Anticuerpos anti-5T4 y usos de los mismos.

Un anticuerpo anti-5T4 aislado, o fragmento del mismo que comprende un dominio de unión a antígeno de,

o que se une con el mismo epítopo de 5T4 que, un anticuerpo que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID Nº: 2 y una región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID Nº: 4,

(b) una región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID Nº: 10 y una región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID Nº: 12,

(c) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los restos 20-138 de SEC ID Nº: 2 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los restos 21-127 de SEC ID Nº: 4; o

(d) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los restos 20-141 de SEC ID Nº: 10 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los restos 21-127 de SEC ID Nº: 12.

Anticuerpos anti-5T4 y usos de los mismos Campo de la invención La presente invención se refiere en general a anticuerpos anti-5T4 y conjugados de anticuerpo/fármaco (es decir, inmunoconjugados) para el diagnóstico y/o tratamiento de trastornos neoplásicos o malignos. La presente invención también se refiere a ácidos nucleicos de región variable aislados y polipéptidos para preparar anticuerpos anti-5T4 y conjugados de anticuerpo/fármaco.

Antecedentes de la invención La disponibilidad de anticuerpos monoclonales de alta afinidad ha permitido el desarrollo de inmunoterapias dirigidas. De acuerdo con este enfoque, un agente terapéutico se acopla con un anticuerpo con especificidad de unión para una población celular diana definida. Los agentes terapéuticos que se han conjugado con anticuerpos monoclonales incluyen citotoxinas, modificadores de la respuesta biológica, enzimas (por ejemplo, ribonucleasas) , proteínas y péptidos inductores de apoptosis, y radioisótopos. Los conjugados de anticuerpo/citotoxina se denominan generalmente inmunocitotoxinas. Los anticuerpos acoplados con fármacos de bajo peso molecular tales como metotrexato se denominan típicamente conjugados de quimioanticuerpo/fármaco. Los conjugados descritos como inmunomoduladores contienen modificadores de la respuesta biológica tales como linfocinas, factores de crecimiento y factor de veneno de cobra activador del complemento (CVF) . Los anticuerpos radiomarcados incluyen isótopos radiactivos que pueden usarse para radioterapia así como captura de imágenes.

La administración de fármacos mediado por anticuerpos a células tumorales aumenta la eficacia del fármaco minimizando su captación en tejidos normales. Véase, por ejemplo, Reff y col. (2002) Cancer Control 9:152-66; Sievers (2000) Cancer Chemother. Pharmacol. 46 Supl: S18-22; Goldenberg (2001) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 39:195-201. MYLOTARG® (ozagamicina de gemtuzumab) es una inmunoterapia dirigida disponible en el mercado que actúa de acuerdo con este principio y que está aprobada para el tratamiento de la leucemia mieloide aguda en pacientes ancianos. Véase Sievers y col. (1999) Blood 93: 3678-84. En este caso, la molécula de dirección es un anticuerpo monoclonal anti-CD33 que está conjugado con caliqueamicina.

La inmunoterapia dirigida en seres humanos se ha limitado no obstante, en parte debido a respuestas adversas a anticuerpos monoclonales no humanos. Los ensayos clínicos tempranos usando anticuerpos de roedor revelaron respuestas de anticuerpo humano anti ratón (HAMA) y anticuerpo humano anti rata (HARA) , que dan como resultado eliminación de anticuerpos rápida. Se han desarrollado desde entonces anticuerpos menos inmunogénicos, incluyendo anticuerpos quiméricos, anticuerpos humanizados, anticuerpos PRIMATIZED® y anticuerpos humanos preparados usando ratones transgénicos o bibliotecas de presentación de fagos. Véase Morrison y col. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-5; Queen y col. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-33; Newman y col. (1992) Biotechnology (NY) 10:1455-60; Green y col. (1994) Nat. Genet. 7:13-21; Marks y col. (1991) J. Mol. Biol. 222:581

97. La evitación de una respuesta HAMA permite la administración de dosis alta y dosis repetida para conseguir una respuesta terapéutica.

Los anticuerpos candidatos para dirección farmacológica incluyen anticuerpos que reconocen antígenos oncofetales, es decir, antígenos presentes en células fetales y células neoplásicas, y que están en gran medida ausentes de células adultas normales. Véase, por ejemplo, Magdelenat (1992) J. Immunol. Methods 150: 133-43. El antígeno oncofetal 5T4 es una glucoproteína transmembrana altamente glucosilada de 72 kDa que comprende un núcleo no glucosilado de 42 kDa (Hole y col. (1988) Br. J. Cancer 57: 239-46, Hole y col. (1990) Int. J. Cancer 45: 179-84; Publicación internacional de PCT Nº WO89/07947; Patente de E.E.U.U Nº 5.869.053) . 5T4 incluye un dominio extracelular caracterizado por dos repeticiones ricas en leucina (LRR) y una región hidrófila intermedia, que es un sitio accesible para terapia dirigida (Myers y col. (1994) J. Biol. Chem. 269: 9319-24) .

El 5T4 humano se expresa en numerosos tipos de cáncer, incluyendo carcinomas de la vejiga, mama, cuello uterino, endometrio, pulmón, esófago, ovario, páncreas, estómago y testículo, y esta sustancialmente ausente de tejidos normales, excepto por el sincitiotrofoblasto en la placenta (véase, por ejemplo Southall y col. (1990) Br. J. Cancer 61: 89-95 (immunohistological distribution of 5T4 antigen in normal and malignant tissues) ; Mieke y col. (1997) Clin. Cancer Res. 3: 1923-1930 (low intercellular adhesion molecule 1 and high 5T4 expression on tumor cells correlate with reduced disease-free survival in colorrectal carcinoma patients) ; Starzynska y col. (1994) Br. J. Cancer 69: 899902 (prognostic significance of 5T4 oncofetal antigen expression in colorrectal carcinoma) ; Starzynska y col. (1992) Br. J. Cancer 66: 867-869 (expression of 5T4 antigen in colorrectal and gastric carcinoma) ; Jones y col. (1990) Br. J. Cancer 61: 96-100 (expression of 5T4 antigen in cervical cancer) ; Connor y Stem (199) Int. J. Cancer 46: 1029-1034 (loss of MHC class-I expression in cervical carcinomas) ; Ali y col. (2001) Oral Oncology 37: 57-64 (pattern of expression of the 5T4 oncofetal antigen on normal, dysplastic and malignant oral mucosa) ; Publicación internacional de PCT Nº WO89/07947; Patente de E.E.U.U. Nº 5.869.053) . Por ejemplo, los tejidos que se ha indicado que no tienen expresión de 5T4 incluyen el hígado, piel, bazo, tímo, sistema nervioso central (SNC) , glándula adrenal y ovario. Los tejidos que se han indicado que tienen expresión focal o baja de 5T4 incluyen el hígado, piel, bazo, ganglio linfático, amígdala, tiroides, próstata y vesículas seminales. Se ha indicado expresión difusa débil-moderada

de 5T4 en el riñón, pulmón, páncreas, faringe y tracto gastrointestinal. El único tejido que se ha indicado que tiene alta expresión de 5T4 es el sincitiotrofoblasto; 5T4 también estaba ausente de suero normal o el suero de mujeres embarazadas (es decir niveles < 10 ng/ml) . La sobreexpresión de 5T4 en tumores se ha correlacionado con progresión de enfermedad, y se ha sugerido que la evaluación de la expresión de 5T4 es un enfoque útil para identificar pacientes con pronóstico a corto plazo (Mulder y col. (1997) Clin. Cancer Res. 3: 1923-30, Naganuma y col. (2002) Anticancer Res. 22: 1033-1038, Starzynska y col. (1994) Br. J. Cancer 69: 899-902, Starzynska y col. (1998) Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 10: 479-484, Wrigley y col. (1995) Int J. Gynecol. Cancer 5: 269-274) .

Se han descrito varios anticuerpos anti 5T4, incluyendo mAb5T4, también denominado el anticuerpo H8 que reconoce un epítopo conformacional del antígeno 5T4 (Shaw y col. (2002) Biochem. J. 363: 137-45, Publicación Internacional de PCT Nº WO98/55607) , un anticuerpo monoclonal de rata (Woods y col. (2002) Biochem. J. 366: 353-65) , y un anticuerpo monoclonal de ratón denominado 5T4 (Patente de E.E.U.U. Nº 5.869.053) . También se han descrito anticuerpos anti 5T4 monocatenarios, así como proteínas de fusión que incluyen secuencias de anticuerpo anti 5T4 fusionadas con una molécula terapéutica. Por ejemplo, las secuencias de anticuerpo anti 5T4 fusionadas con el dominio constante de IgG1 humano u con el dominio extracelular B7.1 inducen la citolisis de líneas celulares de tumor que expresan 5T4 ( (Myers y col. (2002) Cancer Gene Ther. 9: 884-896, Shaw y col. (2000) Biochim. Biophys. Acta. 1524: 238-246; Publicación de solicitud de Patente de E.E.U.U. Nº 2003/0018004) . De forma similar, un anticuerpo monocatenario anti 5T4 fusionado con un superantígeno no puede estimular la citolisis dependiente de linfocitos T de células de carcinoma de pulmón de células no pequeñas in vitro (Forsberg y col. (2001) Br. J. Cancer

85: 129-136) . Un ensayo clínico de fase 1 usando PNU-214936, un fragmento Fab murino del anticuerpo monoclonal 5T4 fusionado con una enterocitotoxina A estafilocócica de superantígeno mutada (SEA) , mostró toxicidad limitada y algo de respuesta antitumoral (Cheng y col. (2004) J. Clin. Oncol. 22 (4) :602-9) . Como un enfoque terapéutico alternativo, también se han sugerido vacunas de 5T4 recombinantes para el tratamiento de cánceres (Mulr y an y col. (2002) Mol. Cancer Ther. 1: 1129-37; Publicaciones de Solicitud de Patente del Reino Unido Nº 2.370.571 y 2.378.704; Publicaciones de Solicitud de Patente de EP Nº 1.160.323 y 1.152.060) .

La presente invención proporciona nuevos anticuerpos anti 5T4, conjugados de anti 5T4/fármaco, procedimientos para producir los anticuerpos desvelados y conjugados de anticuerpo/fármaco y procedimientos para... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-5T4 aislado, o fragmento del mismo que comprende un dominio de unión a antígeno de, o que se une con el mismo epítopo de 5T4 que, un anticuerpo que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID Nº : 2 y una región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID Nº : 4,

(b) una región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID Nº : 10 y una región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID Nº : 12,

(c) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 4; o

(d) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 141 de SEC ID Nº : 10 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12.

2. El anticuerpo aislado de la reivindicación 1, siendo el anticuerpo aislado un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo monocatenario, un fragmento Fab, un fragmento F (ab) 2, un fragmento Fv, un anticuerpo tetramérico, un anticuerpo tetravalente, un anticuerpo multiespecífico, un anticuerpo especifico de dominio, un anticuerpo de un único dominio o una proteína de fusión.

3. El anticuerpo aislado de la reivindicación 1 o 2, que es un anticuerpo monoclonal murino.

4. El anticuerpo aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, teniendo el anticuerpo aislado una afinidad de unión por el antígeno 5T4 humano de al menos 1 x 10-7 M a 1 x 10-12 M como puede determinarse por análisis de resonancia de plasmón superficial.

5. El anticuerpo aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, dirigiéndose el anticuerpo aislado específicamente a células que expresan 5T4 in vivo.

6. El anticuerpo aislado de la reivindicación 3, comprendiendo el anticuerpo monoclonal murino una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2 o restos 20141 de SEC ID Nº : 10.

7. El anticuerpo aislado de la reivindicación 3, comprendiendo el anticuerpo monoclonal murino una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 4, o los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12.

8. El anticuerpo aislado de la reivindicación 3, comprendiendo el anticuerpo monoclonal murino una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº :

4.

9. El anticuerpo aislado de la reivindicación 3, comprendiendo el anticuerpo monoclonal murino una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos derivada de los resto.

2. 141 de SEC ID Nº : 10, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12.

10. El anticuerpo aislado de la reivindicación 2, que es un anticuerpo anti-5T4 quimérico o humanizado.

11. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 10, que comprende regiones constantes derivadas de regiones constantes humanas.

12. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 11, en el que la región constante de cadena ligera humana deriva de la región constante de cadena ligera kappa humana.

13. El anticuerpo quimérico o humanizado o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 11, en el que la región constante de cadena pesada humana deriva de una región constante de cadena pesada IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 humana.

14. El anticuerpo quimérico o humanizado o fragmento de anticuerpo de la reivindicación 13, en el que la región constante de cadena pesada IgG4 humana comprende prolina en la posición 241.

15. El anticuerpo quimérico o humanizado de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, que tiene al menos una región variable de cadena ligera o al menos una región variable de cadena pesada que comprende

(a) regiones marco conservadas que comprenden restos de una región marco conservada de anticuerpo humano; y

(b) una o más CDR de la región variable de cadena ligera de SEC ID Nº : 4 o 12, o una o más CDR de la región

variable de cadena pesada SEC ID Nº : 2 o 10.

16. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 15, en el que los restos humanos son restos marco conservados humanos seleccionados del grupo que consiste en:

(a) una región marco conservada de cadena pesada de anticuerpo humano seleccionada del grupo que consiste en DP-21 (VH7) , DP-54 (VH3-07) , DP-47 (VH3-23) , DP-53 (VH-74) , DP-49 (VH3-30) , DP-48 (VH3-13) , DP-75, DP-8 (VH1-2) , DP-25, VI-2b y VI-3 (VH1-03) , DP-15 y V1-8 (VH1-08) , DP-14 y V1-18 (VH1-18) , DP-5 y V1-24P (VH1-24) , DP-4 (VH1-45) , DP-7 (VH1-46) , DP-10, DA-6 y YAC-7 (VH1-69) , DP-88 (VH 1-e) , DP-3 y DA-8 (VH 1f) ;

(b) una región marco conservada de cadena ligera de anticuerpo humano de un clon de línea germinal de subgrupo IV DPK24, un subgrupo VIII (DPK23, DPK22, DPK20, DPK 21) , o un clon de línea germinal de subgrupo VI (DPK9, DPK1, 02, DPK-7) ;

(c) una secuencia consenso de una región marco conservada de cadena pesada de (a) ; y

(d) una región marco conservada que es al menos 63 % idéntica a una región marco conservada de (a) - (c) .

17. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 15 o 16 que comprende al menos dos CDR de una cualquiera de SEC ID Nº : 2, 4, 10 o 12.

18. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 17, en el que la cadena ligera del anticuerpo quimérico o humanizado comprende una región variable que comprende al menos dos de las tres CDR de una cualquiera de SEC IDNº : 4 o 12.

19. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 18, en el que la cadena ligera del anticuerpo quimérico o humanizado comprende una región variable que comprende tres CDR de una cualquiera de SEC ID Nº : 4 o 12.

20. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 15, en el que la cadena pesada del anticuerpo quimérico o humanizado comprenden una región variable que comprende al menos dos de tres CDR de una cualquiera de SEC ID Nº : 2 o 10.

21. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 20, en el que la cadena pesada del anticuerpo quimérico o humanizado comprende una región variable que comprende tres CDR de una cualquiera de SEC ID Nº : 2 o 10.

22. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 15, que comprende las CDR de SEC ID Nº : 2 y 4, o las CDR de SEC ID Nº :10 y 12.

23. El anticuerpo quimérico o humanizado de una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 22, en el que la secuencia de región variable de cadena pesada del anticuerpo quimérico o humanizado comprende:

(a) una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2;

(b) una secuencia de aminoácidos que es al menos 85 % idéntica a los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2;

(c) una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 141 de SEC ID Nº : 10;

(d) una secuencia de aminoácidos que es al menos 91 % idéntica a los resto.

2. 141 de SEC ID Nº : 10;

(e) una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID Nº : 49, 51, 52, 54, 56, 81 u 82;

(f) una secuencia de aminoácidos que es al menos 91 % idéntica a SEC ID Nº : 51;

(g) una secuencia de aminoácidos que es al menos 78 % idéntica a SEC ID Nº : 54;

(h) una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 % idéntica a SEC ID Nº : 81; o

(i) una secuencia de aminoácidos que es al menos 78 % idéntica a SEC ID Nº : 82.

24. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 10, en el que la secuencia de región variable de cadena ligera del anticuerpo quimérico o humanizado comprende:

(a) una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 4;

(b) una secuencia de aminoácidos que es al menos 94 % idéntica a los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 4;

(c) una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12;

(d) una secuencia de aminoácidos que es al menos 98 % idéntica a los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12;

(e) una secuencia de aminoácidos de una cualquiera de SEC ID Nº : 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 83 u 84;

(f) una secuencia de aminoácidos que es al menos 83 % idéntica a SEC ID Nº : 60;

(g) una secuencia de aminoácidos que es al menos 93 % idéntica a SEC ID Nº : 70;

(h) una secuencia de aminoácidos que es al menos 85 % idéntica a SEC ID Nº : 76;

(i) una secuencia de aminoácidos que es al menos 90 % idéntica a SEC ID Nº : 83; o

(j) una secuencia de aminoácidos que es al menos 91 % idéntica a SEC ID Nº : 84.

25. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 10, que comprende una región variable de cadena ligera y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(i) una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 4 y los resto.

2. 138 de SEC ID Nº : 2,

(ii) SEC ID Nº : 58 y una cualquiera de SEC ID Nº : 49, 51, 52, 54, 56,

(iii) SEC ID Nº : 60 y una cualquiera de SEC ID Nº : 49, 51, 52, 54, 56, y

(iv) SEC ID Nº : 54 y una cualquiera de SEC ID Nº : 60, 62, 70, 74, 76.

26. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 25, que comprende una región variable de cadena pesada expuesta como SEC ID Nº : 54 y una región variable de cadena ligera expuesta como SEC ID Nº : 70.

27. El anticuerpo quimérico o humanizado de la reivindicación 10, que comprende una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 127 de SEC ID Nº : 12 y una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de los resto.

2. 141 de SEC ID Nº : 10.

28. Un anticuerpo aislado que se une específicamente con un epítopo de 5T4 humano que comprende los resto.

17. 252 .

27. 355 de SEC ID Nº : 87.

29. Un anticuerpo aislado que se une específicamente con un epítopo de 5T4 humano que comprende los aminoácido.

8. 163 de SEC ID Nº : 87.

30. Un conjugado de anticuerpo/fármaco para suministro farmacológico que comprende:

(a) el anticuerpo aislado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29; y

(b) un fármaco, que está unido directa o indirectamente con el anticuerpo aislado.

31. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 30, en el que el fármaco es un agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste en una citotoxina, un radioisótopo, un agente inmunomodulador, un agente anti angiogénico, un agente anti proliferativo, un agente proapoptótico, un agente quimioterapéutico y un ácido nucleico terapéutico.

32. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 31, en el que el agente terapéutico es una citotoxina y en el que la citotoxina es un antibiótico, un inhibidor de polimerización de tubulina, un agente alquilante, un inhibidor de síntesis de proteínas, un inhibidor de proteína quinasa, un inhibidor de fosfatasa, un inhibidor de topoisomerasa o una enzima.

33. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 31, en el que la citotoxina es un antibiótico y en el que el antibiótico es caliqueamicina.

34. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 33, en el que la caliqueamicina es un derivado de Nacetilo o análogo de disulfuro de caliqueamicina.

35. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 34, en el que la caliqueamicina es N-acetil-y caliqueamicina.

36. El conjugado de anticuerpo/fármaco de una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 35, en el que el fármaco está unido al anticuerpo mediante un engarce.

37. El conjugado de anticuerpo/fármaco de la reivindicación 36, en el que el engarce se selecciona del grupo que consiste en ácido 4- (4’acetilfenoxi) butanoico (AcBut) , ácido 3-acetilfenil ácido (AcPac) , ácido 4-mercapto-4-metilpentanoico (Amida) , y derivados de los mismos.

38. Uso de un conjugado de anticuerpo anti-5T4/fármaco que comprende (i) el anticuerpo aislado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, y (ii) un agente terapéutico que está unido con el anticuerpo aislado directa o indirectamente, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un sujeto que tiene un cáncer positivo para 5T4.

39. El uso de la reivindicación 38, en el que el conjugado de anticuerpo anti-5T4/fármaco es un conjugado de anticuerpo anti-5T4/caliqueamicina, y que comprende además administrar un segundo agente terapéutico, en el que el conjugado de anti-5T4/caliqueamicina y el segundo agente terapéutico se administran de forma concurrente o consecutiva en cualquier orden.

40. Una célula que expresa un anticuerpo anti-5T4 o fragmento del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.

41. Un ácido nucleico aislado que codifica un anticuerpo anti-5T4 o fragmento del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.

FIG. 1A

VL A1 murina

FIG. 1B

VL A2 murina

FIG. 1C

VL A3 murina

FIG. 9A

ADN de VH A1 humanizada-versión 1.0

Proteína VH A1 humanizada -versión 1.0

ADN de VH A1 humanizada -versión 1.1

Proteína VH A1 humanizada -versión 1.1

VH A1 humanizada -versión 1.2 (con injertos de CDR en la línea germinal DP-21, subgrupo VH7)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas K46, C67, S82a y N82a.

FIG. 9B

ADN de VH A1 humanizada -versión 2.0

Proteína VH A1 humanizada -versión 2.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DP-54, subgrupo VH3)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas K46, M48, G49, C67, L71, T73, T74, A75, S76 y A78.

ADN de VH A1 humanizada -versión 2.1

Proteína VH A1 humanizada -versión 2.1

FIG. 9C

ADN de VL A1 humanizada -versión 1.0

Proteína VL A1 humanizada -versión 1.0 (con injertos de CDR en la línea germinal DPK24, subgrupo VKIV)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas S43, N49, N60, T63, Y67, F73, L85 y F87.

ADN de VL A1 humanizada -versión 1.1

Proteína VL A1 humanizada -versión 1.1

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.0

FIG. 9D

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.0 (con injertos de CDR en la línea germinal de DPK9, subgrupo VKI)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas V3, Q42, S43, N49, N60, Y67, F73, L85 y F87.

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.1

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.1

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.2

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.2

FIG. 9E

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.3

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.3

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.4

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.4

ADN de VL A1 humanizada -versión 2.5

Proteína VL A1 humanizada -versión 2.5

FIG. 9F

ADN de VL A1 humanizada -versión 3.0

Proteína VL A1 humanizada -versión 3.0 (con injertos de CDR en la línea germinal DPK23, subgrupo VKIII)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas F10, S43, N49, V58, N60, Y67, F73, L85 y F87.

ADN de VL A1 humanizada -versión 3.1

Proteína VL A1 humanizada -versión 3.1

FIG. 9G

VH huA2 versión 1.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DP-75, subgrupo VH1)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas K38, R40, T41 I48, I69, T75, Q81, S82b; E85 y M94.

VH huA2 versión 2.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DP-54, subgrupo VH3)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas K38, R40, T41, I48, G49, A67, A71, K73, S74, S76, A78 y M94.

VL huA2 versión 1.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DPK20, subgrupo VKIII)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas S43, W47, A60, S70, S77, M78 y A80

VL huA2 versión 2.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DPK9, subgrupo VKI)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas V3, L4, S43, W47, S70 y M78.

FIG. 9H

VH huA3 versión 1.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DP-29, subgrupo VH3)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas A49, Q75, S76, M89, C91 y V93.

VH huA3 Versión 2.0 (con injertos de CDR en la linea germinal DP-54, subgrupo VH3)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas D73, Q75, S76, M89, C91 y V93.

VL huA3 versión 1.0 (con injertos de CDR en la línea germinal DPK24, subgrupo VKIV)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas S43, D85 y F87

VL huA3 versión 2.0 (con injertos de CDR en la línea germinal DPK9, subgrupo VKI)

Cualquiera de los siguientes aminoácidos podría sustituirse en estas posiciones designadas 3V, Q42, S43, D60, D85 y F87.

FIG. 10B

Secuencias de aminoácidos de genes de línea germinal humana del subgrupo VH 7

DP-21 (VH 7) Nº de referencia de GenBank CAA43346 (SEC ID Nº : 88)

Secuencia de aminoácidos de genes de línea germinal humana del subgrupo VH 3

DP-54 (VH 3-07) Nº de referencia de GenBank AB019440 (SEC ID Nº : 89)

DP-47 (VH3-23) Nº de referencia de GenBank AB019439 (SEC ID Nº : 90)

DP-49 (VH3-30) Nº de referencia de GenBank. AB019439 (SEC ID Nº : 91)

DP-53 (VH3-74) Nº de referencia de GenBank AB019437 (SEC ID Nº : 92)

DP-48 (VH3-13) Nº de referencia de GenBank AB019440 (SEC ID Nº : 93)

FIG. 13

Secuencias de aminoácidos de genes de línea germinal humana del subgrupo Vk I

DPK9 (O12, Vk 1) Nº de referencia de GenBank. X59315 (SEC ID Nº : 94)

O2 (O2, Vk 1) Nº de referencia de GenBank X59312 (SEC ID Nº : 95)

DPK1 (Vk I, ) 18) Nº de referencia de GenBank M64856 (SEC ID Nº : 96)

DPK 7 (Vk I, L15) Nº de referencia de GenBank K01323 (SEC ID Nº : 97)

Secuencia de aminoácidos de genes de línea germinal humana del subgrupo Vk IV

DPK24 (B3, VklV) Nº de referencia de GenBank Z00023 (SEC ID Nº : 98)

Secuencias de aminoácidos de genes de linea germinal humana del subgrupo Vk III

DPK23 (Vk-III, L25) Nº de referencia de GenBank X72820 (SEC ID Nº : 99)

FIG. 14

IgG4 humano_mutado (mutación de bisagra S241P) (SEC ID Nº : 45)

IgG1 humano (SEC ID Nº : 46)

Kappa humano (SEC ID Nº : 47)

FIG. 15

5T4 de tití de cola negra 5T4 de mono Cynomolgous