Métodos y composiciones para elaborar anticuerpos y derivados de anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida.

Método para la elaboración de un anticuerpo o derivado de anticuerpo modificado que presenta fucosilación del núcleo reducida,

que comprende:

cultivar una célula hospedadora en un medio de cultivo que comprende una cantidad efectiva de un análogo de fucosa bajo condiciones adecuadas de crecimiento, en donde la célula hospedadora expresa el anticuerpo o derivado de anticuerpo con un dominio Fc que tiene al menos un complejo de una cadena de azúcares enlazadas por N-glucósido unida al dominio Fc a través de una N-acetilglucosamina del extremo reductor de la cadena de azúcares, y

aislar el anticuerpo o derivados de anticuerpo de las células,

en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (III) o (IV): **Fórmula**

o una sal o solvato biológicamente aceptable de los mismos, en donde cada fórmula (III) o (IV) puede ser el anómero alfa o beta o la correspondiente forma aldosa;

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en flúor, cloro, -OH, -OC(O)H, -OC(O) alquilo C1-C10, -OC(O) alquenilo C2-C10, -OC(O) alquinilo C2-C10, -OC(O)arilo, -OC(O)heterociclo, -OC(O) alquilen(arilo) C1-C10, -OC(O) alquilen(arilo) C2-C10, -OC(O) alquinil(arilo) C2-C10, -OC(O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC(O) alquenilen(heterociclo) C2C10, -OC(O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC(O) alquilo, -OCH2OC(O)O alquilo; -OCH2OC(O) arilo, -OCH2OC(O)O arilo, -OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3, -OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3 y -O alquilo C1-C10, en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5; y

cada R2a y R3a se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, F y Cl;

R5 se selecciona del grupo que consiste en -CH3, -CHF2, -CH≥C≥CH2, -C≥CH, -C≡CCH3, -CH2C≡CH, -C(O)OCH3, -CH(OAc)CH3, -CN, -CH2CN, -CH2X (en donde X es Br, Cl o I), y metoxiran;

donde, cuando R5 es distinto de -CH≥C≥CH2 o -CHF2, al menos uno de R1, R2, R3, R2a y R3a es flúor o cloro; y

donde el anticuerpo o derivado del anticuerpo presenta fucosilación del núcleo reducida en comparación con el anticuerpo o derivado de anticuerpo de la célula hospedadora cultivada en ausencia del análogo de fucosa;

o donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (I) o (II):

Métodos y composiciones para elaborar anticuerpos y derivados de anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida Antecedentes de la invención Las proteínas terapéuticas recombinantes se producen mediante diversos métodos diferentes. Un método preferido es la producción de proteínas recombinantes a partir de líneas celulares hospedadoras de mamífero. Las líneas celulares, tales como las células de ovario de hámster chino (CHO, por sus siglas en inglés) , se modifican con ingeniería genética para expresar la proteína terapéutica de interés. Diferentes líneas celulares presentan ventajas y desventajas para la producción de proteínas recombinantes, incluyendo las características y la productividad de las proteínas. La selección de una línea celular para la producción comercial compensa a menudo la necesidad de una alta productividad con la habilidad de proporcionar una calidad del producto consistente con las propiedades que se requieren para un producto dado. Una importante clase de proteínas terapéuticas recombinantes que requieren características de alta calidad consistentes y procesos de títulos elevados son los anticuerpos monoclonales.

Los anticuerpos monoclonales producidos en células hospedadoras de mamíferos pueden presentar una variedad de modificaciones post-translacionales, incluyendo la glicosilación. Los anticuerpos monoclonales, tales como las IgG1, tienen un sitio de glicosilación N-ligada en la asparagina 297 (Asn297) de cada cadena pesada (dos por anticuerpo intacto) . Los glicanos unidos a Asn297en los anticuerpos son habitualmente estructuras biantenarias complejas con muy baja o ninguna N-acetilglucosamina de bisección (GlcNAc de bisección) con cantidades bajas de ácido siálico terminal y cantidades variables de galactosa. Los glicanos además, habitualmente, tienen niveles elevados de fucosilación del núcleo. Se ha mostrado que la reducción de la fucosilación del núcleo en los anticuerpos modifica las funciones efectoras de la Fc, en particular la unión al receptor Fc-gamma y la actividad ADCC. Esta observación ha conducido al interés en las líneas celulares de ingeniería genética para que produzcan anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida.

Métodos para la ingeniería genética de líneas celulares para reducir la fucosilación del núcleo incluyen la inactivación génica o knock-out, introducción de modificaciones en un gen o knock-in y ARN interferente (ARNi) . En la inactivación génica, el gen que codifica FUT8 (enzima alfa 1, 6-fucosiltransferasa) es inactivado. La FUT8 cataliza la transferencia de un residuo fucosil desde GDP-fucosa a la posición 6 de la GlcNac Asn-ligada (N-ligada) de un Nglicano. La FTU8 se presenta como la única enzima responsable de la adición de fucosa al carbohidrato biantenario N-ligado en Asn297. La introducción de modificaciones en un gen o técnica knock-in añade genes que codifican enzimas tales como GNTIII o una alfa manosidasa II de Golgi. Un aumento de los niveles de tales enzimas en las células desvía los anticuerpos monoclonales de la vía de fucosilación (lo que conduce a una fucosilación del núcleo disminuida) , y a tener una cantidad aumentada de N-acetilglucosaminas de bisección. El ARNi habitualmente también establece como objetivo la expresión génica de FUT8, lo que conduce a niveles de transcripción de ARNm reducidos o a inactivar la expresión génica por completo.

Alternativas a la ingeniería genética de líneas celulares incluyen el uso de inhibidores de molécula pequeña que actúan sobre enzimas en la vía de glicosilación. Los inhibidores tales como la castanospermina actúan pronto en la vía de glicosilación, produciendo anticuerpos con glicanos inmaduros (por ejemplo, niveles altos de manosa) y niveles bajos de fucosilación. Los anticuerpos producidos mediante tales métodos generalmente carecen de la estructura de un glicano N-ligado complejo asociada con anticuerpos maduros.

En contraste, la presente invención proporciona análogos de fucosa de molécula pequeña para su uso en la producción de anticuerpos recombinantes que tengan glicanos N-ligados complejos, pero con fucosilación del núcleo reducida.

Resumen de la invención La invención proporciona métodos y composiciones para la preparación de anticuerpos y derivados de anticuerpos con fucosilación del núcleo reducida. Los métodos y las composiciones están basados en parte en los resultados inesperados presentados en los Ejemplos que muestran que el cultivo de células hospedadoras, que expresan un anticuerpo o un derivado de anticuerpo, en presencia de un análogo de la fucosa (que tienen la fórmula I, II, III, IV, V

o VI) produce un anticuerpo con fucosilación del núcleo reducida (es decir, fucosilación reducida de Nacetilglucosamina de las cadenas de azúcar ligadas a un N-glucósido complejo enlazadas a la región Fc a través de la N-acetilglucosamina del terminal reductor de las cadenas de azúcar) . Tales anticuerpos y derivados de anticuerpos pueden mostrar una función efectora aumentada (ADCC) , en comparación con anticuerpos o derivados de anticuerpos producidos a partir de células hospedadoras cultivadas en ausencia del análogo de fucosa.

En otro aspecto, se proporcionan composiciones de anticuerpos y derivados de anticuerpos. Los anticuerpos y derivados de anticuerpos pueden estar producidos mediante los métodos que se describen en la presente patente.

Se revelan adicionalmente análogos de fucosa. Los análogos de fucosa pueden ser añadidos a medios de cultivos celulares de mamíferos para inhibir o reducir la fucosilación del núcleo. También se proporcionan medios de cultivo que comprenden una cantidad efectiva de un (os) análogo (s) de fucosa de este tipo.

Estos y otros aspectos de la presente invención pueden entenderse más completamente en referencia a la siguiente descripción detallada, ejemplos no limitativos de modos de realización específicos, y las figuras anexas.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 muestra un análisis (electroferogramas) de glicanos aislados de un anticuerpo anti-CD70 (h1F6) producido a partir del control (A) y células hospedadoras (B y C) tratadas con peracetato de alquinil fucosa (AlkF) . Los paneles muestran la identidad y distribución relativa de glicanos. “G0” hace referencia a la estructura de carbohidrato en la que no hay galactosa en los dos terminales no reductores. “G1” hace referencia a una estructura de carbohidrato en la que uno de los terminales no reductores tiene una galactosa (una mezcla de dos isómeros) .

“G2” hace referencia a una estructura de carbohidrato en la que ambos terminales no reductores tienen una galactosa. “G0-F” hace referencia a una estructura de carbohidrato en la que no hay galactosa en ninguno de los dos terminales no reductores y no hay fucosilación del núcleo. Panel 1A: glicanos aislados del control (no tratados) anticuerpo h1F6. Panel 1B: glicanos aislados de anticuerpos h1F6 expresados en presencia de 50 µm de peracetato de alquinil fucosa. Panel 1C: glicanos aislados de anticuerpos h1F6 expresados en presencia de 50 µm de peracetato de alquinil fucosa y tratados con β-galactosidasa para eliminar la galactosa de los glicanos G1 y G2.

La Figura 2 muestra los resultados de los ensayos de la función efectora (ADCC) con anticuerpos producidos a partir de células hospedadoras cultivadas en presencia de peracetato de alquinil fucosa (AlkF) . La lisis específica del anticuerpo de control anti-CD70 (círculos sombreados) , anticuerpo anti-CD70 a partir de células hospedadoras cultivadas en presencia de 50 µM y 100 µM de AlkF (círculos en blanco y triángulos, respectivamente) y se determinó la IgG de control de no unión (rombos sombreados) mediante el ensayo de liberación de 51Cr. Las células diana de CD70+786-O se mezclaron con PMBC (células mononucleares de sangre periférica) en un efector a una relación diana de 10:1.

La Figura 3 muestra los resultados de los ensayos de unión del receptor Fcγ con el anticuerpo anti-CD70 de control y el anticuerpo a partir de células hospedadoras cultivadas en presencia de 50 µM de peracetato de alquinil fucosa (AlkF) . La afinidad relativa para cada receptor fue determinada mediante un ensayo de unión de tipo competitivo entre el anticuerpo parental marcado y concentraciones en aumento de anti-CD70 mAb parental no marcado (cuadrados sombreados) o no fucosilados en el núcleo (triángulos sombreados) . La Figura 3A muestra la competición de unión para las células que expresan el receptor Fcγ (CD16) humano. La Figura 3B muestra la competición de unión para las células que expresan el receptor Fcγ (CD16) murino.

La Figura 4 muestra los resultados... [Seguir leyendo]

1. Método para la elaboración de un anticuerpo o derivado de anticuerpo modificado que presenta fucosilación del núcleo reducida, que comprende:

cultivar una célula hospedadora en un medio de cultivo que comprende una cantidad efectiva de un análogo de fucosa bajo condiciones adecuadas de crecimiento, en donde la célula hospedadora expresa el anticuerpo o derivado de anticuerpo con un dominio Fc que tiene al menos un complejo de una cadena de azúcares enlazadas por N-glucósido unida al dominio Fc a través de una N-acetilglucosamina del extremo reductor de la cadena de azúcares, y

aislar el anticuerpo o derivados de anticuerpo de las células,

en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (III)

o (IV) :

o una sal o solvato biológicamente aceptable de los mismos, en donde cada fórmula (III) o (IV) puede ser el anómero alfa o beta o la correspondiente forma aldosa;

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en flúor, cloro, -OH, -OC (O) H, OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo; -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3,

OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3 y –O alquilo C1-C10, en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5; y

cada R2a y R3a se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, F y Cl;

R5 se selecciona del grupo que consiste en -CH3, -CHF2, -CH=C=CH2, -C=CH, -C≡CCH3, -CH2C≡CH, C (O) OCH3, -CH (OAc) CH3, -CN, -CH2CN, -CH2X (en donde X es Br, Cl o I) , y metoxiran;

donde, cuando R5 es distinto de -CH=C=CH2 o -CHF2, al menos uno de R1, R2, R3, R2a y R3a es flúor o cloro; y

donde el anticuerpo o derivado del anticuerpo presenta fucosilación del núcleo reducida en comparación con el anticuerpo o derivado de anticuerpo de la célula hospedadora cultivada en ausencia del análogo de fucosa;

o donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (I) o (II) :

o una sal o solvato biológicamente aceptables de los mismos, donde:

cada fórmula (I) o (II) puede ser el anómero alfa o beta o la forma aldosa correspondiente;

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH, -OC (O) H, -OC (O) alquilo C1

C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, -OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquenilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2-C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo, -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, -OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3, y –O alquilo C1-C10 en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5; y

R5 se selecciona del grupo que consiste en -C≡CH, -C≡CH2C≡CH, - C (O) OCH3, -CH (OAc) CH3, -CN, -CH2CN, -CH2X (en donde X es Br, Cl o I) , y metoxiran; y

donde el anticuerpo o derivado de anticuerpo presenta fucosilación del núcleo reducida en comparación con el anticuerpo o derivado de anticuerpo a partir de la célula hospedadora cultivada en ausencia del análogo de fucosa;

o en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las fórmulas (V) o (VI) :

o una sal o solvato biológicamente aceptables del mismo, en donde cada fórmula (V) o (VI) puede ser el anómero alfa o beta o la forma aldosa correspondiente;

cada R1, R2, R2a, R3, R3a y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH, -OC (O) H, OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2-C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo, -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3,

OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3, -O alquilo C1-C10, y un grupo sustractor de electrones pequeño, en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5;

R5 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en -CH3, -CH2X, -CH (X’) -alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH (X’) -alqueno C2-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH (X’) -alquino C2-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH=C (R10) (R11) , -C (CH3) =C (R12) (R13) , 30 C (R14) =C=C (R15) (R16) , carbociclo -C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH (X’) -carbociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, heterociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH (X’) -heterociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH2N3, -CH2CH2N3, y benciloximetilo, o R5 es un grupo sustractor de electrones pequeño; en donde R10 es hidrógeno o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno; R11 es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno; R12 es hidrógeno, halógeno o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno; y R13 es hidrógeno, o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno; R14 es hidrógeno o metilo; R15 y R16 se seleccionan independientemente de hidrógeno, metilo y halógeno; X es halógeno; y

X’ es halógeno o hidrógeno; y

adicionalmente, cada R1, R2, R2a, R3 y R3a son opcionalmente hidrógeno; opcionalmente dos R1, R2, R2a, R3 y R3a en átomos de carbono adyacentes se combinan para formar un doble enlace entre dichos átomos de carbono adyacentes; y

dado que al menos uno de R1, R2, R2a, R3, R3a, R4 y R5 es un pequeño grupo sustractor de electrones, o R5 comprende un halógeno, sitio de insaturación, carbociclo, heterociclo o azida, excepto cuando (i) R2 y R2a son ambos hidrógeno, (ii) R3 y R3a son ambos hidrógeno, (iii) R1 es hidrógeno, (iv) un doble enlace se encuentra presente entre dichos átomos de carbono adyacentes, o (v) R5 es benciloximetilo; y

en donde el anticuerpo o derivado de anticuerpo tiene fucosilación del núcleo reducida en comparación con el anticuerpo o derivado de anticuerpo a partir de la célula hospedadora cultivada en ausencia del análogo de fucosa.

2. Método según la reivindicación 1, en donde menos del 20% del análogo de fucosa se incorpora en las cadenas de azúcar ligadas al N-glucósido complejo del anticuerpo o derivado del anticuerpo.

3. Método según la reivindicación 1, en donde menos del 5% del análogo de fucosa está incorporado al complejo de cadenas de azúcares enlazadas por N-glucósido del anticuerpo o derivado del anticuerpo.

4. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las fórmulas (III) o (IV) .

5. Método según la reivindicación 4, en donde R2 es F.

6. Método según la reivindicación 4, en donde cada R1 y R2 es F.

7. Método según la reivindicación 4, en donde cada R1, R3, y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en –OH y -OAc, R2 es F, cada R2a y R3a es H; y R5 es CH3.

8. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las fórmulas (I) o (II) .

9. Método según la reivindicación 8, en donde:

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH, -OC (O) H, -OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, -OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquenilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2-C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo, -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, y -OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3,

en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5;

10. Método según la reivindicación 9, en donde cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH y -OC (O) alquilo C1-C10.

11. Método según la reivindicación 9, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en -C≡CH y -C≡CCH3.

12. Método según la reivindicación 9, en donde R5 es -C (O) OCH3.

13. Método según la reivindicación 9, en donde R5 es -CH2CN.

14. Método según la reivindicación 9, en donde R5 es -CH2X (en donde X es Br) .

15. Método según la reivindicación 9, en donde R5 es -CH (OAc) CH3.

16. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa es alquinil fucosa, peracetato de alquinil fucosa, tetraacetato de alquinil fucosa, tetraacetato de 5-propinil fucosa, tetrapropanonato de alquinil fucosa, tetra-n

hexanoato de alquinil fucosa, di (trimetilacetato) de alquinil fucosa, pernicotinato de alquinil fucosa, perisonicotinato de alquinil fucosa, éster per-PEG de alquinil fucosa, 1-metil-2, 3, 4-triacetil alquinil fucosa, o perisobutanoato de alquinil fucosa.

17. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa es tetraacetato de 6-ciano fucosa, tetraacetato de 5-metiléster fucosa, o tetraacetato de 6-bromo-fucosa.

18. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa es diacetato de 2-desoxi-2-fluorofucosa, triacetato de 2-desoxi-2-clorofucosa, 2-desoxi-2-fluorofucosa, peracetato de 2-desoxi-2-fluorofucosa, peracetato de 1, 2-difluoro-1, 2-didesoxi fucosa, o tetraacetato de 6, 6-difluorofucosa.

19. Método según la reivindicación 1, en donde el análogo de fucosa es 2-desoxi-2-fluorofucosa.

20. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde la cantidad efectiva es una cantidad del

análogo que es suficiente para reducir la incorporación de fucosa al complejo de cadenas de azúcares enlazadas por N-glucósido del anticuerpo o derivado de anticuerpo en el menos un 80%.

21. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 19 en donde menos del 5% del análogo de fucosa se incorpora al complejo de las cadenas de azúcares enlazadas por N-glucósido del anticuerpo o derivado de anticuerpo.

22. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes en donde la célula hospedadora es una célula hospedadora de ovario de hámster chino.

23. Método según cualquiera de las reivindicaciones precedentes que comprende purificar el anticuerpo o derivados de anticuerpo.

24. Medio de cultivo celular de mamíferos para la producción de anticuerpos o derivados de anticuerpos que

presentan fucosilación del núcleo reducida, que comprende una cantidad efectiva de un análogo de fucosa, en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (III) o (IV) :

o una sal o solvato biológicamente aceptables del mismo, en donde cada fórmula (III) o (IV) puede ser el anómero alfa o beta o la forma aldosa correspondiente;

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en flúor, cloro, -OH, -OC (O) H, OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O)

alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo; -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3 y –O alquilo C1-C10, en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5; y

cada R2a y R3a se selecciona independientemente del grupo que consiste en H, F y Cl;

R5 se selecciona del grupo que consiste en -CH3, -CHF2, -CH=C=CH2, -C≡CH, -C≡CCH3, -CH2C≡CH, 10 C (O) OCH3, -CH (OAc) CH3, -CN, -CH2CN, -CH2X (en donde X es Br, Cl o I) , y metoxiran;

en donde cuando R5 es distinto de -CH=C=CH2 o -CHF2, al menos uno de R1, R2, R3, R2a y R3a es flúor o cloro;

o en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (I)

o (II) :

o una sal o solvato biológicamente aceptables del mismo, en donde:

cada fórmula (I) o (II) puede ser el anómero alfa o beta o la forma aldosa correspondiente;

cada R1-R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH, -OC (O) H, -OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, -OC (O)

alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquenilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2-C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo, -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, -OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3, y –O alquilo C1-C10 en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5; y

R5 se selecciona del grupo que consiste en -C≡CH, -C≡CCH3, - CH2C≡CH, -C (O) OCH3, -CH (OAc) CH3, -CN, -CH2CN, -CH2X (en donde X es Br, Cl o I) , y metoxiran.

o en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las siguientes fórmulas (V) o (VI) :

o una sal o solvato biológicamente aceptables del mismo, en donde cada fórmula (V) o (VI) puede ser el anómero alfa o beta o la forma aldosa correspondiente;

cada R1, R2, R2a, R3, R3a y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH, -OC (O) H, OC (O) alquilo C1-C10, -OC (O) alquenilo C2-C10, -OC (O) alquinilo C2-C10, -OC (O) arilo, -OC (O) heterociclo, OC (O) alquilen (arilo) C1-C10, -OC (O) alquilen (arilo) C2-C10, -OC (O) alquinil (arilo) C2-C10, -OC (O) alquilen heterociclo C1-C10, -OC (O) alquenilen (heterociclo) C2-C10, -OC (O) alquinil heterociclo C2-C10, -OCH2OC (O) alquilo, -OCH2OC (O) O alquilo, -OCH2OC (O) arilo, -OCH2OC (O) O arilo, -OC (O) CH2O (CH2CH2O) nCH3, -OC (O) CH2CH2O (CH2CH2O) nCH3, -O-tri-alquilsililo C1-C3, -O alquilo C1-C10, y un grupo sustractor de electrones pequeño, en donde cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0-5;

R5 es un miembro seleccionado del grupo que consiste en -CH3, -CH2X, -CH (X’) -alquilo C1-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH (X) - alqueno C2-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH (X’) - alquino C2-C4 sustituido o no sustituido con halógeno, -CH=C (R10) (R11) , -C (CH3) =C (R12) (R13) , C (R14) =C=C (R15) (R16) , carbociclo -C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH (X’) -carbociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, heterociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH (X’) -heterociclo C3 sustituido o no sustituido con metilo o halógeno, -CH2N3, -CH2CH2N3, y benciloximetilo, o R5 es un grupo sustractor de electrones pequeño; en donde R10 es hidrógeno o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno;

R11 es alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno;

R12 es hidrógeno, halógeno o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno; y

R13 es hidrógeno, o alquilo C1-C3 sustituido o no sustituido con halógeno;

R14 es hidrógeno o metilo;

R15 y R16 se seleccionan independientemente de hidrógeno, metilo y halógeno;

X es halógeno; y

X’ es halógeno o hidrógeno; y

adicionalmente, cada R1, R2, R2a, R3 y R3a son opcionalmente hidrógeno; opcionalmente dos R1, R2, R2a, R3 y R3a en átomos de carbono adyacentes se combinan para formar un doble enlace entre dichos átomos de carbono adyacentes; y

dado que al menos uno de R1, R2, R2a, R3, R3a, R4 y R5 es un pequeño grupo sustractor de electrones, o R5 comprende un halógeno, sitio de insaturación, carbociclo, heterociclo o azida, excepto cuando (i) R2 y R2a son ambos hidrógeno, (ii) R3 y R3a son ambos hidrógeno, (iii) R1 es hidrógeno, (iv) un doble enlace se encuentra presente entre dichos átomos de carbono adyacentes, o (v) R5 es benciloximetilo.

25. Medio de cultivo según la reivindicación 24, en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las fórmulas (III) o (IV) .

26. Medio de cultivo según la reivindicación 24, en donde el análogo de fucosa se selecciona del grupo que consiste en una de las fórmulas (I) o (II) .

27. Medio de cultivo según la reivindicación 26, en donde R5 se selecciona del grupo que consiste en -C≡CH y C≡CCH3.

28. Medio de cultivo según la reivindicación 25, en donde cada uno de R2, R3 y R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste en -OH y -OAc, R2 es F, cada uno de R2a y R3a es H; y R5 es CH3.

29. Medio de cultivo según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 28 en donde la cantidad efectiva es una cantidad de análogo que es suficiente para reducir la incorporación de la fucosa al complejo de cadenas de azúcares enlazadas por N-glucósido del anticuerpo o derivado de anticuerpo en al menos un 80%.