Composiciones de vacunas que comprenden un coadyuvante de saponina.

Una composición inmunógena que comprende un antígeno de M. tuberculosis en combinación con un coadyuvante,

coadyuvante que comprende una fracción de saponina inmunológicamente activa derivada de la cortiza de Quijsalla saponaria presentada en forma de un liposoma y un lipopolisacárido en el que dicha fracción de saponina y dicho lipopolisacárido están ambos presentes en la composición a un nivel entre 1 μg y 30 μg por dosis, para su uso como un medicamento en seres humanos.

Composiciones de vacunas que comprenden un coadyuvante de saponina Campo técnico

La presente invención se refiere a composiciones de vacunas mejoradas, a procedimientos para fabricarlas y a su uso en medicina. En particular, la invención se refiere a composiciones de vacunas coadyuvadas en las que el coadyuvante es una formulación liposomal, que comprende una saponina y un lipopolisacárido.

Antecedentes técnicos

Se necesitan siempre composiciones o vacunas nuevas con una inmunogenicidad mejorada. Como una estrategia, se han usado coadyuvantes para probar y mejorar la respuesta ¡nmunitaria provocada por cualquier antígeno dado.

Los lipopolisacáridos (LPS) son las moléculas superficiales principales de, y se encuentran exclusivamente en, la lámina externa de la membrana exterior de bacterias gram-negativas. Los LPS impiden la destrucción de la bacteria por complementos del suero y células fagocíticas y están implicados en la adherencia para la colonización. Los LPS son un grupo de moléculas complejas estructuralmente relacionadas de aproximadamente 10.000 dalton de tamaño y consisten en tres regiones unidas de forma covalente:

(i) una cadena de polisacárido O-específica (antígeno O) en la región externa

(ii) una región central de oligosacárido del núcleo

(iii) lípido A - la región más interna que sirve como unión hidrófoba, comprende unidades de disacárido de glucosamina que llevan ácidos grasos de cadena larga.

Se ha mostrado que las actividades biológicas de LPS, tales como toxicidad letal, piropenicidad y coadyuvancia, están relacionadas con el resto de lípido A. Por el contrario, la inmunogenicidad está asociada con el componente de polisacárido O-específico (antígeno O). Tanto los LPS como el lípido A se conocen desde hace tiempo por sus efectos coadyuvantes fuertes, pero la alta toxicidad de estas moléculas ha impedido su uso en formulaciones de vacunas. Se ha hecho por lo tanto un esfuerzo significativo para reducir la toxicidad de los LPS o del lípido A manteniendo al mismo tiempo su coadyuvancia.

El mutante R595 de Salmonella minnesota se aisló en 1996 a partir de un cultivo de la cepa parental {lisa) (Luderitz y col. 1966 Ann. N. Y. Acad. Sci. 133: 349-374). En las colonias seleccionadas se exploró su susceptibilidad a lisis con un grupo de fagos y solo las colonias que presentaron un intervalo de sensibilidad estrecho (susceptibles a uno o dos fagos solamente) se seleccionaron para estudio adicional. Este esfuerzo condujo al aislamiento de una cepa mutante rugosa profunda que es defectuosa en la biosíntesis de LPS y se denomina S. minnesota R595.

En comparación con otros LPS, los producidos por el mutante S. minnesota R595 tienen una estructura relativamente sencilla.

(i) no contienen región O-específica - una característica que es responsable de la deriva del fenotipo liso de tipo silvestre al fenotipo rugoso mutante y produce una pérdida de virulencia

(ii) la región del núcleo es muy corta - esta característica aumenta la susceptibilidad de la cepa a una diversidad de productos químicos

(iii) el resto de lípido A está altamente acilado con hasta 7 ácidos grasos.

El 4-monofosforil lípido A (MPL), que puede obtenerse por la hidrólisis ácida de LPS extraído de una cepa mutante rugosa profunda de bacterias gram-negativas, mantiene las propiedades coadyuvantes de los LPS demostrando una toxicidad que está reducida en un factor de más de 1000 (como se mide por dosis letal en huevos embrionarios de pollo) (Johnson y col. 1987 Rev. Infect. Dis. 9 Supl.: S512-S516). Los LPS se calientan a relujo típicamente en soluciones de ácidos minerales para moderar su fuerza (por ejemplo, HCI 0,1 M) durante un periodo de aproximadamente 30 minutos. Este procedimiento produce desfosforilación en la posición 1 y descarbohidratación en la posición 6, produciendo MPL.

El monofosforil lípido A 3-O-desacilado (3D-MPL), que puede obtenerse por hidrólisis alcalina leve de MPL, tiene una toxicidad reducida adicionalmente manteniendo de nuevo la adyuvancia, véase el documento US 4.912.094 (Ribi Immunochemicals). La hidrólisis alcalina se realiza típicamente en disolvente orgánico, tal como una mezcla de cloroformo/metanol, por saturación con una solución acuosa de una base débil, tal como carbonato sódico 0,5 M a pH 10,5.

Se dispone de información adicional sobre la preparación de 3D-MPL en, por ejemplo, los documentos US 4.912.094 y WO02/078637 (Corixa Corporation).

Las saponinas de Quillaja son una mezcla de glucósidos de triterpeno extraídos de la corteza del árbol Quillaja saponaria. Se han empleado de forma extensa saponinas en bruto como coadyuvantes veterinarios. Quil-A es un extracto acuoso parcialmente purificado del material de saponina de Quillaja. QS21 es una fracción no tóxica purificada por HPLC de Quil A y su procedimiento de producción se describe (como QA21) en la Patente de Estados Unidos N.2: 5.057.540.

A modo de ejemplo, se han desarrollado vacunas contra la gripe y vacunas contra el virus de papiloma humano (VPH) con coadyuvantes.

El documento W096/33739 divulga una composición de vacuna que comprende una saponina inmunológicamente activa y un esteral.

Todavía hay una necesidad de vacunas mejoradas.

Los coadyuvantes que contienen lipopolisacáridos y saponinas de Quillaja se han divulgado anteriormente, por ejemplo en el documento EP0671948. Esta patente demostró una fuerte sinergia cuando se combinaba un lipopolisacárido (3D-MPL) con una saponina de Quillaja (QS21). Ahora se ha descubierto que pueden conseguirse buenas propiedades coadyuvantes con combinaciones de lipopolisacárido y saponina de quillaja como inmunoestimulantes en una composición coadyuvante incluso cuando los inmunoestimulantes están presentes en bajas cantidades en una dosis humana.

Declaración de la invención

La presente invención proporciona una composición inmunógena que comprende un antígeno de M. tuberculosis en combinación con un coadyuvante en el que el coadyuvante comprende una fracción saponina inmunológicamente activa obtenida de la corteza de Quillaja Saponaria Molina presentada en forma de un liposoma y un lipopolisacárido en la que dicha fracción de saponina y dicho polisacárido están ambos presentes en la composición a un nivel entre 1 pg y 30 pg por dosis, para su uso como un medicamento para seres humanos.

Adecuadamente el coadyuvante de saponina en forma de un liposoma de acuerdo con la invención comprende una fracción activa de la saponina obtenida de la corteza de Quillaja Saponaria Molina, tal como QS21 y un esteral, tal como colesterol, en una proporción saponina:esterol de 1:1 a 1:100 p/p.

En particular, dicha composición inmunógena comprende un antígeno con un epítopo de célula T CD4. Como alternativa, dicha composición inmunógena comprende un antígeno con un epítopo de células B.

En el presente documento se divulga el uso de (a) un antígeno o preparación antigénica del mismo y (b) un coadyuvante como se ha definido anteriormente en el presente documento en la elaboración de una composición inmunógena para inducir, en un ser humano, al menos dos, o todas de las siguientes: (i) una respuesta inmunitaria de células T CD4 mejorada contra dicho antígeno o preparación antigénica del mismo, (ii) una respuesta inmunitaria humoral mejorada contra dicho antígeno o preparación antigénica del mismo, (iii) una respuesta de células B de memoria mejorada contra dicho antígeno o preparación antigénica del mismo.

También se divulga en el presente documento el uso de un antígeno o preparación antigénica del mismo y un coadyuvante según se define en el presente documento en la preparación de una composición inmunógena para la vacunación de un ser humano, en particular un ser humano adulto anciano, contra el patógeno del que se obtiene el antígeno en la composición inmunógena.

Como se divulga en la presente memoria, la composición inmunógena es capaz de inducir una respuesta inmunitaria mejorada de células T CD4 contra dicho antígeno o preparación antigénica del mismo y en particular es capaz de inducir además bien una respuesta inmunitaria humoral o bien una respuesta de células B de memoria mejorada o las dos, comparada con la obtenida con el antígeno o composición antigénica sin potenciar con coadyuvante. Específicamente dicha respuesta inmunitaria de células T CD4 implica la inducción de una respuesta auxiliar T CD4 con reactividad cruzada. Específicamente dicha respuesta inmunitaria humoral implica la inducción de respuesta auxiliar humoral con reactividad cruzada.

También se divulga en el presente documento un procedimiento o uso como se ha definido anteriormente,... [Seguir leyendo]

1. Una composición inmunógena que comprende un antígeno de M. tuberculosis en combinación con un coadyuvante, coadyuvante que comprende una fracción de saponina inmunológicamente activa derivada de la cortiza de Quijsalla saponaria presentada en forma de un liposoma y un lipopolisacárido en el que dicha fracción de

saponina y dicho lipopolisacárido están ambos presentes en la composición a un nivel entre 1 pg y 30 pg por dosis, para su uso como un medicamento en seres humanos.

2. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con la reivindicación 1 en la que dicha composición coadyuvante comprende adicionalmente un esteral, en la que la relación de saponina:esterol es de 1:1 a 1:100 p/p.

3. La composición antigénica para su uso de acuerdo con la reivindicación 2 en la que dicho esteral es colesterol.

4. La composición antigénica para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en la que dicha

fracción de saponina inmunológicamente activa es QS21.

5. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la que dicho lipopolisacárido es un derivado del lípido A.

6. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con la reivindicación 5 en la que dicho derivado de lípido A 15 es 3D-MPL.

7. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con la reivindicación 6 en la que la relación QS21:3D-MPL es 1:1.

8. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende un antígeno de M. tuberculosis en combinación con un coadyuvante, coadyuvante que comprende QS21 presentado en forma de un

liposoma y 3D-MPL en la que dicha QS21 y dicho-D-MPL están ambos presentes en la composición a un nivel de 25 pg por dosis.

9. La composición inmunógena para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que el antígeno de M. tuberculosis es M72.