Agentes terapéuticos que contienen bacteriófagos frente a P. aeruginosa.

Una preparación de bacteriófago que comprende uno o más bacteriófagos para su uso en un método terapéutico o profiláctico de tratamiento de una infección bacteriana,

en el que:

(i) la infección bacteriana comprende o consiste en Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) y está caracterizada por la formación de una biopelícula;

(ii) dicho uno o más bacteriófagos se dirigen a la P. aeruginosa de dicha infección; y

(iii) en dicho método, este debe comprender

(a) la administración de dicho uno o más bacteriófagos;

(b) permitir que se establezca la replicación de dicho uno o más bacteriófagos; y después

(c) la administración de uno o más antibióticos una vez que la replicación de dicho bacteriófago se ha establecido.

Agentes terapéuticos que contienen bacteriófagos frente a P. aeruginosa 5 Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere a preparaciones terapéuticas y diagnósticas que comprenden virus que destruyen bacterias (bacteriófagos), según se describe en las reivindicaciones. En particular, la memoria descriptiva proporciona en un aspecto preferido composiciones terapéuticas que comprenden combinaciones de

bacteriófagos como agentes de control para infecciones en animales y en seres humanos causadas por bacterias patógenas de la especie Pseudomonas aeruginosa. La memoria descriptiva también se refiere al uso de bacteriófagos junto con antibióticos para el tratamiento de infecciones bacterianas caracterizadas por la formación de una biopelícula, especialmente, por ejemplo, infecciones tales que comprenden una infección por Pseudomonas aeruginosa tales como las otitis caninas.

Antecedentes de la invención

[0002] Los antibióticos se han contemplado durante muchos años como "la respuesta" al problema de las infecciones bacterianas. Esta actitud persistió hasta el desarrollo de las resistencias de amplio alcance (y en algunos

casos totales) a los antibióticos observada en los últimos diez años. En muchos casos es necesario el uso de "fármacos de último recurso" (tales como la vancomicina para Staphylococcus aureus), que a menudo requieren unas vías de administración complejas y muestran unos efectos secundarios tóxicos, que necesitan un prolongado tratamiento hospitalario.

[0003] Incluso frente a estos fármacos las resistencias están alcanzando unos niveles preocupantes. Ahora está claro que las bacterias pueden adaptarse para resistir a cualquier antibiótico. Incluso los fármacos de nueva generación tales como linezolid ya están generando resistencias [Mutnick y col (2003) An. Pharmacother. 37: 769 - 774; Rahim y col (2003) Clin Infect Dis 36: E146 - 148], y a partir de los recientes desarrollos está claro que la resistencia se desarrolla más rápido de lo que pueden producirse, evaluarse y procesarse nuevos antibióticos a 30 través de las autorizaciones sanitarias.

[0004] Un inconveniente adicional del tratamiento antibiótico es su carencia de especificidad. Los antibióticos pueden destruir una amplia variedad de bacterias y esto puede dar lugar a una recolonización del cuerpo por parte de bacterias inapropiadas y a menudo perjudiciales. Hay por tanto una necesidad de tratamientos antibacterianos

que muestren especificidad frente a especies bacterianas en particular, de forma que se induzca poca resistencia en la flora normal.

[0005] La necesidad de nuevas formas de terapia antibacteriana está bien ilustrada por el caso de las infecciones por la bacteria aeróbica gramnegativa Pseudomonas aeruginosa.

[0006] Pseudomonas aeruginosa es un importante patógeno bacteriano oportunista. Algunas infecciones provocadas por Pseudomonas aeruginosa incluyen:

otitis externa y otitis media en perros, otitis que ejemplifica la colonización basada en biopelícula de una 45 superficie corporal y que son habituales en perros de razas puras (con pedigrí);

otitis externa en seres humanos ("otitis externa aguda") junto con otras otitis y otras infecciones tópicas en seres humanos, incluyendo queratitis por Pseudomonas y foliculitis por Pseudomonas;

infecciones de quemaduras y de injertos cutáneos en seres humanos;

infecciones adquiridas en el hospital;

infecciones pulmonares en pacientes con fibrosis quística (CF).

[0007] El 10 -15 % de las infecciones nosocomiales (adquiridas en el hospital) son debidas a Pseudomonas aeruginosa, con 2 millones de casos anuales sólo en los Estados Unidos. En algunas situaciones, la frecuencia es incluso mayor. De los aproximadamente 150.000 pacientes con quemaduras tratados en los hospitales de Estados

Unidos y en los centros de quemados por año, el 26 % presentan infecciones por Pseudomonas aeruginosa. Pseudomonas aeruginosa es tristemente célebre por su resistencia a los antibióticos, por lo que las infecciones causadas por ella pueden ser difíciles de tratar. Uno de sus hábitats naturales es el suelo, dónele está expuesta a organismos que producen antibióticos. Esto puede haber conducido fácilmente al desarrollo de mecanismos de resistencia codificados tanto por los genes del cromosoma como por elementos genéticos transferibles conocidos 60 como plásmidos. Las propiedades de la membrana externa de P. aeruginosa son importantes para conferir resistencia. Un mecanismo de resistencia adicional es su tendencia a crecer en las superficies disponibles en forma de capas complejas conocidas como biopelículas [Donlan (2002) Emerging Infectious Diseases 8: 881 - 890, http://www.cdc.gov/ncidod/EIDAro18no9/02-0063.htm ; Fletcher & Decho (2001) Biofilms en Enciclopaedia of Life Sciences, Nature Publishing, Londres; http://www.els.net ] que son resistentes a concentraciones mucho mayores de 65 antibióticos de las necesarias para destruir a las células individuales [Chen y col (2002) Pseudomonas infection; http://www.emedicine.com/PED/topic2701.htm ; Qarah y col (2001) Pseudomonas aeruginosa infections;

http://www.emedidne.com/MED/topic1943.htm ; Todar K. (2002) Todars Online Textbook of Bacteriology: Pseudomonas aeruginosa] http://textbookofbacteriology.net/Pseudo/77onas.ht mi; Iglewskl B. H. (1996)

Pseudomonas. Medical Microbiology 4a edición, S. Barón (ed.). University of Texas;

http://gsbs.utmb.edu/microbook/ch027.htm ]. El efecto práctico de esto está demostrado por las Infecciones en 5 pacientes con fibrosis quística, prácticamente todos los cuales son finalmente Infectados por una cepa bacteriana que no puede ser erradicada mediante el uso de antibióticos, incluso cuando la cepa aislada puede parecer ser sensible en el laboratorio [H0iby N (1998) Pseudomonas in cystic fibrosis: past, present, future. European Cystic Fibrosis Society Joseph Levy Memorial Lecture; httn:// www.ecfsoc.org/pa review/nh lecthtml].

[0008] Pseudomonas aeruginosa expresa un conjunto de genes (muy notablemente el gen algC) que produce los componentes extracelulares responsables de la formación de la biopelícula, que a menudo es de naturaleza polisacárida (Friedman y Kolter, Mol. Microbiol. (2004) 3, 675 - 690). Se sabe que dicha formación de biopelícula es una característica de muchas bacterias patógenas importantes que contribuye al aumento de la resistencia a los antibióticos. Dichas biopelículas pueden comprender más de un tipo de bacteria, soportada y rodeada por una matriz 15 extracelular que es excretada y ayuda a la bacteria a colonizar superficies desde arrecifes marinos hasta el esmalte dental. Las biopelículas permiten a las bacterias unirse a las superficies y alcanzar unas densidades de población que de otro modo no serían soportables. Le imparte un aumento en la resistencia no sólo a los antibióticos sino también a estreses medioambientales, incluyendo toxinas tales como metales pesados, lejías y otros agentes blanqueantes. Anteriormente se pensaba que la contribución de la formación de una biopelícula a la resistencia a los 20 antibióticos era fundamentalmente un proceso físico procedente de la limitación de difusión, pero pruebas más recientes han demostrado que algunas biopelículas parecen tener unas capacidades específicas para atrapar antibióticos (Mah y col., Nature (2003) 426, 306 - 310). Se sabe que las bacterias dentro de las biopelículas pueden ser entre 100 y 1.000 veces más resistentes a los antibióticos que la misma cepa bacteriana creciendo en forma de células individuales ("planctónica"). Este aumento en la resistencia significa que las bacterias que son 25 aparentemente sensibles a los antibióticos en un ensayo de laboratorio pueden ser resistentes a la terapia en un entorno clínico. Incluso si algunas son eliminadas, las biopelículas pueden proporcionar depósitos resistentes que permiten una rápida colonización una vez que los antibióticos ya no están presentes. Por lo tanto resulta claro que las biopelículas son factores importantes en muchas enfermedades humanas.

[0009] Los tratamientos químicos no son adecuados para usarlos frente a las biopelículas dado que esto es precisamente frente a lo que han evolucionado, y muchas superficies en las que las biopelículas ayudan a la patogénesis bacteriana están poco preparadas para una abrasión rigurosa. La abrasión física no proporciona un medio para romper las biopelículas. Sin embargo, muchas superficies en las que las biopelículas ayudan a la patogénesis bacteriana están poco preparadas para una abrasión rigurosa. Por ejemplo, las superficies de heridas o 35 de quemaduras son extremadamente sensibles y delicadas. Incluso cuando la abrasión es tanto... [Seguir leyendo]

1. Una preparación de bacteriófago que comprende uno o más bacteriófagos para su uso en un método

terapéutico o profiláctico de tratamiento de una infección bacteriana, en el que:

(i) la infección bacteriana comprende o consiste en Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) y está caracterizada por la formación de una biopelícula;

(ii) dicho uno o más bacteriófagos se dirigen a la P. aeruginosa de dicha infección; y (i¡¡) en dicho método, este debe comprender

(a) la administración de dicho uno o más bacteriófagos;

(b) permitir que se establezca la replicación de dicho uno o más bacteriófagos; y después

(c) la administración de uno o más antibióticos una vez que la replicación de dicho bacteriófago se ha establecido.

2. Una preparación de para bacteriófago su uso de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende más

de un bacteriófago que se dirige a P. aeruginosa.

3. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende una 20 pluralidad de bacteriófagos que se dirigen a P. aeruginosa, en la que cada miembro de dicha pluralidad es específico

para una cepa diferente de P. aeruginosa.

4. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 - 3, en la que la infección se elige de entre: una infección de una quemadura cutánea o de otra herida cutánea, una

infección pulmonar, una infección ocular, una otitis o una infección del tracto urinario.

5. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con la reivindicación 4, en la que la infección es una otitis canina.

6. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 3, en la

que el método de tratamiento es profiláctico.

7. Una preparación de bacteriófago para el uso de acuerdo con la reivindicación 6, en la que la infección que se va a prevenir es una infección asociada a un implante médico.

8. Un método no terapéutico para la eliminación, la reducción o la prevención de la contaminación bacteriana mediante la aplicación en el sitio o en el posible sitio de dicha contaminación de uno o más bacteriófagos, en el que:

(i) la contaminación bacteriana comprende o consiste en P. aeruginosa y está caracterizada por la

formación de una biopelícula;

(¡i) dicho uno o más bacteriófagos se dirigen a la P. aeruginosa de dicha contaminación; y

(¡ii) dicho método comprende:

(a) la aplicación de dicho uno o más bacteriófagos;

(b) permitir que se establezca la replicación de dicho uno o más bacteriófagos; y después

(c) la aplicación en dicho sitio de uno o más antibióticos o antisépticos una vez que la replicación de dicho bacteriófago se ha establecido.

9. Un método no terapéutico de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el sitio es la superficie de un

dispositivo médico que va a ser implantado.

10. Un método no terapéutico de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el sitio es la superficie de una lente de contacto.

11. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 - 7, o un método no terapéutico de acuerdo con una de las reivindicaciones 8 - 10, en los que el uno o más bacteriófagos se eligen de entre el grupo que consiste en:

(i) NCIMB 41174, NCIMB 41175, NCIMB 41176, NCIMB 41177, NCIMB 41178, NCIMB 41179, NCIMB

41180 y NCIMB 41181 (depositados en la National Collection of Industrial and Marine Bacteria, Aberdeen, Reino Unido); y

(ii) mutantes de los mismos que conservan la capacidad de dirigirse a P. aeruginosa, preferiblemente en

los que dicho muíante tiene una identidad en la secuencia de nucleótidos de al menos el 90 %, de al menos el 95 65 %, de al menos el 97 %, de al menos el 98 % o de al menos el 99 % a lo largo de la totalidad de su genoma en

comparación con el genoma de la pertinente cepa depositada.

12. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el método no terapéutico de acuerdo con la reivindicación 11, en los que el uno o más bacteriófagos que se dirigen a P. aeruginosa se proporcionan en un grupo de bacteriófagos, y en los que cada miembro del grupo tiene una

especificidad de cepa diferente para P. aeruginosa.

13. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el método no terapéutico de acuerdo con la reivindicación 11, en los que el uno o más bacteriófagos que se dirigen a P. aeruginosa se proporcionan en un grupo de bacteriófagos que consiste en:

(i) NCIMB 41174, NCIMB41175, NCIMB41176, NCIMB41177, NCIMB41178, NCIMB41179, NCIMB41180 y NCIMB41181; o

(ii) mutantes de los mismos que conservan la capacidad de dirigirse a P. aeruginosa, preferiblemente en los que dicho muíante tiene una identidad en la secuencia de nucleótidos de al menos 90 %, de al menos el 95

%, de al menos el 97 %, de al menos el 98 % o de al menos 99 % a lo largo de la totalidad de su genoma en

comparación con el genoma de la pertinente cepa depositada.

14. Una preparación de bacteriófago para su uso de acuerdo con la reivindicación 11 o el método no terapéutico de acuerdo con la reivindicación 11, en los que el uno o más bacteriófagos que se dirigen a P.

aeruginosa se proporcionan en:

(i) un grupo de bacteriófagos que consiste en NCIMB 41174, NCIMB 41175, NCIMB 41176, NCIMB 41177, NCIMB 41178 y NCIMB 41179; o

(ii) un grupo que difiere del grupo de (i) por la sustitución de cualquiera de dichos bacteriófagos por un 25 muíante del mismo que muestra la especificidad de cepa objetivo deseada hacia P. aeruginosa, y

preferiblemente en el que dicho muíante tiene una identidad en la secuencia de nucleótidos de al menos el 90 %, de al menos el 95 %, de al menos el 97 %, de al menos el 98 % o de al menos el 99 % a lo largo de la totalidad de su genoma en comparación con el genoma de la pertinente cepa depositada.