Vacuna terapéurica.

Una construcción antigénica que comprende un fragmento de un péptido antigénico Aβ

que consiste en unaextensión única o repetitiva de entre 13 y 15 restos de aminoácidos contiguos del fragmento N-terminal 1-16 ó 1-17del péptido Aβ, para uso en el tratamiento de una enfermedad o condición asociada a amiloide, caracterizada poruna pérdida de capacidad de memoria cognitiva en un animal o un ser humano, en donde el antígeno del péptido Aßes (a) formado previamente por síntesis de péptidos automatizada, estándar, en resina, y (b) modificado despuéspor injerto en resina de un resto lipófilo o hidrófobo a los restos de aminoácidos terminales del péptido Aβ formadopreviamente, y reconstituido en un liposoma, y en donde la administración de dicha construcción antigénica en formade una composición de vacuna, a un animal o un ser humano aquejado de tal enfermedad o condición , conduce a :

a. la generación de anticuerpos del subtipo Th2 no inflamatorio;

b. la generación de anticuerpos de la subclase IgG independiente de células T; y

c. un aumento de la retención de la capacidad de la memoria cognitiva y/o a una restauración completa dela capacidad de la memoria cognitiva.

Vacuna terapéutica La presente invención se refiere a métodos y composiciones para el uso terapéutico y diagnóstico en el tratamiento de enfermedades y patologías causadas por proteínas amiloides o semejantes a amiloides, o asociadas con ellas, que incluyen amiloidosis, un grupos de patologías y anomalías asociadas con proteínas amiloides, tales como la Enfermedad de Alzheimer.

La amiloidosis no es una entidad de enfermedades única sino más bien un grupo diverso de procesos progresivos de enfermedades caracterizados por depósitos extracelulares en los tejidos de una proteína cérea, semejante al almidón, denominada amiloide, que se acumula en uno o más órganos o sistemas del cuerpo. A medida que los depósitos amiloides se acumulan, comienzan a interferir con la función normal del órgano o sistema del cuerpo. Existen al menos 15 tipos diferentes de amiloidosis. Las formas principales son la amiloidosis primaria sin antecedentes conocidos, la amiloidosis secundaria que sigue a algún otra condición, y la amiloidosis hereditaria.

La amiloidosis secundaria ocurre en personas aquejadas de una infección crónica o de una enfermedad inflamatoria, tal como la tuberculosis, una infección bacteriana denominada fiebre mediterránea familiar, infecciones óseas (osteomielitis) , artritis reumatoide, inflamación del intestino delgado (ileítis granulomatosa) , la enfermedad de Hodgkin, y la lepra.

Los depósitos amiloides contienen, típicamente, tres componentes. fibrillas de proteínas amiloides que representan aproximadamente el 90% del material amiloide, que comprenden uno o varios tipos diferentes de proteínas. Estas proteínas son capaces de plegarse dando origen a las fibrillas laminares “beta-plegadas”, una configuración proteínica única que pone de manifiesto sitios de unión para el rojo congo, dando por resultado las propiedades de tinción únicas de la proteína amiloide. Además, los depósitos amiloides están asociados estrechamente con el componente amiloide P (pentagonal) (AP) , una glicoproteína relacionada con el amiloide P sérico normal (SAP) y con los glucosaminoglucanos sulfatados (GAG) , carbohidratos complejos del tejido conjuntivo.

Muchas enfermedades de envejecimiento están basadas o asociadas con proteínas semejantes a las amiloides y se caracterizan, en parte, por la acumulación de depósitos extracelulares de material amiloide o semejante a amiloide que contribuyen a la patogénesis, así como también a la progresión de la enfermedad. Estas enfermedades incluyen, pero no se limitan a patologías neurológicas tales como la Enfermedad de Alzheimer (AD) , que incluye enfermedades o condiciones caracterizadas por pérdida de capacidad de la memoria cognitiva tales como, por ejemplo, el deterioro cognitivo leve (MCI) , la demencia de cuerpos de Lewy, el síndrome de Down, la hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Dutch) el complejo de Parkinson- Demencia (Enfermedad de Guam) . Otras enfermedades basadas o asociadas con proteínas semejantes a amiloides tales como la parálisis supranuclear progresiva, la esclerosis múltiple, la enfermedad de Creutzfeld Jacob, la enfermedad de Parkinson, la demencia relacionada con HIV, la esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , la diabetes de comienzo en la edad adulta, la amiloidosis cardiaca senil; los tumores endocrinos, y otras, con inclusión de la degeneración macular.

Aun cuando la patogénesis de estas enfermedades puede ser diversa, sus depósitos característicos con frecuencia contienen muchos constituyentes moleculares compartidos. En un grado importante. esto puede atribuirse a la activación local de caminos proinflamatorios que conducen con ella al depósito concurrente de componentes de complemento activados, reactantes de fases agudas, inmunomoduladores, y otros mediadores inflamatorios (McGeer et al., 1994) .

La Enfermedad de Alzheimer (AD) es una patología neurológica que se ha pensado que, principalmente, está causada por placas amiloides, una acumulación de depósitos anormales de proteínas en el cerebro. El tipo más frecuente de depósito amiloide encontrado en el cerebro de individuos afectados está compuesto principalmente de fibrillas A1. La evidencia científica demuestra que un aumento de la producción y acumulación en placas de proteínas beta-amiloides conduce a la muerte de la célula nerviosa, lo que contribuye al desarrollo y progresión de la Enfermedad de Alzheimer. La pérdida de células nerviosas en zonas estratégicas del cerebro, ocasiona, a su vez, disminución de los neurotransmisores y deterioro de la memoria. Las proteínas principalmente responsables de la acumulación de placas incluyen el proteínas de precursores amiloides (APP) y dos presenilinas (presenilina I y presenilina II) . La escisión secuencial de la proteína de precursor amiloide (APP) que es expresado constitutivamente y catabolizado en la mayoría de las células por las enzimas 1- y y-secretasa conduce a la liberación de un péptido A1 de 39 a 43 aminoácidos. La degradación de las APPs incrementa, probablemente, sus propensión a agregarse en placas. Es especialmente el fragmento A1 (1-42) el que posee una propensión alta a acumular agregados debido a dos restos de aminoácidos muy hidrófobos existentes en su extremo C-terminal. Se opina, por consiguiente, que el fragmento A1 (1-42) está implicado principalmente y es responsable de la iniciación de la formación de placas neuríticas en la Enfermedad de Alzheimer, y que tienen, por tanto, un elevado potencial patológico. Por consiguiente, existe la necesidad de anticuerpos específicos que puedan hacer blanco y espaciar la formación de placas amiloides.

Los síntomas de la Enfermedad de Alzheimer se manifiestan lentamente y el primer síntoma puede ser solamente una pequeña falta de memoria. En esta fase, los individuos pueden olvidar acontecimientos y actividades recientes, los nombres de personas o cosas familiares, y no pueden ser capaces de resolver problemas matemáticos sencillos. A medida que la enfermedad progresa, los síntomas se aprecian más fácilmente y llegan a ser lo bastante graves para hacer que las personas con Enfermedad de Alzheimer o miembros de su familia busquen ayuda médica. Los síntomas de la fase media de la Enfermedad de Alzheimer incluyen olvido de cómo realizar tareas sencillas tales como el cuidado de su aspecto personal, y problemas que se van manifestando con el habla, la comprensión, la lectura o la escritura. Los pacientes en la fase tardía de la Enfermedad de Alzheimer pueden llegar a ser ansiosos o agresivos, pueden deambular sin rumbo fuera de su domicilio y, en último lugar, pueden necesitar un cuidado total.

Actualmente, el único medio definido para diagnosticar la Enfermedad de Alzheimer consiste en identificar placas y marañas existentes en el tejido cerebral en la autopsia realizada después de la muerte del individuo. Por tanto, los doctores solamente pueden establecer un diagnóstico de la Enfermedad de Alzheimer como “posible” o “probable” mientras la persona está todavía viva. Empleando los métodos actuales, los médicos pueden diagnosticar correctamente la Enfermedad de Alzheimer hasta el 90 por ciento de las veces utilizando diversas herramientas para diagnosticar una Enfermedad de Alzheimer “probable” Los médicos hacen preguntas acerca de la salud general de la persona, problemas médicos del pasado, y la historia de algunas dificultades que la persona haya tenido en la realización de las actividades diarias. Los tests de comportamiento de la memoria, resolución de problemas, atención, cálculo y lenguaje proporcionan información sobre la degeneración cognitiva, y pruebas médicas tales como análisis de sangre, de orina o del fluido espinal, y exploraciones cerebrales, pueden proporcionar alguna información adicional..

La terapia de la Enfermedad de Alzheimer consiste en tratamientos con medicación y sin medicación. Los tratamientos que aspiran a alterar el curso subyacente de la enfermedad (retardar o invertir la progresión) han sido hasta la fecha infructuosos en gran medida. Se ha indicado que medicamentos que restauran el déficit (defecto) , o el mal funcionamiento, de los mensajeros químicos de las células nerviosas (neurotransmisores) , tales como los inhibidores de la colinesterasa (ChEls) , mejoran los síntomas. También se encuentran disponibles medicaciones para tratar las manifestaciones psiquiátricas de la Enfermedad de Alzheimer.

Los inhibidores de la colinesterasa, tales como Tacrina y Rivastigmina, son actualmente la única clase de agentes que están aprobados por la FDA para el tratamiento de la Enfermedad de Alzheimer. Estos agentes son medicinas que restauran el defecto, o mal funcionamiento, de la neurotransmisión... [Seguir leyendo]

1. Una construcción antigénica que comprende un fragmento de un péptido antigénico A1 que consiste en una extensión única o repetitiva de entre 13 y 15 restos de aminoácidos contiguos del fragmento N-terminal 1-16 ó 1-17 del péptido A1, para uso en el tratamiento de una enfermedad o condición asociada a amiloide, caracterizada por una pérdida de capacidad de memoria cognitiva en un animal o un ser humano, en donde el antígeno del péptido A1 es (a) formado previamente por síntesis de péptidos automatizada, estándar, en resina, y (b) modificado después por injerto en resina de un resto lipófilo o hidrófobo a los restos de aminoácidos terminales del péptido A1 formado previamente, y reconstituido en un liposoma, y en donde la administración de dicha construcción antigénica en forma de una composición de vacuna, a un animal o un ser humano aquejado de tal enfermedad o condición , conduce a :

a. la generación de anticuerpos del subtipo Th2 no inflamatorio;

b. la generación de anticuerpos de la subclase IgG independiente de células T; y

c. un aumento de la retención de la capacidad de la memoria cognitiva y/o a una restauración completa de la capacidad de la memoria cognitiva.

2. Una construcción antigénica para uso según la reivindicación 1, que comprende un fragmento de un péptido A1 que consiste en una extensión única o repetitiva de entre 13 y 15 restos de aminoácidos contiguos de la parte N-terminal del péptido A1, seleccionado del grupo que consiste en los restos 1-15, 1-14 y 1-13.

3. Una construcción antigénica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, que comprende un fragmento único o repetitivo de un péptido A1 seleccionado del grupo que consiste en antígeno del péptido A11-15 como se indica en SEQ ID NO:1 y A11-16 ("14) como se indica en SEQ ID NO: 3

4. Una construcción antigénica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el antígeno del péptido A1 es presentado fijado o reconstituido en un soporte/adyuvante.

5. Una construcción antigénica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el resto lipófilo o hidrófobo es un ácido graso, un triglicérido o un fosfolípido.

6. Una construcción antigénica para uso según la reivindicación 5, en donde el resto hidrófobo es ácido palmítico.

7. Una composición de vacuna que comprende una construcción antigénica para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 7, que comprende un antígeno del péptido A11-15.

9. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 8, en donde el antígeno del péptido A11-15 es presentado reconstituido en un liposoma.

10. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 9, en donde la preparación de liposoma contiene un adyuvante y/o un inmunomodulador.

11. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en donde el antígeno de un péptido 1-amiloide es un antígeno del péptido A11-15 palmitoilado, modificado por entre 2 y 4 restos palmitoilo enlazados covalentemente, en cada extremo del péptido reconstituido en un liposoma.

12. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 11, en donde 2 o más moléculas de antígeno del péptido A11-15 palmitoilado, modificadas por restos palmitoilo enlazados covalentemente en cada extremo del péptido, están reconstituidas en un liposoma único.

13. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, que, por administración a un animal o un ser humano, da por resultado, principalmente, la generación de anticuerpos de subtipos no inflamatorios.

14. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 13, en donde dichos anticuerpos son del subtipo Th2 no inflamatorio.

15. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, que, por administración a un animal o un ser humano, da por resultado, principalmente, la generación de anticuerpos de la subclase IgG independiente de células T.

16. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 15, en donde dichos anticuerpos son del isotipo IgG3.

17. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 16, que, por administración a un animal o un ser humano no conduce a un aumento importante de marcadores de inflamación en el cerebro.

18. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 16, que, por administración a un animal o un ser humano conduce a una disminución importante de A11-40 y A11-42 insolubles, relacionados con la placa, en el cerebro.

19. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 16, que, por administración a un animal o un ser humano conduce a una reducción importante del nivel de A11-42 soluble, en el cerebro..

20. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 19, en donde la enfermedad o condición asociada a amiloide es una seleccionada del grupo que consiste en Enfermedad de Alzheimer (AD) , deterioro cognitivo leve (MCI) , demencia de los cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Dutch) , complejo Parkinson-Demencia (Enfermedad de Guam) , parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con HIV, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , diabetes de comienzo en la edad adulta, amiloidosis cardiaca senil, tumores endocrinos y degeneración macular.

21. Una composición de vacuna para uso según la reivindicación 20, en donde la enfermedad o condición asociada a amiloide es Enfermedad de Alzheimer.

22. Una composición de vacuna para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 19, que, por administración a un animal o un ser humano, aquejado de una condición asociada a amiloide, caracterizada por pérdida de capacidad de la memoria cognitiva, conduce a un aumento de la retención de la capacidad de la memoria cognitiva y/o a una restauración completa de la capacidad de la memoria cognitiva.

23. Un método de producción de una composición de vacuna terapéutica, que comprende emplear una construcción antigénica que comprende un fragmento de un péptido antigénico A1 para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

24. Un método de producción de una composición de vacuna terapéutica, que comprende emplear una construcción antigénica que comprende un péptido antigénico A1 según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para uso en el tratamiento de una enfermedad o condición asociada a amiloide, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde el antígeno de un péptido 1-amiloide es un antígeno del péptido A11-15 palmitoilado, modificado por restos de aminoácidos palmitoilados enlazados covalentemente, reconstituido en un liposoma.

25. Un método según la reivindicación 24, en donde el antígeno del péptido A11-15 está modificado por 2 restos de aminoácidos palmitoilados enlazados covalentemente a los extremos N-terminal y C-terminal del péptido, respectivamente.

26. Un método según la reivindicación 24, en donde el antígeno del péptido A11-15 está modificado por 4 restos de aminoácidos palmitoilados, dos de los cuales están enlazados covalentemente a los extremos N-terminal y C-terminal del péptido, respectivamente.

27. Un método según la reivindicación 24, en donde 2 ó más moléculas de antígeno del péptido A11-15 palmitoilado, modificadas por restos palmitoilo enlazados covalentemente en cada extremo del péptido, están reconstituidas en un único liposoma.

28. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, en donde la enfermedad o condición asociada a amiloide, que incluye patologías neurológicas y enfermedades o condiciones caracterizadas por pérdida de capacidad de la memoria cognitiva, está seleccionada del grupo que consiste en Enfermedad de Alzheimer (AD) , deterioro cognitivo leve (MCI) , demencia de los cuerpos de Lewy, síndrome de Down, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis (tipo Dutch) , complejo Parkinson-Demencia (Enfermedad de Guam) , parálisis supranuclear progresiva, esclerosis múltiple, enfermedad de Creutzfeld Jacob, enfermedad de Parkinson, demencia relacionada con HIV, esclerosis lateral amiotrófica (ALS) , diabetes de comienzo en la edad adulta, amiloidosis cardiaca senil, tumores endocrinos y degeneración macular.

29. Un método según la reivindicación 28, en donde la enfermedad o condición asociada a amiloide es la Enfermedad de Alzheimer.

30. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 27, en donde la condición asociada a amiloide está caracterizada por pérdida de capacidad de la memoria cognitiva de un animal o un ser humano, y en donde el tratamiento de un animal o un ser humano aquejado de tal condición asociada a amiloide, conduce a un aumento de la retención de la capacidad de la memoria cognitiva y/o a una restauración completa de la capacidad de la memoria cognitiva.

31. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 30, en donde la administración de dicha composición de vacuna da por resultado, principalmente, la generación de anticuerpos de subtipos no inflamatorios 32. Un método según la reivindicación 31, en donde dichos anticuerpos son del subtipo Th2 no inflamatori.

33. Un método según la reivindicación 31, en donde la administración de dicha composición de vacuna da por resultado, principalmente, la generación de anticuerpos de la subclase IgG independiente de células T

34. Un método según la reivindicación 33, en donde dichos anticuerpos son del isotipo IgG3.

35. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 30, en donde la administración de dicha 5 composición de vacuna no conduce a un aumento importante de marcadores de inflamación en el cerebro.

36. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 30, en donde la administración de dicha composición de vacuna conduce a una disminución importante de A11-40 y A11-42 insolubles, relacionados con la placa, en el cerebro.

37. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 24 a 30, en donde la administración de dicha 10 composición de vacuna conduce a una reducción importante del nivel de A11-42 soluble, en el cerebro.

38. Un método de preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición asociada a amiloide, que comprende emplear un composición de vacuna según una cualquera de las reivindicaciones 7 a 22.

39. Un método de producción de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición asociada a amiloide, según la reivindicación 38, que comprende emplear un péptido antigénico inmunógeno, en donde el 15 antígeno de un péptido 1-amiloide es un antígeno del péptido A11-15 palmitoilado, modificado por restos de aminoácidos palmitoilados enlazados covalentemente, reconstituido en un liposoma.

40. Un anticuerpo o una mezcla de anticuerpos que puede obtenerse de un animal inmunizado con una composición de vacuna según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 22.

41. Un anticuerpo según la reivindicación 40, caracterizado por que es un anticuerpo monoclonal o uno de sus 20 derivados.