Nuevo método para tratar infecciones de H. pylori.

Un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos, en el cual la secuencia de aminoácidos del polipéptido es al menos 80 % idéntica a una extensión de aminoácidos consecutivos de la región de HPGGT que consiste en una secuencia de aminoácidos correspondiente a la sec.

con núm. de ident.: 1,

en donde dicha región está definida por las posiciones de aminoácidos 410-480 de la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la sec. con núm. de ident.:1

en donde el polipéptido es adecuado para inducir una respuesta inmune que es capaz de inhibir la actividad catalítica de HPGGT, y en donde el polipéptido consiste de 10 a 50 aminoácidos

Nuevo método para tratar infecciones de H. pylori.

La presente invención se relaciona con polipéptidos que son fragmentos de gamma glutamil transpeptidasa de Helicobacter pylori (HPGGT) ; una composición inmunogénica que lo comprende, una composición inmunogénica que 5 comprende una forma inactivada de HPGGT; el uso de tales polipéptidos y fragmento inactivo de HPGGT; anticuerpos, aptámeros, y espiegélmeros dirigidos contra y que se une específicamente a tales polipéptidos y forma inactiva de HPGGT; un método para identificar un candidato a fármaco, un método para desarrollar una vacuna; y el uso de un ligando de HPGGT.

10 Helicobacter pylori es un patógeno gram-negativo que selectivamente coloniza la mucosa gástrica humana y es prevalente en más del 50 % de la población mundial. La infección en la mayoría de los casos persiste toda la vida y ha estado implicada en la patogénesis de úlceras gástricas y duodenales, linfoma de tejido de tipo linfoide asociado a la mucosa gástrica, y cáncer gástrico. Un sello característico de la infección de Hpylori es la gastritis activa crónica, caracterizada por la infiltración densa del mucosa por los granulocitos neutrofílicos, linfocitos, y monocitos/macrófagos. 15 Varios estudios han proporcionado evidencias que las células T-auxiliadoras de tipo 1 se aumentan y activan durante la gastritis asociada a H pylori- mostrando sobre-regulación in vivo de CD25 y CD69. Además se obtiene una respuesta humoral fuerte para una variedad de antígenos de H pylori. A pesar de esta respuesta inflamatoria, la infección no se aclara por el sistema inmunológico del huésped. Por lo tanto, parece que H. pylori interfiere con el sistema inmune, pero el mecanismo claro permanece poco conocido hasta ahora. 20

Algunos estudios se han encargado de este asunto y descrito las forma pasivas y activas de escape de H. pylori de la respuesta inmune. La resistencia de H pylori a la fagocitosis se ha reportado y depende de los genes de virulencia, tales como virB7 y virB11, que codifican componentes del aparato de secreción de tipo IV. Zabaleta y otros reportaron inhibir la proliferación de la célula T y reducir la expresión de la cadena ζ del receptor de la célula T por la arginasa de H pylori. 25 Un péptido proinflamatorio de H pylori ha mostrado que induce la disfunción linfocítica activando los monocitos para producir radicales de oxígeno reactivo. Estos datos enfatizan la interacción de la bacteria con la respuesta inmune no específica; sin embargo, una respuesta específica de la célula T parece ser decisiva para la eliminación de la bacteria porque las pruebas de vacunación han fracasado en ratones deficientes de células T o interferón-gamma (IFN-gamma) .

30 A pesar de estos esfuerzos, las razones para la persistencia crónica del patógeno gástrico permanecen poco conocidas.1 Se ha demostrado que las células T CD4 positivas son cruciales para la eliminación bacteriana2 pero se inhiben en su proliferación por H. pylori.3 En este contexto varios grupos han investigado los efectos inmunosupresivos de las proteínas de H. pylori. Knipp y colaboradores parcialmente purificaron una llamada "proteína de inhibición de la proliferación (PIP) ", que redujo la proliferación de linfocitos y monocitos independientemente de la factores de virulencia 35 CagA (gen A asociado a citotoxina) y VacA (citotoxina vacuolizante) .4

En contraste, dos grupos recientemente reportaron que la proliferación de linfocitos se suprimió en presencia de concentraciones altas de VacA purificada. 5, 6 Paradójicamente sin embargo, mutantes de H. pylori deficientes de Vac no tuvieron defecto en sus propiedades de inhibición de la proliferación.5 Adicionalmente pronto se ha reconocido que esa 40 inflamación gástrica no se altera o aun aumenta en los pacientes infectados con cepas de Helicobacter que expresan VacA.7, 8

Se demostró anteriormente, que los productos secretados de H. pylori inhibieron la proliferación de linfocito T induciendo una detención del ciclo celular en la fase G1.3 Este efecto fue independiente de los factores de virulencia conocidos que 45 incluyen las proteínas VacA y CagA.

A pesar de este creciente trabajo acerca de los posibles mecanismos de H. pylori para escapar de la eliminación por el huésped, aún no se obtiene un éxito sustancial en el desarrollo de medios clínicos para tratar o prevenir específicamente la infección de H. pylori. 50

La solicitud de patente europea EP 1 508 572 A1 describe que la proteína inductora de apoptosis de Helicobacter pylori es un complejo de proteína compuesto por asociación de dos tipos de proteínas, que comprende una parte de la secuencia de aminoácido codificada por el gen de g-glutamil transferasa (HP1118) .

55 La solicitud de patente internacional WO 98/17804 describe la gamma-glutamiltransferasa como un antígeno de Helicobacter y las secuencias de ácidos nucleicos que codifican para tal antígeno.

La patente de Estados Unidos 6, 380, 217 se relaciona con los métodos y composiciones útiles para controlar la bacteria GGT positiva. 60

El problema subyacente de la presente invención es proporcionar polipéptidos que son adecuados para provocar una respuesta inmune en un ser animal o humano, en donde tal respuesta inmune confiere protección en contra de la infección de H. pylori y cualquier enfermedad asociada con o causada por H. pylori.

Es un problema además subyacente de la presente invención proporcionar una composición inmunogénica que es adecuada para provocar tal respuesta inmune. 5

Otro problema subyacente de la presente invención es proporcionar medios para identificar candidatos a fármacos nuevos para tratar y/o prevenir una infección de H. pylori así como métodos para tratar y prevenir esta infección.

Estos y otros problemas se solucionan por la materia de las reivindicaciones independientes. Las modalidades 10 preferidas se pueden tomar de las reivindicaciones dependientes.

El problema subyacente de la presente invención se soluciona en un primer aspecto por un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos, en donde la secuencia de aminoácido del polipéptido es al menos 80 % idéntica a una extensión de aminoácidos consecutivos de la región de HPGGT que consiste en una secuencia de aminoácidos 15 correspondiente a la sec. con núm. de ident.: 1, en donde tal región se define por las posiciones de aminoácidos 410 a 480 de la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 1,

en donde el polipéptido es adecuado para provocar una respuesta inmune que es capaz de inhibir la actividad catalítica de HPGGT, y

en donde el polipéptido consiste de 10 a 50 aminoácidos. 20

En una modalidad del primer aspecto el polipéptido consiste de 15 a 30 aminoácidos.

En una modalidad del primer aspecto el polipéptido comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en FDIKPGNPNLYGLVGGDANAI (sec. con núm. de ident.: 3) ,

DFSIKPGNPNLYGLVGGDANAIEANKRPL (sec. con núm. de ident.:4) y

SSMSPTIVLKNNKVFLWGSP (sec. con núm. de ident.:5) .

El problema subyacente de la presente invención se soluciona en un segundo aspecto por una composición 30 inmunogénica que comprende uno o varios de los polipéptidos de acuerdo con el primer aspecto de la invención, preferentemente para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por o asociada con H. pylori.

El problema subyacente de la presente invención se soluciona en un tercer aspecto por una composición inmunogénica que comprende una forma enzimáticamente inactiva de HPGGT o un fragmento enzimáticamente inactivo de HPGGT, 35 en donde el fragmento y HPGGT inducen una respuesta de anticuerpo, en donde HPGGT tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 1, en donde tal fragmento consiste de una extensión de aminoácidos contiguos que comprende los aminoácidos 451 y 452 de HPGGT, en donde la respuesta de anticuerpo comprende anticuerpos con un efecto anulador en la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos, para el uso en un método para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por o asociada con H. pylori. 40

En una modalidad del segundo y tercer aspecto la respuesta de anticuerpo comprende anticuerpos con un efector inhibidor en HPGGT, con mayor preferencia en la actividad específica de HPGGT.

En una modalidad del segundo y tercer aspecto la composición es para promover la activación y proliferación de 45 linfocitos en un paciente que sufre de una infección de H. pylori o que está en riesgo de desarrollar una infección con H. pylori.

En una modalidad... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos, en el cual la secuencia de aminoácidos del polipéptido es al menos 80 % idéntica a una extensión de aminoácidos consecutivos de la región de HPGGT que consiste en una secuencia de aminoácidos correspondiente a la sec. con núm. de ident.: 1, en donde dicha 5 región está definida por las posiciones de aminoácido.

41. 480 de la secuencia de aminoácidos de acuerdo con la sec. con núm. de ident.:1

en donde el polipéptido es adecuado para inducir una respuesta inmune que es capaz de inhibir la actividad catalítica de HPGGT, y

en donde el polipéptido consiste de 10 a 50 aminoácidos 10

2. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1,

en donde el polipéptido consiste de 15 a 30 aminoácidos.

3. El polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde el polipéptido comprende una 15 secuencia seleccionada del grupo que consiste en

FDIKPGNPNLYGLVGGDANAI (sec. con núm. de ident.:3) ,

DFSIKPGNPNLYGLVGGDANAIEANKRPL (sec. con núm. de ident.:4) y

SSMSPTIVLKNNKVFLWGSP (sec. con núm. de ident.:5) .

4. Una composición inmunogénica que comprende uno o varios de los polipéptidos, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, preferentemente para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad causada por o asociada con H. pylori.

5. Una composición inmunogénica que comprende una forma enzimáticamente inactiva de HPGGT o un fragmento 25 enzimáticamente inactivo de HPGGT, en donde el fragmento y la HPGGT inducen una respuesta de anticuerpos, donde la HPGGT tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la sec. con núm. de ident.: 1, y donde dicho fragmento consiste en una extensión de aminoácidos contiguos que comprenden los aminoácidos 451 y 452 de HPGGT, donde la respuesta de anticuerpos comprende anticuerpos con un efecto de anulación en la supresión dependiente HPGGT de la proliferación de linfocitos, para usar en un método para la prevención y/o 30 tratamiento de una enfermedad causada por o asociada con H. pylori.

6. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 5, en donde la respuesta de anticuerpos comprende anticuerpos con un efecto inhibidor sobre HPGGT, con mayor preferencia en la actividad específica de HPGGT. 35

7. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en donde la composición es para promover la activación y proliferación de linfocitos en un paciente que sufre de infección por H. pylori o que está en riesgo de desarrollar una infección con H. pylori.

8. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en donde la composición comprende uno o varios adyuvantes.

9. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en donde la composición comprende uno o varios antígenos de H. pylori. 45

10. La composición inmunogénica de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el antígeno se selecciona del grupo que comprende HpaA, Omp18 y combinaciones de los mismos.

11. La composición inmunogénica de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, en donde la enfermedad 50 es una enfermedad causada por o asociada con la infección por H. pylori.

12. Uso de un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento.

13. Uso de una composición inmunogénica que comprende uno o varios de los polipéptidos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de una composición inmunogénica que comprende una forma enzimáticamente inactiva de HPGGT o un fragmento enzimáticamente inactivo de HPGGT, donde el fragmento y la HPGGT inducen una respuesta de anticuerpos, donde la HPGGT tiene una secuencia de aminoácidos de acuerdo con sec. con núm. de ident.: 1, donde dicho fragmento consiste en una extensión de aminoácidos 60 contiguos que comprenden los aminoácidos 451 y 452 de HPGGT, para la fabricación de un medicamento.

14. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 13, en donde el medicamento es una vacuna.

15. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en donde el medicamento es para la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad causada por o asociada con H. pylori, con mayor preferencia una enfermedad causada por o asociada con la infección por H. pylori.

16. Uso de un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la detección de un anticuerpo en una muestra, por el cual el anticuerpo está dirigido a HPGGT.

17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el anticuerpo es capaz de inhibir la actividad enzimática de HPGGT y/o actividad inhibidora de HPGGT en la proliferación de linfocitos. 10

18. Un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo tiene un efecto inhibidor sobre la actividad enzimática de HPGGT y un efecto anulador en la supresión dependiente HPGGT de la proliferación de linfocitos.

19. Un ácido nucleico que codifica el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18.

20. Una molécula de ácido nucleico que se une específicamente a un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o la unión a un fragmento de HPGGT que comprende las posiciones de aminoácido.

41. 480 de la secuencia de aminoácidos de acuerdo con sec. con núm. de ident.: 1, en donde dicho fragmento 20 consiste en una extensión de aminoácidos contiguos que comprenden los aminoácidos 451 y 452 de HPGGT, en donde la molécula de ácido nucleico se selecciona del grupo que consiste en aptámeros y espiegélmeros, en donde la molécula de ácido nucleico tiene un efecto inhibidor sobre la actividad enzimática de HPGGT y un efecto anulador en la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos 21. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18 para la fabricación de un medicamento.

22. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 20 para la fabricación de un medicamento

23. Un método para identificar un candidato a fármaco para el tratamiento de una enfermedad que comprende las 30 etapas para evaluar el candidato a fármaco

a. efecto inhibidor sobre la actividad específica de la gamma-glutamil transpeptidasa de H. pylori y

b. efecto anulador sobre la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos.

24. Un método para desarrollar una vacuna que comprende las etapas de

a) proporcionar composiciones inmunogénicas que comprenden HPGGT o al menos un fragmento del mismo;

b) inmunizar animales no humanos con las composiciones inmunogénicas y con ello generar anticuerpos;

c) evaluar los anticuerpos por su efecto inhibidor sobre la actividad específica de la gamma-glutamil 40 transpeptidasa de H. pylori y su efecto anulador en la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos y

d) seleccionar una composición inmunogénica capaz de inducir una respuesta de anticuerpos que comprende anticuerpos con un efecto anulador sobre la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos.

25. Uso de un ligando de HPGGT para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad, en donde el ligando inhibe significativamente la actividad HPGGT y anula la supresión dependiente de HPGGT de la proliferación de linfocitos, en donde el ligando es un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 18, o una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 20, en donde la enfermedad es causada por o asociada con H. pylori. molécula. 50

26. Uso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde la enfermedad es causada por o asociada con la infección por H. pylori.

27. Uso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde la proliferación de linfocitos se evalúa con un ensayo de 55 proliferación de linfocitos.