al reemplazo de uno o más aminoácidos por otro resto de aminoácido en la proteína. Típicamente, se reemplaza un aminoácido dado por un aminoácido con uno que tiene propiedades similares (tales como, por ejemplo, polaridad, potencial de enlaces de hidrógeno, ácido, básico, hidrófobo, aromático y similares) . Aminoácidos distintos de los indicados como conservados pueden diferir en una proteína de modo que el porcentaje de similitud de secuencia de proteínas o aminoácidos entre dos proteínas cualesquiera de función similar puede variar y puede ser, por ejemplo, del 70 % al 99 % como se determina de acuerdo con un esquema de alineamiento tal como por el método de grupos, en el que la similitud se basa en el algoritmo MEGALIGN. Una “variante conservativa para función” también incluye un polipéptido que tiene al menos 60 % de identidad de aminoácidos como se determina por los algoritmos BLAST o FASTA, preferentemente al menos 75 %, más preferentemente al menos 85 %, aún preferentemente al menos 90 %, y aún más preferentemente al menos 95 %, y que tiene propiedades o funciones iguales o sustancialmente similares a la proteína nativa o parental con la que se compara. Dos secuencias de aminoácidos son “sustancialmente homólogas” o “sustancialmente similares” cuando más del 80 %, preferentemente más del 85 %, preferentemente más del 90 % de los aminoácidos son idénticos, o más de aproximadamente el 90 %, preferentemente más del 95 % son similares (funcionalmente idénticos)... [Seguir leyendo]

1. Un péptido antígeno de melanoma que es una secuencia de aminoácidos de menos de 50 aminoácidos de longitud, que comprende el motivo de aminoácidos:

-TX2NDECWPX9 (SEC ID Nº : 2) en el que X2 es leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina, o -RX2PPKPPLX9 (SEC ID Nº : 3) en el que X2 es cisteína, leucina, metionina, valina, isoleucina o glutamina y X9 es alanina, valina o leucina.

2. Un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho péptido antígeno de melanoma se selecciona del grupo que consiste en MELOE-1 que tiene la secuencia SEC ID Nº : 4 y MELOE-2 que tiene la secuencia SEC ID Nº : 5.

3. Un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho péptido antígeno de melanoma se selecciona del grupo que consiste en péptidos que tienen la secuencia SEC ID Nº : 6 a 38.

4. Un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Una célula hospedadora que comprende un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 4.

6. Un anticuerpo o fragmento del mismo que se une con el péptido antígeno de melanoma de acuerdo con la 25 reivindicación 2.

7. Un multímero de MHC/péptido que comprende un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con la reivindicación 3.

8. Una composición inmunizante que comprende

(a) al menos un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,

(b) al menos un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 4,

(c) al menos una célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 5, 35 (d) al menos un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 6 o (e) al menos una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

9. Un linfocito T que reconoce específicamente un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

10. Una composición para terapia adoptiva que comprende linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 9.

11. Un método para producir dichos linfocitos T de acuerdo con la reivindicación 9, comprendiendo dicho método las 45 etapas de:

(a) estimular PBMC o linfocitos de infiltración tumoral obtenidos de un sujeto con al menos un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,

(b) enriquecer la población de linfocitos T específicos para el péptido o los péptidos antígenos de melanoma usados en (a) ,

(c) opcionalmente clonar dicha población de linfocitos T específicos para el péptido o los péptidos antígenos de melanoma usados en (a) .

12. La composición para terapia adoptiva de acuerdo con la reivindicación 10 para uso para prevenir o tratar el

melanoma en un sujeto que lo necesite, en el que dichos linfocitos T que reconocen específicamente un péptido antígeno de melanoma van a volver a administrarse al sujeto.

13. La composición inmunizante de acuerdo con la reivindicación 8 para uso para prevenir o tratar el melanoma en un sujeto que lo necesite.

14. Un método in vitro para diagnosticar un melanoma en un sujeto que lo necesite, que comprende detectar la expresión de al menos uno de:

-ARNm de MELOE (SEC ID Nº : 1) ,

-polipéptido de MELOE-1 (SEC ID Nº : 4) , -polipéptido de MELOE-2 (SEC ID Nº : 5) ,

en una muestra obtenida de dicho sujeto.

15. Un método in vitro para controlar un melanoma en un sujeto que lo necesite, que comprende determinar la frecuencia de linfocitos T que reconocen específicamente un péptido antígeno de melanoma de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.