Método para construir una bacteria nueva que pertenece al género Bifidobacterium.

Una bacteria que pertenece al género Bifidobacterium, en donde la bacteria es Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-11320.

Método para construir una bacteria nueva que pertenece al género Bifidobacterium Campo técnico

La presente invención se refiere a una bacteria que pertenece al género Bifidobacterium, un método para detectar la bacteria, un método para cuantificar un recuento bacteriano de la bacteria, y un método para cuantificar un recuento bacteriano viable de la bacteria.

Antecedentes de la técnica

Las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium son bacterias importantes de la flora bacteriana intestinal humana y se sabe que tienen efectos beneficiosos sobre la salud humana, tales como la regulación de la función intestinal, por ejemplo, la mejoría del estreñimiento y diarrea, la supresión del aumento del colesterol en el suero, y la inmunoestimulación. Por eso, hay disponibles varios productos comerciales que contienen las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium en forma de varios alimentos y bebidas fermentados, preparaciones probióticas, y similares. Particularmente, los alimentos y las bebidas de leche fermentada tienen una palatabilidad excelente; por lo tanto, son adecuadas para una ingestión continua de bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium.

Las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium son anaerobias obligadas y susceptibles al oxigeno, el pH bajo, y la acidez alta. Por lo tanto, hay muchas dificultades en el manejo de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium en alimentos y bebidas de leche fermentada en términos de proliferación durante la producción, viabilidad durante el almacenaje, y similares. Con el fin de obtener el efecto fisiológico de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium. se considera necesario suministrar tantas bacterias vivas en el intestino como sea posible. Particularmente, se considera un factor importante el aumento de la viabilidad de las bacterias en los alimentos y bebidas, concretamente la llegada de las bacterias ingeridas al intestino.

Con el fin de resolver los problemas anteriores, se ha hecho un intento para mejorar la viabilidad en los alimentos y bebidas de leche fermentada mejorando el método de producción y añadiendo varios agentes mejoradores de la viabilidad tal como la N-acetil glucosamina, ácido pantoténico, péptidos, y lactulosa. Sin embargo, tal agente mejorador de la viabilidad para las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium no se puede añadir fácilmente debido no solo al aumento del coste de producción sino porque causa problemas tales como la reducción de la palatabilidad. Además, también se ha estudiado un método que bloquee completamente el contacto de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium con el oxigeno depositando un producto fermentado que contiene las bacterias en un envase compuesto por un material de envasado impermeable al oxígeno inmediatamente después que se haya producido el producto. Sin embargo, aún no hay disponible un envase impermeable al oxígeno perfecto. Además no hay mucha flexibilidad para dar forma a tal envase, y su depósito en la basura se complica ya que el envase se fabrica utilizando materiales compuestos. Además, el envase en sí mismo es caro, etc. Como se ha mencionado anteriormente, hay muchas limitaciones en la utilización del envase.

En consecuencia, una solución fundamental para mejorar la viabilidad de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium en los alimentos y bebidas fermentadas es producir bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium que tengan una alta viabilidad incluso bajo condiciones aeróbicas y bajo condiciones de pH bajo y alta acidez. Ejemplos de tal cepa bacteriana incluyen el Bifidobacterium breve YIT 11 (FERM BP-825) (Documento Patente 1), Bifidobacterium breve SBR 3212 (FERM P-11915) (Documento Patente 2), y Bifidobacterium bifidum YIT 42 (FERM BP-138) (Documento Patente 3).

Sin embargo, existe un problema ya que se espera que estas cepas con viabilidad mejorada muestren sus efectos de viabilidad mejorada solamente bajo las condiciones en las que se han producido. O sea, en la producción de una cepa muíante de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium. se practica normalmente un método de subcultivo y almacenamiento de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium en un ambiente que es riguroso para el crecimiento de las bacterias y se obtiene una cepa superviviente. Aunque se puede esperar un cierto efecto en el nivel de mejoría de la viabilidad en un ambiente bajo el que se ha producido la capa muíante, no se puede esperar un efecto de mejora de la viabilidad en otros ambientes. En consecuencia, las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium que se obtienen por un método convencional no se pueden aplicar a los alimentos y bebidas que se distribuyen bajo una condición diferente que bajo la que se produjo la cepa muíante. En consecuencia, la utilidad del método convencional ha sido extremadamente limitada.

También, aunque la causa se desconoce, se sabe que incluso una cepa bacteriana con viabilidad mejorada obtenida por subcultivo y almacenamiento bajo condiciones con deterioro de los factores ambientales (por ejemplo, un pH en la región árida) no muestra su efecto de mejora de viabilidad cuando se utiliza bajo condiciones más favorables a un pH en la región neutra. Esta ha sido también una de las razones del fracaso en la obtención de una cepa bacteriana altamente versátil que sea aplicable a varios alimentos y bebidas.

El Documento Patente 4 se refiere a una bacteria del género Bifidobacterium y a los alimentos fermentados que

utilizan la misma.

Documento relacionados con la técnica

[Documento Patente 1] Publicación internacional N° WO 3/435 [Documento Patente 2] JP-292213 [Documento Patente 3] JP-B-61-1922 [Documento Patente 4] EP 1 443 15 A1

Divulgación de la invención

Problemas a resolver por la invención

En consecuencia, un objetivo de la presente invención es proporcionar un método para producir bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium que tienen una viabilidad excelente incluso bajo varias condiciones con factores ambientales diferentes, nuevas bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium obtenidas por el método, y un método para detectar las bacterias.

Medios para resolver los problemas

Los presentes inventores llevaron a cabo una investigación intensiva con el fin de resolver los problemas. Como resultado, han encontrado que, subcultivando y almacenando las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium alternativamente en al menos dos tipos de sistemas en los que las condiciones de los factores ambientales son diferentes al menos dos veces, se pueden obtener bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium que tienen una viabilidad excelente bajo las condiciones del subcultivo y almacenamiento alterno.

Además, como resultado de la investigación de un método para detectar específicamente las nuevas bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium obtenidas de esta manera, han encontrado un cebador capaz de amplificar específicamente un fragmento de ADN de las bacterias, y se ha descubierto que las bacterias se pueden detectar y cuantificar específicamente utilizando el cebador. Los presentes inventores han descubierto además que el recuento de bacterias viables de entre las bacterias anteriores se pueden cuantificar con una combinación del cebador y un colorante permeable a la membrana.

En el presente documento, se describe un método para producir bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium. que incluye el subcultivo y el almacenamiento de las bacterias que pertenecen al género Bifidobacterium de manera alterna en al menos dos tipos de sistemas bajo condiciones con diferentes factores ambientales al menos dos veces.

La presente invención proporciona una bacteria que pertenece al género Bifidobacterium. en que la bacteria es la Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132.

También, la presente invención proporciona un alimento o bebida, particularmente un alimento o bebida de leche fermentada que contiene dicha bacteria que pertenece al género Bifidobacterium.

También, la presente proporciona el uso de un fragmento de ADN que tiene una secuencia de nucleótidos

representada por la SEC ID N° 1 o la SEC ID N°2 o una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia

anterior para detectar o cuantificar al Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP- 1132.

También, la presente invención proporciona el uso de un cebador que tiene una secuencia de nucleótidos

representada por la SEC ID N° 1 o la SEC ID N°2 o una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia

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1. Una bacteria que pertenece al género Bifidobacterium, en donde la bacteria es Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132.

2. Un alimento o bebida que comprende la bacteria que pertenece al género Bifidobacterium de acuerdo con la reivindicación 1.

3. El alimento o bebida de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el alimento o bebida es un alimento o bebida fermentados tal como un alimento o bebida de leche fermentada.

4. El alimento o bebida de acuerdo con la reivindicación 2 o 3, que además comprende un edulcorante.

5. El uso de un fragmento de ADN que comprende una secuencia de nucleótidos representada por la SEC ID N° 1 o SEC ID N° 2 o una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia para detectar o cuantificar el Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132.

6. El uso de un cebador que comprende una secuencia de nucleótidos representada por la SEC ID N° 1 o SEC ID N° 2 o una secuencia de nucleótidos complementaria a la secuencia para detectar o cuantificar el Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132.

7. El uso de un grupo de cebadores que comprende la combinación de dos secuencias de nucleótidos representadas por las SEC ID Nos 1 y 2 o una combinación de dos secuencias de nucleótidos complementarias a las secuencias para detectar o cuantificar el Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP- 1132.

8. Un método para detectar el Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132, que comprende la detección por el uso del cebador como se define en la reivindicación 6 o 7.

9. Un método para cuantificar un recuento bacteriano del Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132, que comprende la cuantificación por el uso del cebador como se define en la

reivindicación 6 o 7.

1. Un método para cuantificar un recuento de bacterias viables de Bifidobacterium breve YIT 12272 que tiene el número de registro FERM BP-1132, que comprende la realización de una reacción PCR por el uso de una muestra tratada con un colorante permeable a la membrana y el cebador como se define en la reivindicación 6 o 7.