Método y composiciones para controlar ectoparásitos.

Uso de al menos un agente quelante de metales o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico,

veterinario o agrícola para la fabricación de una composición tópica para uso en la inhibición de la eclosión de un huevo de ectoparásito sobre un hospedador humano o animal, donde el al menos un agente quelante de metales es un compuesto de fórmula (Ia):

donde X es un enlace covalente, CH2-Z-CH2 o -Z-,

donde R1 y R1' son independientemente seleccionados entre hidrógeno o alquilo C1-3,

donde al menos uno de R2, R2', R3, R3', R4 y R4' es un grupo metilo y los R2, R2', R3, R3', R4 y R4' restantes son independientemente seleccionados entre hidrógeno o alquilo C1-3, y

Z es seleccionado entre un enlace covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- y -C(S)-.

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

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(continuación)

Número Inhibidor % Inhibición*

Fosforamidón (5 mM) 41

Actinonina (5 mM) 0

Bestatina (5 mM) 58

Nitrobestatina (1 mg/ml) 0

Amastatina (5 mM) 26

Leuhistina (5 mM) 0

Ebelactona (1, 2 y 5 mM) 0

L-Leucintiol (5 mM) 0

Fumagilina (5 mM) 0

Inhibidor de carboxipeptidasa (5 mM) 26

N-CBZ-PRO-LEU-GLY Hidroximato (10 mM) 0

Tetraciclina (5 mg/ml) 89

Doxiciclina (5 mg/ml) 69

Minociclina (5 mg/ml) 55

GM 1489 0

GM6001 0

Inhibidor IV 0

Diclorhidrato de clorhexidina 0

*Se ha calculado el porcentaje de inhibición de la eclosión de los huevos de los diferentes inhibidores de proteasas en relación a los controles apropiados y representa la máxima inhibición de la eclosión de los huevos observada.

Una serie de inhibidores de proteasas mostraron inhibir marcadamente la eclosión de los huevos de los piojos. Los inhibidores más efectivos estudiados incluían agentes quelantes de metales e inhibidores de metaloproteasas tales como 1, 10-fenantrolina, 2, 2-dipiridilo, 6, 6â?-dimetil-2, 2â?-dipiridilo y 5, 5â?-dimetil-2, 2â?-dipiridilo (100% de inhibición a 10 mM cada uno) . La bestatina, un inhibidor de metaloproteasas, era también capaz de inhibir significativamente la eclosión de los huevos (58% a 5 mM) .

Como inhibidores de metaloproteasas de la matriz (MMP) naturales y agentes quelantes de metales que son compuestos tetracíclicos en los que un anillo es un anillo de arilo y donde la estructura tetracíclica esta substituida con un número de grupos hidroxi, grupos carbonilo, una amina y una amida, se incluían: Tetraciclina (89% de inhibición a 5 mg/ml) , Doxiciclina (65% de inhibición a 5 mg/ml) y Minociclina (55% a 5 mg/ml) . Estos quelantes de metales mostraban actividad inhibitoria hacia la eclosión de los huevos; sin embargo, los resultados para estos compuestos eran más variables en magnitud y parecían ser dependientes del tiempo. La utilidad global de los inhibidores hidroxamato puede ser limitante debido al deseo de reducir el uso de antibióticos en el medio ambiente general. Estos resultados indican que los inhibidores MMP pueden también ejercer un efecto inhibitorio sobre la eclosión de los huevos de piojos. Otros inhibidores de proteasas que fueron estudiados incluían EDTA a 100 mM, EGTA a 10 mM y trietanolamina al 5%. Los resultados indicaban que estos inhibidores no parecían tener un efecto sobre la eclosión de los huevos a las concentraciones usadas (resultaos no mostrados) .

Ejemplo 7: efecto del lavado de los huevos después del tratamiento con 1, 10-fenantrolina

Se acometió un experimento para determinar si el lavado de los huevos afectaría a la actividad inhibitoria de la 1, 10fenantrolina (Tabla 3) . Se organizó también un grupo control (metanol al 5%) . Se calculó el porcentaje de inhibición 25 de la eclosión como el porcentaje de reducción en la eclosión de los huevos en comparación con el control no tratado. Se asignó al control no tratado un porcentaje de eclosión del 100%. Los resultados de este experimento 21

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(continuación

NIX-Pfizer

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

10 7 2 9 4 3 17 5 7 - - - 36 21 5

RID-Bayer

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

8 0 3 12 3 4 7 0 0 8 0 0 14 0 1

8 2 5 7 0 1 5 1 2 8 0 0 - - -

5 0 2 10 0 2 6 1 3 11 0 0 - - -

KP24KP24

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

7 7 0 10 10 0 10 1 3 10 0 0 10 0 0

6 6 0 10 9 0 0 0 0 7 0 0 8 0 0

9 8 0 - - - - - - - - - 12 0 1

1, 10-Fenantrolina (10 mM)

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

13 0 0 5 0 0 7 0 0 10 0 0 9 0 0

9 0 0 15 0 0 7 0 0 10 0 0 6 4 0

- - - 8 0 0 9 0 0 - - - 7 1 0

Control (metanol al 20%)

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

- - - 14 14 0 10 10 0 10 10 0 13 13 0

- - - 5 4 0 8 8 0 10 9 0 7 7 0

- - - - - 0 9 7 0 4 4 0 10 10 0

Control (no tratado)

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

10 9 0 11 11 0 25 24 0 10 8 0 20 20 0

20 18 0 8 7 0 10 10 0 11 10 0 20 18 0

- - - 8 8 0 - - - 10 10 0 - - -

Ejemplo 11: Valoración de productos comerciales para piojos adicionales

Los resultados del estudio de tres pediculicidas comerciales indican que exhibían niveles inconsistentes de actividad ovicida a través de los diferentes estadios de la eclosión de los huevos de los piojos, mientras que el compuesto 5 1, 10-fenantrolina era altamente efectivo en la inhibición de la eclosión de los huevos de los piojos.

Se evaluaron las propiedades ovicidas de dos productos comerciales principales para los piojos de la cabeza en el 10 ensayo estándar de eclosión de huevos de piojos. Los dos productos comerciales para los piojos de la cabeza eran los siguientes:

1. Pronto Plus® Shampoo Del Laboratories, principios activos, piretrinas al 0, 33%; y 2. Pronto Plus® Mousse Shampoo Del Laboratories, principios activos, piretrinas al 0, 33%.

Estos dos productos fueron estudiados según las recomendaciones del fabricante. Se trataron grupos de huevos (24 h de edad) con los diferentes productos según las recomendaciones del fabricante durante el período de tiempo apropiado (5-10 minutos) , seguido de un aclarado durante 1-2 minutos en agua a 32 º C. Se incorporaron también 20 dos controles negativos (sin tratamiento y etanol al 20%) . Tras la exposición a los diferentes productos, se secaron los huevos sobre papel de seda y se pusieron a 32 º C, 70% de HR, y se dejó que eclosionaran. Se trató a un segundo grupo de huevos (48 h de edad) como se ha descrito previamente y también se dejó que eclosionaran. Se repitió este procedimiento a intervalos de 24 h sobre huevos de piojos de la cabeza hasta las 120 h posteriores a la puesta. Este método de estudio de inhibidores refleja más estrechamente la situación de campo, en la que los 25 huevos de piojos estarán en diversos estadios de desarrollo sobre la cabeza, y permite observar los efectos inhibitorios sobre estos diferentes estadios del parásito. Los resultados de estos estudios son mostrados en la Tabla 8.

Tabla 8. Resultados de la eclosión de los huevos después del tratamiento con dos productos comerciales para 24

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piojos de la cabeza y controles a intervalos de 24 h tras la puesta de los huevos. Se indican los resultados para: N (número de huevos por réplica) , E (número de huevos eclosionados con éxito) y Pe (número de huevos parcialmente eclosionados) .

Pronto Plus Shampoo

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

14 10 2 11 9 0 30 27 0 35 30 0 40 38 2

20 15 3 21 18 0 19 16 0 42 36 0 38 29 5

- - - - - - - - - - - - - - -

Pronto Plus Mousse Shampoo

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

10 8 0 18 15 0 47 31 9 63 8 34 51 7 40

15 13 0 10 6 0 30 14 8 29 5 10 50 8 30

11 9 0 - - - 34 13 17 21 1 15 31 1 17

Control (etanol)

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

12 10 0 18 16 0 40 36 1 21 20 0 49 47 0

11 9 0 21 18 0 41 37 0 28 26 0 39 36 0

11 11 0 13 11 0 75 70 0 29 27 0 36 34 0

Control (no tratado)

Réplicas 24 h 48 h 72 h 96 h 120 h

N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe N E Pe

10 9 0 27 26 0 61 60 0 50 49 1 48 46 0

- - - - - - - - - - - - - - -

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Los resultados del estudio de... [Seguir leyendo]

** (Ver fórmula) **

** (Ver fórmula) **

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