Formulación biocida libre de agentes conservantes.

Formulación biocida libre de agentes conservantes. Se describe una composición bacteriostática para la fabricación de suspensiones bacterianas o suspensiones de proteínas y el uso de las citadas suspensiones en formulaciones biocidas y/o fitosanitarios verdes que comprenden una disolución acuosa de un poliol y un agente dispersante en donde la relación poliol/agente dispersante está comprendida entre 30:

1 (peso/peso) y 110:1 (peso/peso). Se describen suspensiones con un sólido inerte con un tamaño de partícula menor a 40 micras y formulaciones biocidas que comprende un material biológico como proteínas y cepas bacterianas. Se describen formulaciones biocidas de Bacillus subtillis y cistatina.

Agente bacteriostático para suspensiones bacterianas Campo técnico de la invención

La presente invención describe una composición bacteriostática para la fabricación de 5 suspensiones bacterianas o suspensiones de proteínas y el uso de las citadas suspensiones en formulaciones biocidas y/o fitosanitarios verdes.

Antecedentes de la invención

En los últimos años existe un interés por el desarrollo de productos fitosanitarios respetuosos con el medio ambiente que no contenga componentes tóxicos para el ser humano ni para el 10 ecosistema, desarrollándose los biocidas verdes. Entre los biocidas verdes destacan las diferentes familias, especies y cepas de bacterias con actividad biocida, como por ejemplo Bacillus spp., Pseudomonas spp. o levaduras. Asimismo, se ha descrito la actividad biocida de diferentes proteínas con propiedades insecticidas como por ejemplo las cistatinas.

El material biológico se almacena adsorbido en sustratos inertes, tales como el caolín, sílice, 15 zeolítas, óxidos de zinc, arcillas, tierra de diatomeas, polisacáridos o carbonatos.

Para el uso de los microorganismos en formulaciones líquidas es necesario formular una suspensión estable, es decir, que con el tiempo no se produzcan decantaciones o precipitaciones del material Inerte.

Es conocido que las soluciones acuosas deben contener agentes bacteriostáticos o 20 conservantes para evitar la contaminación microbiana. Es conocido el uso de parabenos, azldas o isotiozolina para este fin. Sin embargo, estos productos son tóxicos y contaminantes del medio ambiente y, en consecuencia, no son adecuados para ser usados en "biocidas /fitosanitarios verdes".

Por lo expuesto anteriormente, las formulaciones líquidas que comprenden material biológico 25 tienen diferentes inconvenientes:

-Las disoluciones deben ser homogéneas y no deben presentar separación de fases en el tiempo,

-Las formulaciones deben mantener su actividad biocida en el tiempo, es decir, el microorganismo debe ser viable durante al menos dos años,

-Las formulaciones no deben contaminarse con microorganismos exógenos sin usar agentes bactericidas o conservantes.

El experto en la materia conoce la existencia de agentes dispersantes que garantizan la estabilidad de las suspensiones pero los agentes disperantes son incompatibles con las la viabilidad posterior de las bacterias. Por otra parte, el contenido en agua es un factor crítico; una baja concentración en agua no garantiza una correcta homogenización de las suspensiones, produciéndose la precipitación de los excipientes o soportes de las bacterias, y por otra parte, un contenido excesivo en agua acelerará la contaminación microbiana de las formulaciones por parte de otras especies de bacterianas o hongos.

Los documentos más cercanos a la invención, W0200624095, CN101048136, CA110384 y US2006270745, describen composiciones que comprenden disoluciones que comprenden polioles y agentes dispersantes que son utilizados para la formulación de emulsiones y micro emulsiones en aceite/ agua (O/W).

Objeto de la invención

El problema que resuelve la invención es encontrar un agente bacteriostático, respetuoso con el medio ambiente, que evite la contaminación microbiana exógena en las soluciones acuosas y garantice la estabilidad de las suspensiones en el tiempo.

La solución encontrada por los inventores es una mezcla, libre de fase grasa, que comprende un poliol y un agente dispersante en donde la relación poliol/ agente dispersante está comprendida entre 30:1 (peso/peso) y 110:1 (peso/peso).

Otra ventaja de la invención es garantizar la estabilidad física de las suspensiones bacterianas inoculadas en su soporte inerte. Mediante la selección de policarboxilato sódico o naftalensulfonato condensado como agentes dispersantes se obtienen suspensiones en las que no se observa precipitación de los sólidos inertes suspendidos.

Adicionalmente, la alta concentración en polioles proporciona a las suspensiones una elevada viscosidad y se evita el uso de modificadores Teológicos, como la goma xantana.

Otro problema resuelto por la invención es garantizar la viabilidad de los microorganismos y proteínas en las suspensiones y la actividad biocida de las formulaciones.

Las formulaciones biocidas con Bacillus subtilis mostraron la misma efectividad de las formulaciones sólidas de Bacillus subtilis contra la Sclerotinia de la lechuga.

Descripción de la invención

En un primer aspecto la invención describe una disolución acuosa de un poliol y un agente dispersante en donde la relación poliol/agente dispersante está comprendida entre 30:1 (peso/peso)y 110:1 (peso/peso).

Los agentes dispersantes comprenden alquilo-sulfonatos o sales de ésteres sulfúricos que deriven de monoalcoholes, sulfonatos o sales de ésteres sulfúricos de polialcoholes o de aminoalcoholes o de sus derivados, ésteres de ácidos grasos superiores con ácidos sulfónicos hidroxialquilos o sus sales, productos de sulfatación o de sulfonación de grasas, aceites, ceras o ácidos grasos superiores, o de sus ésteres, con monoalcoholes, derivados de ácidos sulfocarboxílicos o sulfopolicarboxílicos de bajos pesos moleculares, arilo-o alquiloarilo- sulfonatos, derivados del ácido fosfórico , aminas o poliaminas, compuestos de amonio cuaternario, compuestos de fosfonio y sulfonio, amidas, sulfonamidas, ácidos amino- carboxílicos, hidroxilatos de proteínas, ésteres de ácidos carboxílicos, derivados de la lignina, resinas naturales o sintéticas o sus sales, glucósidos, mucílagos o saponinas.

Los polioles son compuestos que tienen varios grupos hidroxilo, libres o esterificados.

Los soluciones obtenidas tras adicionar la mezcla poliol/ agente dispersante a diferentes cantidades de agua no mostraron crecimiento bacteriano hasta que la cantidad de agua fue mayor al 50% (peso/peso)

Los polioles utilizados fueron glicerina, sorbitol y monopropilenglicol. Los dispersantes utilizados fueron policarboxilato de sodio, naftalensulfonato sódico condensado, alquilsulfonato sódico, dispersantes poliméricos anfotéricos, polímeros acrílicos de estireno modificado.

En un segundo aspecto, la invención proporciona suspensiones con un sólido inerte con un tamaño de partícula menor a 50 mieras en la soluciones acuosas con la mezcla poliol/agente dispersante fueron estables tras la centrifugación, para concentraciones de sólido hasta el 2%. Los sólidos inertes utilizados fueron caolín, zeolita y sílice.

Los mejores resultados, sin formación de espuma persistente, se obtuvieron cuando el agente dispersante fue policarboxilato sódico o naftalensulfonato sódico, la relación poliol/agente dispersante fue 50:1 (peso/peso) y el contenido en agua menor al 50 % (peso/peso) sobre el total de la suspensión.

Las suspensiones anteriores admiten el uso de cualquier tamponante para ajustar el pH: citratos, fosfatos, etc. Asimismo, las suspensiones pueden contener diferentes mojantes como esteres de sorbitán etoxilados, alcoholes etoxilados, alquilpoligocósidos y sus sales, ásteres de sorbitol, con el fin de garantizar un tamaño adecuado de gota en la aplicación del producto y 5 su correcta adherencia sobre la superficie foliar.

La fabricación de suspensiones bacterianas se realiza según el siguiente procedimiento. Una cepa bacteria valorada se inocula en un soporte inerte de caolín o equivalente; posteriormente se prepara la solución acuosa junto con los dispersantes y el agente tamponante hasta solución completa, se añade una cepa bacteriana valorada adsorbida en su soporte inerte en 10 constante agitación entre 1000 y 1500 rpm con un dispersor tipo Cowles hasta incorporación completa y se lleva a volumen con el poliol hasta alcanzar la concentración deseada de la bacteria

El procedimiento anterior es adecuado para cualquier microorganismo, como Bacillus subtilis, Psedomonas, levaduras e incluso proteínas.

Los estudios de estabilidad acelerados a 549C no produjeron una disminución en la viabilidad de los microrganismos a los 14 días y estos resultados garantizan que la suspensión bacteriana a temperatura ambiente (20eC) será estable durante al menos 2 años.

Ejemplo 1. Actividad bacteriostática las mezclas poliol/agente dispersante

Se prepararon diferentes muestras variando la relación de poliol/agente dispersante en agua. 20 Las muestras se almacenaron-en botella cerrada a 209C, durante 6 meses. Se determinaron las unidades formadoras de colonia según el método descrito en la US Pharmacopeia.