Composición farmacéutica que contiene neurotoxina 2 botulínica.

Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos en donde dicha toxina botulínica inhibe la contracción de músculos lisos.

Composición farmacéutica que contiene neurotoxina 2 botulfnica

La invención se refiere a una composición farmacéutica que contiene neurotoxina botulfnica de tipo A2 para su utilización en el tratamiento de trastornos de músculos lisos.

La neurotoxina botulfnica actualmente más utilizada es la neurotoxina botulfnica tipo A. Esta neurotoxina se produce durante la fermentación en presencia de cepas de Clostridium botulinum. Los complejos de neurotoxina botulfnica tipo A (que comprenden la neurotoxina botulfnica tipo A y al menos otra proteína atóxica) son principios activos ampliamente utilizados en la medicina moderna. Un ejemplo de una composición farmacéutica a base de un complejo de este tipo es el producto Dysport® actualmente comercializado por la compañía de los solicitantes. Entre las indicaciones médicas más frecuentes para las que una neurotoxina botulfnica tipo A se podría utilizar, se puede mencionar el tratamiento de una serie de trastornos musculares (p. ej., blefaroespasmo, espasmo hemlfaclal, tortícolis, espasticidad, cefalea por tensión, dolor de espalda o las arrugas), así como otros trastornos tales como la migraña. Alternativamente, la toxina botulfnica de alta pureza (es decir, la neurotoxina botulfnica libre de sus proteínas atóxicas complejantes) puede reemplazar el correspondiente complejo de toxina botulfnica como se describe en las solicitudes PCT WO 96/11699 o WO 97/3564.

Actualmente, las composiciones de la neurotoxina botulfnica comercializadas contienen albúmina de suero humano. Sin embargo, algunos han expresado preocupaciones sobre la albúmina (véase, p. ej. en la solicitud de patente PCT WO 1/58472). Por esta razón, la industria farmacéutica está considerando actualmente encontrar agentes estabilizantes alternativos a la albúmina por otros agentes estabilizantes en las composiciones farmacéuticas.

Una posible solución se describe en la solicitud de patente PCT WO 1/58472. En este documento, la albúmina se sustituye por un polisacárido, es decir, un polímero de más de dos monómeros en la molécula de sacárldo, que desempeña la función del estabilizador en la composición de neurotoxina botulfnica.

Una solución alternativa es la descrita en la solicitud de patente PCT WO 97/3564 o en las patentes de EE.UU. n° 5.512.547 y n° 5.756.468. En estos documentos, se describe que la trehalosa puede estabilizar la neurotoxina botulfnica pura (es decir, la neurotoxina botulfnica sin sus proteínas atóxicas complejantes). El solicitante ha descubierto inesperadamente que un agente tensloactlvo posee efectos estabilizadores suficientes para reemplazar la albúmina, el polisacárido de la solicitud de patente PCT WO 1/58472 o la trehalosa de la solicitud de patente PCT WO 97/3564 en las composiciones de la neurotoxina botulfnica.

Por consiguiente, la invención se refiere al empleo de un tensloactlvo para estabilizar una composición farmacéutica sólida o líquida que contiene como principio activo una toxina botulfnica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de trastornos de músculos lisos.

Por toxina botulfnica debe entenderse una toxina botulfnica de origen natural o cualquier toxina botulfnica producida de forma recombinante.

Por toxina botulfnica de origen natural debe entenderse ya sea una neurotoxina botulfnica de alta pureza procedente de Clostridium spp o un complejo de neurotoxina botulfnica procedente de Clostridium spp.

Por neurotoxina botulfnica de alta pureza se entiende, en la presente solicitud, neurotoxina botulfnica fuera de los complejos incluida al menos otra proteína, en otras palabras, una neurotoxina botulfnica de alta pureza no contiene cantidades significativas de ninguna otra proteína procedente de Clostridium spp que la neurotoxina botulfnica.

Además, según la presente invención, los complejos de neurotoxina botulfnica y de neurotoxlnas botulínicas de alta pureza serán complejos de neurotoxina botulfnica y neurotoxina botulfnica tipo A2 de alta pureza.

Los expertos en la técnica están haciendo referencia cada vez más a la toxina botulfnica tipo A clásica (es decir, el principio activo de los productos comercializados Dysport y Botox) como toxina botulfnica tipo A1. Esto es para distinguirla de la toxina botulfnica tipo A2 originalmente aislada de casos de botullsmo del lactante en 199, que es una toxina botulfnica inmunológica y bioquímicamente distinta. En la presente solicitud de patente, por lo tanto, se va a utilizar esta nomenclatura.

Los organismos productores de la toxina tipo A2 de Clostridium botulinum se identificaron por primera vez en 199 en Japón, a partir de múltiples casos de botulismo del lactante (Sakaguchl et al., Int. J. Food Microbio!. (199), 11, 231-242). El botulismo del lactante, o botulismo por colonización Intestinal se diferencia del botullsmo por transmisión alimentaria en que la toxina se produce después de la Infección del paciente, en lugar de preformarse en los alimentos. Las cepas clínicas más estrechamente relacionadas con la toxina de tipo A2 son Kyoto-F, Chiba-H, Y- 836, 713-H, 715-H y KZ 1828, aunque varias otras han sido caracterizadas como tipo A2 por métodos moleculares (Córdoba et al., System Appl. Microbio!. (1995), 18, 13-22; Franclosa et al., resumen presentado en el 4th. Interagency Botulism Research Coordinating Commlttee (IBRCC) Meetlng, noviembre de 23).

La toxina botulínica tipo A2 es una neurotoxina única que se ha demostrado que es un tipo distinto de toxina en comparación con otros tipos de toxina botulínica A - G. La toxina botulínica tipo A2 difiere de la toxina tipo A1 en sus características genéticas moleculares, sus características bioquímicas y en sus características ¡nmunológicas.

A nivel genético molecular, la organización del grupo de genes de neurotoxina tipo A2 es distinta de los demás tipos de toxina botulínica. Muchos tipos de toxina botulínica, incluidas las toxinas botullnicas tipo A, se encuentran en forma de complejos de neurotoxina con proteínas de hemaglutinina (HA) como componentes del complejo. Los genes que codifican estas proteínas HA (HA17, HA34 y HA7) están contenidos en el grupo de genes de neurotoxina tipo de organismos A, B, C, D y G, pero faltan totalmente en el grupo de genes de neurotoxina tipo A2. El grupo de genes de neurotoxina tipo A2 también contiene genes reguladores tales como p47, que faltan en los grupos de genes neurotoxina tipo A1. Además, se ha demostrado que la secuencia de la proteína NTNH del complejo de toxina tipo A2 que es un mosaico de secuencias génicas de NTNH tipo C y tipo A1 (Kubota et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1996), 224 (3), 843-848).

La toxina tipo A2 y la toxina A tipo A1 también difieren notablemente en las características bioquímicas del complejo de toxina purificada. Mientras que el complejo de toxina tipo A1 contiene la proteína NTNH, y al menos tres proteínas HA (HA17, HA34 y HA7), el complejo de toxina tipo A2 contiene sólo una proteína NTNH y carece de las proteínas HA (Sakaguchi et al., Int. J. Food Microbiol. (199), 11, 231-242). La propia molécula de neurotoxina se diferencia en el peso molecular, siendo la cadena pesada de 11 kDa en la toxina de tipo A2 y de 93 kDa en la toxina de tipo A1, y presenta diferente sensibilidad a las proteasas (Kozaki et al., Microbiol. Immunol. (1995), 39(1), 161-1 A). La secuencia de aminoácidos de las toxinas de tipo A2 y de tipo A1 son notablemente diferentes, particularmente en la región de la cadena pesada, donde 19 de los 847 aminoácidos son diferentes entre los dos tipos de toxina (diferencia del 13%) (Córdoba et al., System Appl. Microbiol. (1995), 18, 13-22). Las secuencias de cadena pesada de las cepas de toxinas de tipo A1, por el contrario, suelen diferenciarse en menos del 2%. Las cadenas pesadas de las neurotoxinas botullnicas son responsables de las funciones biológicas esenciales de la molécula, Incluyendo la unión del receptor en las células diana y el tráfico intracelular (Zhang et al., Gen (23), 315, 21-32). De hecho, los estudios de unión de neurotoxinas A2 y A1 han presentado diferentes características de unión de las dos toxinas a sinaptosomas purificados (Kozaki etal., Microbiol. Immunol. (1995), 39(1), 767-74).

La toxina botulínica tipo A2 también es inmunológicamente distinta. Los anticuerpos generados contra la toxina tipo A se ha demostrado que no reconocen la toxina botulínica tipo A2 (y viceversa) en experimentos de inmunodifusión, ELISA e ¡nmunotransferencias Western (Sakaguchi et al., Int. J. Food Microbiol. (199), 11, 231- 242; Kozaki et al., Microbiol. Immunol. (1995), 39(1), 767-74). Lo más importante, sin embargo, es que los anticuerpos generados contra toxinas de tipo A1, aunque pueden neutralizar la toxicidad de la toxina de tipo A1 en... [Seguir leyendo]

1. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos en donde dicha toxina botulínica inhibe la contracción de músculos lisos.

2. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según la reivindicación 1, en donde dicha toxina botulínica tipo A2 es el complejo de neurotoxina botulínica tipo A2 o la neurotoxina botulínica tipo A2 de alta pureza y en donde dicha toxina botulínica tipo A2 forma parte de una composición farmacéutica sólida o líquida que comprende además un tensioactivo, preferiblemente un tensioactivo

no iónico.

3. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según la reivindicación 2, en donde dicha composición farmacéutica sólida o líquida comprende además un agente cristalino, preferiblemente cloruro de sodio.

4. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según la reivindicación 2 o 3, en donde dicha composición farmacéutica sólida o líquida comprende además un tampón para mantener el pH entre 5,5 y 7,5, preferiblemente entre 5,8 y 7,.

5. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde dicha composición farmacéutica sólida o líquida comprende además un disacárido, preferiblemente seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, trehalosa, lactosa y manitol.

6. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en donde dicho tensioactivo es un tensioactivo no iónico seleccionado del grupo que consiste en polisorbatos y copolímeros en bloque.

7. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según la reivindicación 6, en donde el tensioactivo no iónico se selecciona del grupo que consiste en polisorbatos que tienen un grado medio de polimerización que oscila entre 2 a 1 unidades monoméricas y poloxámeros.

8. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización en el tratamiento de un trastorno de los músculos lisos según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, en donde dicho tensioactivo no iónico es polisorbato 8.

9. Toxina botulínica tipo A2 para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para el tratamiento de una enfermedad, afección o síndrome seleccionado de entre trastornos gastrointestinales, trastornos urogenitales o dolor asociado a trastornos del músculo liso.