Composición emulsionada para dilución y composición de vacuna contra el cáncer.

Uso de una composición emulsionada para dilución de un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo,

en donde la composición emulsionada comprende:

A) un éster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el éster un punto de solidificación no mayor que 10ºC, en 50 a 90% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 20 moles de óxido de etileno, en 0,5 a 20% en peso;

C) un emulsificante que es un éster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el éster parcial líquido a 40ºC, en 0 a 20% en peso; y

D) agua en 5 a 20% en peso.

Composición emulsionada para dilución y composición de vacuna contra el cáncer Campo Técnico

La presente invención pertenece al campo de la inmunoterapia del cáncer y se refiere al uso de una composición emulsionada para dilución de un péptido de antígeno tumoral o un dímero del mismo, que tiene actividad de inducción de las células T citotóxicas. Más específicamente, la presente invención se refiere al uso de una composición emulsionada para dilución de un péptido de antígeno tumoral o un dímero del mismo, que comprende un éster particular, un tensioactivo, un emulsificante, y una fase acuosa, y que se encuentra en la forma de una emulsión W/O estable. La presente invención se refiere también a una composición de vacuna contra el cáncer o inductor específico de las células T citotóxicas, que comprende un éster particular, un tensioactivo, un emulsificante, y una fase acuosa que comprende un péptido de antígeno tumoral constituido por una secuencia particular de aminoácidos o un dímero de la misma, y que se encuentra en la forma de una emulsión W/O estable.

Técnica anterior

En la eliminación de las células del cáncer, células infectadas por virus y análogas por el cuerpo vivo, la inmunidad celular, particularmente las células T citotóxicas (a las que se hace referencia en lo sucesivo como CTL) juegan un papel importante. CTL reconoce el complejo formado en las células del cáncer por un péptido antigénico derivado de una proteína antigénica del cáncer (péptido de antígeno tumoral) y el antígeno de clase I del MHC (Complejo de Histocompatibilidad Mayor) (designado en el caso de los humanos como antígeno HLA), y ataca/destruye las células del cáncer.

Como un ejemplo representativo de la proteína antigénica del cáncer, pueden mencionarse las descritas en la Tabla de Inmunidad, volumen 1, página 281, 1999. Específicamente, pueden mencionarse gp1 y MART-1, que son proteínas específicas del tejido de los melanocitos, y las proteínas del melanosoma tales como tirosinasa. Como la proteína antigénica del cáncer distinta del melanoma pueden mencionarse marcadores del cáncer tales como CEA, PSA, y HER2/neu. Se puede mencionar también TERT, cuya expresión aumenta en el cáncer. Adicionalmente, es conocida también WT1, que se expresa también abundantemente en muchos tipos de cáncer, como una nueva proteína antigénica del cáncer en la leucemia y cánceres sólidos.

El péptido de antígeno tumoral es un péptido resultante del procesamiento de una proteína antigénica del cáncer por una proteasa intracelular. Como se ha indicado arriba, un complejo de este péptido de antígeno tumoral resultante y el antígeno del MHC clase I (antígeno HLA) se presenta a la superficie de la célula y es reconocido por CTL. Sin embargo, en el desarrollo de un agente inmunoterapéutico del cáncer (vacuna contra el cáncer) utilizando la destrucción de las células del cáncer por CTL, ha resultado difícil inducir eficientemente CTL utilizando aisladamente un solo péptido de antígeno tumoral, debido a la inmunogenicidad generalmente baja. Por tanto, existe demanda del desarrollo de una preparación capaz de estimular la inducción de CTL.

A este fin, se han realizado muchas investigaciones concernientes a preparaciones que estimulen la inducción de CTL. Particularmente, se han llevado a cabo gran número de investigaciones concernientes a preparaciones de tipo emulsión.

Generalmente, existen diferentes tipos de preparaciones de emulsión: emulsiones O/W y emulsiones W/O.

En el caso de las emulsiones O/W, el péptido que sirve como el antígeno no puede retenerse en la fase interna, y no se exhibe actividad de inducción de CTL específica terapéuticamente eficaz.

En el caso de las emulsiones W/O, en las cuales la fase acuosa sirve como la fase interna, se espera una actividad de inducción de CTL excelente, debido a que el péptido que sirve como el antígeno es fácil de retener en la fase interna, pero deben resolverse muchos problemas por resolver antes que aquéllas puedan llevarse a aplicaciones prácticas.

Por ejemplo, como una emulsión W/O para portador del péptido de antígeno tumoral, es conocido el adyuvante incompleto de Freund, pero en algunos casos no puede obtenerse actividad eficaz debido a estabilidad insuficiente. Se han registrado otros problemas tales como dificultad en la administración debida a viscosidad alta.

El adyuvante incompleto de Freund es conocido desde hace mucho tiempo como un adyuvante inmunopotenciador que hace que bacterias desactivadas o virus desactivados se incluyan para inducir producción de anticuerpos, y se han investigado composiciones de vacuna de tipo emulsión W/O alternativas; por ejemplo, se propusieron las composiciones descritas en la Publicación de Patente Japonesa Kohyo No. HEI-7-59733, el panfleto para la Publicación de Patente Internacional No. 94/271, y la Publicación de Patente Japonesa Kokai No.HEI-9-26813.

Como sustituto para el adyuvante incompleto de Freud, se propone una aplicación de emulsión compuesta W/O/W para vacuna en la Publicación de Patente Japonesa Kokai No. 21-13187 (equivalente a EP197721).

Sin embargo, como portador del péptido de antígeno tumoral para sustituir el adyuvante incompleto de Freund, no se conoce emulsión W/O alguna capaz de activar de manera terapéuticamente eficaz la inducción de CTL.

EP781559 da a conocer una vacuna adyuvante de agua en aceite que comprende una fase de aceite, un tensioactivo no iónico, aducto de óxido de etileno con triglicérido de hidroxiácido graso y una fase acuosa.

W94/271 da a conocer una emulsión vacunal fluida de agua en aceite que contiene un aceite metabolizable (aceite vegetal o ácido graso, poliol o alcohol-éster).

EP1.55.453 da a conocer emulsiones de agua en aceite que comprenden un péptido de antígeno tumoral.

Generalmente, dado que los péptidos antigénicos del cáncer son compuestos de peso molecular bajo, no es fácil mantenerlos estables en emulsión W/O. Adicionalmente, es de temer que el péptido de antígeno tumoral sufra degradación, agregación y análogos debido a la energía durante la emulsificación. Además, los péptidos antigénicos del cáncer comprenden desde compuestos muy solubles en agua a compuestos poco solubles dependiendo de la secuencia de aminoácidos de los mismos. Por tanto, existe demanda para el desarrollo de una vacuna contra el cáncer basada en una emulsión W/O muy versátil que estimule de modo terapéuticamente eficaz la inducción de CTL, con Indiferencia de las propiedades del péptido de antígeno tumoral.

Un objeto de la presente invención es proporcionar una composición emulsionada para dilución para preparar una composición de vacuna contra el cáncer que exhibe actividad eficaz de inducción de CTL in vivo en diversos péptidos antigénicos del cáncer, y tiene viscosidad baja y estabilidad excelente. Otro objeto de la presente invención es proporcionar un método de preparación de una nueva vacuna contra el cáncer que estimula específicamente la inducción de CTL in vivo de acuerdo con el péptido de antígeno tumoral contenido, utilizando la composición emulsionada arriba descrita para dilución, y la composición.

Descripción de la Invención

Los autores de la presente invención han encontrado que por dilución de diversos péptidos conocidos como antígenos tumorales con una composición emulsionada particular que comprende un éster particular y un tensioactivo particular, puede exhibirse actividad de inducción de CTL específica para cada antígeno, con indiferencia del tipo y las propiedades del péptido, realizado investigaciones diligentes ulteriores, y completado la presente invención.

De acuerdo con ello, la presente invención abarca los modos de realización siguientes:

[1] Uso de una composición emulsionada para dilución de un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo, en donde la composición emulsionada comprende:

A) un éster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el éster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un éster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el éster parcial líquido a 4°C, en a 2% en peso; y

D) agua en 5 a 2% en peso.

[2] Uso de [1] en donde la composición emulsionada comprende:

ingrediente A en 6 a 8% en peso; ingrediente B en 1 a 1% en peso; ingrediente C en 5 a 15%... [Seguir leyendo]

1. Uso de una composición emulsionada para dilución de un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo, en donde la composición emulsionada comprende:

A) un áster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el áster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un áster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el áster parcial líquido a 4°C, en a 2% en peso; y

D) agua en 5 a 2% en peso.

2. El uso de la reivindicación 1, en donde la composición emulsionada comprende ingrediente A en 6 a 8% en peso; ingrediente B en 1 a 1% en peso; ingrediente C en 5 a 15% en peso; e ingrediente D en 5 a 2% en peso.

3. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en donde el diámetro medio de partícula de la fase de dispersión de la composición emulsionada es 5 a 5 nm.

4. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el ácido graso que constituye el ingrediente A es ácido oleico, ácido mirístico o ácido 2-etilhexanoico.

5. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el áster del ingrediente A es oleato de etilo, miristato de octildodecilo o 2-etilhexanoato de cetilo.

6. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el triglicérido de hidroxiácido graso que constituye el tensioactivo no iónico del ingrediente B es aceite de ricino o aceite de ricino endurecido.

7. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el ingrediente B es un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de aceite de ricino endurecido con 2 moles de óxido de etileno.

8. Una composición de vacuna contra el cáncer que comprende:

A) un áster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el áster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un áster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el áster parcial líquido a 4°C, en a 2% en peso; y

E) una fase acuosa que comprende un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo, en 1 a 6% en peso; en donde la composición es una emulsión W/O.

9. La composición de vacuna contra el cáncer de la reivindicación 8, que comprende:

ingrediente A en 4 a 6% en peso; ingrediente B en 1, a 5,% en peso; ingrediente C en 5, a 1,% en peso; e ingrediente E en 3 a 5% en peso.

1. Un método de preparación de una composición de vacuna contra el cáncer como se define en la reivindicación 8, que comprende diluir ,25 a 1 parte en volumen de una fase acuosa que comprende un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo con 1 parte en volumen de una composición emulsionada que comprende:

A) un áster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el áster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un áster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el áster parcial líquido a 4°C, en a 2% en peso; y

D) agua en 5 a 2% en peso.

11. Un kit para preparar justo antes de su uso una composición de vacuna contra el cáncer como se define en la reivindicación 8, que comprende una fase acuosa que comprende un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo, y una composición emulsionada para dilución de la fase acuosa, que comprende:

A) un áster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el áster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico que consiste en un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un áster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el áster parcial liquido a 4°C, en a 2% en peso; y

D) agua en 5 a 2% en peso.

12. Una composición emulsionada para uso en la activación terapéutica de la inducción de CTL en un péptido de antígeno tumoral que tiene 8 a 12 aminoácidos o un dímero del mismo, que comprende:

A) un áster de un ácido graso que tiene 8 a 22 átomos de carbono y un alcohol que tiene 2 a 24 átomos de carbono, teniendo el áster un punto de solidificación no mayor que 1°C, en 5 a 9% en peso;

B) un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de triglicérido de hidroxiácido graso con 2 moles de óxido de etileno, en ,5 a 2% en peso;

C) un emulsificante que es un áster parcial de un alcohol polihidroxílico y un ácido graso, siendo el áster parcial líquido a 4°C, en a 2% en peso; y

D) agua en 5 a 2% en peso.

13. La composición emulsionada para uso conforme a la reivindicación 12, que comprende ingrediente A en 6 a 8% en peso; ingrediente B en 1 a 1% en peso; ingrediente C en 5 a 15% en peso; e ingrediente D en 5 a 2% en peso.

14. La composición emulsionada para uso conforme a la reivindicación 12 ó 13, en donde el diámetro medio de partícula de la fase de dispersión de la composición emulsionadas es 5 a 5 nm.

15. La composición emulsionada para uso conforme a una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en donde

a) el ácido graso que constituye el ingrediente A es ácido oleico, ácido mirístico o ácido 2-etilhexanoico,

b) el áster del ingrediente A es oleato de etilo, miristato de octildodecilo o 2-etilhexanoato de cetilo,

c) el triglicérido de hidroxiácido graso que constituye el tensioactivo no iónico del ingrediente B es aceite de ricino o aceite de ricino endurecido, o

d) el ingrediente B es un tensioactivo no iónico constituido por un aducto de aceite de ricino endurecido con 2 moles de óxido de etileno.