Lector, dispositivo y método de ensayo para medir la HCG.

Un lector de resultados de ensayo para su uso con un ensayo o dispositivo de ensayo adaptado para calcular una estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción en un sujeto humano femenino,

comprendiendo el lector de resultados de ensayo:

a) un primer umbral de analito almacenado correspondiente a 14 días desde la concepción,

b) un segundo umbral de analito almacenado correspondiente a 21 días desde la concepción,

c) un umbral mínimo de embarazo almacenado (PDTmin),

d) un medio de medición adaptado para medir un valor de la señal del analito correspondiente al nivel de hCG en una muestra de orina obtenida de dicho sujeto y comparar el valor de la señal del analito con el umbral mínimo de embarazo y con los primer y segundo umbrales de analito almacenados, ofreciendo de esta manera un estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción sobre la base de la comparación,

e) un medio de visualización adaptado para mostrar un tiempo desde la concepción, el cual se define con relación a la fecha del aumento de la LH;

en el que los resultados mostrados por el lector son los siguientes:

"no embarazada" si la señal del analito es menor que el umbral mínimo de embarazo;

1-2 semanas si la señal del analito es menor que el primer umbral de analito, pero mayor que el umbral mínimo de embarazo;

2-3 semanas si la señal del analito es mayor que o igual al primer umbral pero menor que o igual al segundo umbral; y

más de 3 semanas si la señal del analito es mayor que el segundo umbral.

Lector, dispositivo y método de ensayo para medir la HCG

Campo de la invención La presente invención se refiere a un lector, dispositivo y método de ensayo para proporcionar un tiempo desde la concepción.

Antecedentes de la invención En el sistema reproductor femenino, el ciclo menstrual es un ciclo recurrente de cambios fisiológicos y es necesario para la reproducción que se produce en las mujeres en edad reproductiva. Los ciclos menstruales se cuentan desde el primer día de flujo menstrual, dado que el inicio de la menstruación se corresponde estrechamente con el ciclo hormonal y porque el sangrado menstrual es una situación fácilmente identificable para la persona en cuestión. El ciclo menstrual se puede dividir en varias fases, y la duración de cada fase varía de mujer a mujer y de ciclo a ciclo. Las fases, así como sus valores medios, son típicamente los siguientes: la fase menstrual, días 1-4; la fase folicular (también conocida como fase proliferativa) , días 5-13; la ovulación, día 14; la fase lútea, día 15-26 y la fase isquémica, días 27-28.

La fase folicular es la fase del ciclo menstrual durante la cual maduran los folículos presentes en el ovario. Gracias a la influencia de un aumento de la hormona estimulante del folículo (FSH) , se movilizan entre cinco y siete folículos ováricos terciarios para su entrada en el próximo ciclo menstrual. A medida que maduran, los folículos secretan cantidades crecientes de estradiol. Cuando el óvulo ha madurado, segrega suficiente estradiol para desencadenar la liberación aguda de la hormona luteinizante (LH) . En el ciclo promedio, este «aumento de la LH» comienza alrededor del día 12 del ciclo y puede durar unas 48 horas. La liberación de LH hace madurar al óvulo y debilita la pared del folículo del ovario. Este proceso conduce a la ovulación. Los niveles de estrógenos siguen aumentando y alcanzan su punto más alto justo antes de que comience el aumento de la LH. La mayoría de las fuentes coinciden en que la ovulación ocurre normalmente 24-48 horas después del inicio del aumento de la LH, por lo general alrededor de 36 horas después del aumento de la LH.

La fase lútea es la última fase del ciclo menstrual y comienza con la formación del cuerpo lúteo y termina o bien en el embarazo o bien en la luteólisis. La principal hormona que controla de esta etapa es la progesterona, que es significativamente más alta durante la fase lútea que durante otras fases del ciclo. La duración de la fase folicular, y

en consecuencia la duración del ciclo menstrual, puede variar ampliamente; algunas mujeres tienen una fase folicular de 10 días, otras de 16 días, mientras que el promedio es de 14 días. No obstante, la fase lútea casi siempre dura el mismo número de días en cada mujer. La vida del esperma normal dentro de una mujer oscila entre 1 y 5 días. El período más fértil (el tiempo durante el cual la relación sexual es más probable que tenga como resultado el embarazo) abarca el tiempo desde unos 5 días antes de la ovulación hasta 1-2 días después de la ovulación. En un ciclo promedio de 28 días con una fase lútea de 14 días, esto corresponde a la segunda y el comienzo de la tercera semana del ciclo.

Después de la concepción, la placenta secreta º-hCG y señala al cuerpo lúteo que continúe la secreción de progesterona, manteniendo de esa manera el revestimiento grueso (endometrio) del útero. La secreción de º-hCG

continúa hasta que la placenta es capaz de secretar su propia progesterona. El nivel de la hormona hCG en el cuerpo humano se duplica aproximadamente cada 2, 2 días durante el primer trimestre del embarazo. Si el óvulo no es fecundado, y por lo tanto no se produce º-hCG, el cuerpo lúteo deja de secretar progesterona y se desintegra. En ausencia de progesterona, el revestimiento del útero es expulsado a través de la vagina (menstruación) y el ciclo menstrual comienza una vez más. Los niveles detectables de hCG en la orina comienzan en 5 mUI/ml durante la primera semana de gestación y se elevan hasta 100.000 mUI/ml entre 2 y 3 meses. Los valores disminuyen a entre el 10 % y el 15 % de las concentraciones máximas durante el segundo y el tercer trimestres. Por lo tanto, existe un intervalo muy amplio de valores de concentración del analito.

Existe una amplia gama de dispositivos de ensayo sencillos para determinar los niveles de hCG en la orina, tanto 55 para venta al público en general como para uso profesional. Tales dispositivos se utilizan para determinar si una mujer está embarazada o no mediante la medición de la presencia o ausencia de la hormona º-hCG. Hoy en día, las mujeres suelen adquirir un dispositivo de este tipo si sospechan que pueden estar embarazadas antes de consultar a un profesional sanitario.

Sin embargo, una vez que una mujer confirme o sospeche que está embarazada, es útil para ella saber de cuántas semanas está embarazada. Con este dato, la mujer, el médico o la comadrona pueden planificar el futuro gracias a la estimación de la fecha de nacimiento del bebé, además de poder elaborar una programación con otras fechas clave, tal como la ecografía de las doce semanas. Normalmente, el médico o la comadrona determinarán el tiempo transcurrido del embarazo tras preguntar a la mujer por el primer día de su último período menstrual basado en un 65 ciclo estándar de 28 días. Si bien se sabe que la fase lútea tiene una duración bastante constante de alrededor de 15 días, la fase folicular puede variar ampliamente entre, por ejemplo, 9 y 28 días. La duración de los ciclos puede variar ampliamente de una mujer a otra. Por lo tanto, la exactitud de la determinación del tiempo transcurrido del embarazo basándose en el primer día de su último período puede ser muy variable. Además, esto supone que la mujer ha dado la fecha correcta de su último período menstrual. Por consiguiente, las estimaciones realizadas por el médico sobre el tiempo transcurrido del embarazo únicamente sobre la base de los niveles de hCG pueden resultar

bastante inexactas. Mientras que un ensayo típico de la hCG puede proporcionar una indicación de si la sujeto está embarazada o no embarazada, no puede ofrecer por sí mismo ninguna indicación adicional del tiempo transcurrido del embarazo sin disponer de información más específica, tal como la fecha de la última ausencia de menstruación.

Existe una amplia gama de dispositivos de inmunoensayo sencillos para medir los niveles de analitos tales como la hCG en la orina, por ejemplo, el comercializado con el nombre de Unipath ClearblueRTM. Asimismo, se describen dispositivos de inmunoensayo de flujo lateral en el documento EP291194. Aunque tales dispositivos son capaces de indicar la presencia o la ausencia de hCG por encima o por debajo de un cierto umbral, típicamente 10 o 25 mUI, e indicar si una sujeto está embarazada o no embarazada, no son capaces de determinar los niveles del analito en un amplio intervalo de analito, tales como los niveles de hCG comprendidos entre 10 y 250.000 mUI.

En principio, es posible medir los niveles de hCG en un amplio intervalo usando un sencillo dispositivo de tipo de flujo lateral. Sin embargo, una mera indicación de la cantidad de hCG en unidades basadas en concentración tendría una utilidad limitada para un profesional sanitario, sin disponer de información en cuanto a la fecha de la última ausencia de período menstrual, y casi con seguridad carecería de toda utilidad para el usuario lego.

Se han desarrollado y comercializado dispositivos de flujo lateral, tales como los descritos en el documento EP291194, para la detección de una serie de analitos en muestras líquidas. Tales dispositivos comprenden típicamente un soporte poroso que comprende un reactivo de unión marcado movilizable seco, capaz de unirse al analito en cuestión, y un reactivo de unión inmovilizado, también capaz de unirse al analito, situado en una zona de detección posterior al reactivo de unión marcado. La detección del reactivo de unión marcado inmovilizado en la zona de detección proporciona una indicación de la presencia del analito en la muestra.

De manera alternativa, cuando el analito de interés es un hapteno, el dispositivo de inmunoensayo puede emplear una reacción de competición, en la que un analito o un análogo del analito marcados compiten con el analito presente en la muestra por un reactivo de unión inmovilizado en la zona de detección. De manera alternativa, el dispositivo de ensayo puede emplear una reacción de inhibición, en la que se proporcionan un analito o un análogo del analito inmovilizados en una zona de detección y el dispositivo de ensayo comprende un reactivo de unión marcado movilizable para el analito.

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1. Un lector de resultados de ensayo para su uso con un ensayo o dispositivo de ensayo adaptado para calcular una estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción en un sujeto humano femenino, comprendiendo el 5 lector de resultados de ensayo: a) un primer umbral de analito almacenado correspondiente a 14 días desde la concepción, b) un segundo umbral de analito almacenado correspondiente a 21 días desde la concepción,

c) un umbral mínimo de embarazo almacenado (PDTmin) , d) un medio de medición adaptado para medir un valor de la señal del analito correspondiente al nivel de hCG en una muestra de orina obtenida de dicho sujeto y comparar el valor de la señal del analito con el umbral mínimo de embarazo y con los primer y segundo umbrales de analito almacenados, ofreciendo de esta manera un estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción sobre la base de la comparación, e) un medio de visualización adaptado para mostrar un tiempo desde la concepción, el cual se define con relación a la fecha del aumento de la LH;

en el que los resultados mostrados por el lector son los siguientes: «no embarazada» si la señal del analito es menor que el umbral mínimo de embarazo;

1-2 semanas si la señal del analito es menor que el primer umbral de analito, pero mayor que el umbral mínimo de embarazo; 2-3 semanas si la señal del analito es mayor que o igual al primer umbral pero menor que o igual al segundo umbral;

y más de 3 semanas si la señal del analito es mayor que el segundo umbral.

2. Un dispositivo de ensayo adaptado para proporcionar una estimación cuantitativa del lapso de tiempo transcurrido desde la concepción en un sujeto mamífero hembra, comprendiendo el dispositivo de ensayo:

a) un lector de resultados de ensayo de acuerdo con la reivindicación 1; y

b) uno o más ensayos para proporcionar un valor de la señal dependiente del nivel de hCG en una muestra de orina del sujeto.

3. Un método para determinar una estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción en un sujeto mamífero hembra, consistiendo el método en:

a) aplicar una muestra de orina del sujeto que presuntamente contiene hCG a un ensayo o dispositivo de ensayo;

b) medir, por medio de dicho ensayo o dispositivo de ensayo, una señal de medición del analito, cuyo valor depende del nivel de hCG;

c) comparar el valor de la señal medida con un umbral mínimo de embarazo (PDTmin) , en donde un valor de la señal del analito menor que el umbral mínimo de embarazo indica que la sujeto no está embarazada, y un valor de señal del analito por encima del umbral mínimo del embarazo indica la sujeto está embarazada;

d) comparar el valor de la señal medida con un primer umbral de analito que corresponde a 14 días desde la concepción;

e) comparar el valor de la señal medida con un segundo umbral de analito que corresponde a 21 días desde la concepción; y

f) proporcionar una estimación cuantitativa del lapso de tiempo desde la concepción basada en las comparaciones realizadas en las etapas (c) , (d) y (e) , de la siguiente manera:

1. 2 semanas si la señal del analito es menor que el primer umbral de analito, pero mayor que el umbral mínimo de embarazo;

2-3 semanas si la señal del analito es mayor que o igual al primer umbral pero menor que o igual al segundo umbral; y más de 3 semanas si la señal del analito es mayor que el segundo umbral; y en donde el tiempo desde la concepción se define con relación a la fecha del aumento de la LH.

4. El lector, dispositivo o método de ensayo de acuerdo con una cualquiera de las respectivas reivindicaciones anteriores, en el que el primer umbral de analito y el segundo umbral de analito se pueden obtener a partir del análisis de un primer conjunto de datos que comprende los niveles urinarios de hCG medidos como una función del tiempo desde la concepción, y de un segundo conjunto de datos que comprende los niveles de señal medidos para dicho ensayo o dispositivo de ensayo como una función del nivel urinario de hCG.

5. El lector de ensayo o dispositivo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 o 4, que comprende además uno o más umbrales de analito almacenados adicionales correspondientes a uno o más tiempos desde la concepción.

6. El dispositivo de ensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 o 4 o 5, que comprende una primera vía de flujo de ensayo que tiene una zona de detección para la medición de la hCG en un intervalo de concentración inferior y una segunda vía de flujo de ensayo que tiene una zona de detección para la medición de la hCG en un intervalo de concentración superior, comprendiendo el dispositivo un reactivo de unión marcado movilizable para la hCG anterior a la primera zona de detección del ensayo y un segundo reactivo de unión marcado movilizable para la hCG y un reactivo de unión marcado para la hCG anterior a la segunda zona de detección del ensayo.

7. El dispositivo de ensayo de acuerdo con la reivindicación 6, en el que cada vía de flujo comprende,

preferentemente, una sola zona de detección. 25

8. El dispositivo de ensayo de acuerdo con la reivindicación 6 o 7, que comprende una zona de referencia compartida y/o una zona de control compartida.

9. El dispositivo de ensayo de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende un único fotodetector para detectar la

luz de ambas zonas de detección, y cuatro fuentes luminosas para iluminar, respectivamente, una zona de referencia compartida, una zona de control compartida y las dos zonas de detección.

10. El dispositivo de ensayo de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, en el que la zona de referencia está situada a continuación de una zona de detección. 35

11. El dispositivo de ensayo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6-10, en el que una o ambas vías de flujo de ensayo comprenden un soporte poroso de flujo lateral.

12. El dispositivo de ensayo de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho soporte poroso comprende 40 nitrocelulosa.