Vacuna de rotavirus.

Uso de una cepa de rotavirus humano atenuada de un serotipo G1 en la preparación de unacomposición para inducir una respuesta inmune contra infección por rotavirus del G1 y al menos dos de losserotipos de rotavirus no G1 seleccionados del grupo que consiste en:

serotipos G2, G3, G4 y G9, en el que lacepa de rotavirus atenuada es una variante de rotavirus individual, o sustancialmente una variante derotavirus individual, que tiene un gen VP4 que comprende, en la secuencia de nucleótidos, una adenina (A) enposiciones 788 y 802 y una timina (T) en posición 501 a partir del codón de partida; y en la que el gen VP7comprende, en la secuencia de nucleótidos, una timina (T) en posición 605 y una adenina (A) en posición 897a partir del codón de partida.

Vacuna de rotavirus

Campo de la invención La invención se refiere al uso de una población de rotavirus atenuados de un serotipo de rotavirus en la prevención de las enfermedades asociadas con la infección por rotavirus de otros serotipos de rotavirus. En particular, la invención se refiere al uso de una población de rotavirus atenuados del serotipo G1 en la prevención de enfermedad asociada con la infección por rotavirus de serotipos que no son G1.

Antecedentes La diarrea infecciosa, aguda es la causa principal de enfermedad y muerte en muchas áreas del mundo. Enlos países en desarrollo, el impacto de la enfermedad diarreica es asombroso. Para Asia, África y América Latina, se ha estimado que existen entre 3 y 4 millardos de casos de diarrea cada año y de esos casos aproximadamente de 5 a 10 millones resultan en la muerte (Walsh, J.A. y cols.: N. Engl. J. Med., 301: páginas 967 a 974 (1979) ) .

Los rotavirus se han reconocido como una de las causas más importantes de la diarrea grave en niños y niños pequeños (Estes, M.K. Rotaviruses and Their Replication in Fields Virology, Tercera Edición, editado por Fields y cols., Raven Publishers, Philadelphia, 1996) . Se estima que la enfermedad por el rotavirus es responsable de más de un millón de muertes anualmente. La enfermedad inducida por el rotavirus afecta más generalmente a niños entre 6 y 24 meses de edad y la prevalencia pico de la enfermedad generalmente ocurre durante los meses más fríos en climas templados y durante el año en las áreas tropicales. Los rotavirus se transmiten generalmente de persona a persona por ruta oral-fecal con un período de incubación desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 3 días. A diferencia de la infección en el grupo de edad de 6 meses a 24 meses, los neonatos generalmente son asintomáticos o tienen solamente una enfermedad ligera. En contraste con la enfermedad grave que se encuentra generalmente en los niños pequeños, la mayor parte de los adultos son protegidos como un resultado de una infección anterior por rotavirus, de modo que la mayor parte de las infecciones de los adultos son suaves o asintomáticas (Offit, P.A. y cols. Comp. Ther., 8 (8) : páginas 21 a 26, 1982) .

Los rotavirus son generalmente esféricos y su nombre se deriva de su estructura de la cápside exterior e interior o de doble cobertura. Generalmente, la estructura de la cápside de doble cobertura de un rotavirus rodea una cobertura o núcleo de proteína interna que contiene el genoma. El genoma de un rotavirus está compuesto de 11 segmentos de ARN de doble hebra que codifica al menos 11 proteínas virales diferentes. Dos de estas proteínas virales designadas como VP4 y VP7 están acomodadas en el exterior de la estructura de la cápside de doble cobertura. La cápside interior del rotavirus presenta una proteína, que es la proteína del rotavirus designada VP6. La importancia relativa de estas tres proteínas particulares del rotavirus en promover la respuesta inmune que sigue a la infección por el rotavirus todavía no está clara. Sin embargo, la proteína VP6 determina el antígeno de grupo y de subgrupo y las proteínas VP4 y VP7 son las determinantes de la especificidad del serotipo.

Hasta la fecha, se han identificado al menos 14 serotipos G del rotavirus y 11 serotipos P del rotavirus (Linhares A.C. & Bresse J.S., Pan. Am. J. Publ. Health 2000, 9, 305-330) . Entre estos, han sido identificados entre el rotavirus humano 10 serotipos G y 6 serotipos P.

La proteína VP7 es una glucoproteína de PM 38.000 (PM 34.000 cuando no está glucosilada) que es el producto de la traducción del segmento genómico 7, 8 o 9, dependiendo de la cepa. Esta proteína estimula la formación de un anticuerpo neutralizante después de la infección por rotavirus. La proteína VP4 es una proteína no glucosilada de un PM de aproximadamente 88.000 que es el producto traduccional del segmento genómico 4. Esta proteína también estimula el anticuerpo neutralizante tras la infección por rotavirus.

Dado que las proteínas VP4 y VP7 son las proteínas virales contra las que están dirigidos los anticuerpos neutralizantes, se cree que son candidatos principales para el desarrollo de vacunas para el rotavirus, proporcionando protección contra la enfermedad por rotavirus.

Se sabe que la infección natural por el rotavirus durante la infancia temprana promueve la inmunidad protectora. Por lo tanto es altamente deseable una vacuna de rotavirus vivo atenuado. De preferencia esta debería ser una vacuna oral, ya que esta es la vía natural de la infección del virus.

El desarrollo temprano de la vacuna para evitar las infecciones por el rotavirus comenzó en la década de los 70 después del descubrimiento del virus. Inicialmente, se estudiaron cepas atenuadas de animales y seres humanos y tuvieron resultados mezclados o decepcionantes. Los esfuerzos más recientes se han centrado en recombinantes humano-animal que han sido más exitosos.

Se ha descrito por Ward una cepa de rotavirus como 89-12; véase documento US 5474773 y Bernstein, D.L. y cols., Vaccine, 16 (4) , 381-387, 1998. La cepa 89-12 se aisló de una muestra de deposición recogida de un niño de 14 meses de edad con la enfermedad natural por rotavirus en 1988. De acuerdo con el documento US

5.474.773 el rotavirus humano HRV 89-12 se adaptó después a los cultivos mediante 2 pasos en las células de riñón de mono verde africano (AGMK) y 4 pasos en las células MA-104 como se describe por Ward en J. Clin. Microbiol., 19, 748-753, 1984. Se purificó después en placa 3 veces en células MA-104 (hasta el paso 9) y se cultivó después de 2 pasos adicionales en estas células. Se hizo un paso adicional (paso 12) de la deposición con un ATCC con el número de acceso ATCC VR 2272. La cepa depositada es conocida como 8912C2.

El artículo 1998 en Vaccine por Bernstein y cols. es al que nos referimos más adelante como el documento de Vaccine (1998) . El artículo describe la seguridad e inmunogenicidad de un candidato de vacuna de rotavirus humanos vivos administrados oralmente. Esta vacuna se obtuvo de la cepa 89-12 atenuada pasándola sin purificación de placa 26 veces en las células AGMK primarias y luego otras 7 veces en una línea celular AGMK establecida (33 pasos en total) .

En lo que sigue, el material anteriormente mencionado que se ha pasado en serie 26 veces se referirá como P26 y el material que se ha pasado en serie 33 veces se referirá como P33. En general, el rotavirus derivado pasando de 89-12 n veces se referirá como Pn.

En los ejemplos que siguen el material P33 se pasó 5 veces adicionales en células Vero. Esto se refiere como P38.

Los aislados P26 y P33 descritos en el artículo de Vaccine (1998) no se depositaron en una colección de cultivos, ni se analizaron para establecer su caracterización genética.

Se ha encontrado que la población P26 descrita en la bibliografía comprende una mezcla de variantes. Esto se ha establecido por caracterización genética según se describe más adelante (véanse ejemplos) . Por lo tanto P26 no es una población confiablemente consistente para pasos adicionales, en particular para la producción de lotes de vacuna. De manera similar, P33 comprende una mezcla de variantes y no es consistente confiablemente para la producción de lotes de vacunas.

Se ha encontrado que el material de P26 es una mezcla de al menos tres variantes del gen VP4. El P33 y el P38 son de modo similar una mezcla de dos variantes. Estas variantes parecen ser antigénicamente diferentes, en términos de los epítopos neutralizantes, para la cepa 89-12C2 depositada en la ATCC cuando se evalúan los títulos del anticuerpo neutralizante de sueros de niños vacunados con P33 contra estas variantes.

Además se ha descubierto que cuando el material P33 se administra a niños, se duplican y excretan dos variantes identificadas. De los 100 niños vacunados, solamente 2 mostraron signos de gastroenteritis debido a la infección por rotavirus, mientras que se infectó el 20 % de un grupo de placebo. Estos descubrimientos sugieren que las variantes identificadas están asociadas con protección de la enfermedad del rotavirus.

El documento WO 0112797 desvela un procedimiento de separación de las variantes de rotavirus y una vacuna de rotavirus atenuado vivo mejorada derivada de una cepa de rotavirus humano clonada (homogénea) . También se desvela una población de rotavirus atenuada (aislado) , caracterizada porque comprende una sola variante o substancialmente una sola variante, definida dicha variante por la secuencia de nucleótidos que codifican al menos una de las proteínas principales del virus designada como VP4 y VP7. La eficacia protectora de una vacuna de rotavirus humano atenuado... [Seguir leyendo]

1. Uso de una cepa de rotavirus humano atenuada de un serotipo G1 en la preparación de una composición para inducir una respuesta inmune contra infección por rotavirus del G1 y al menos dos de los serotipos de rotavirus no G1 seleccionados del grupo que consiste en: serotipos G2, G3, G4 y G9, en el que la cepa de rotavirus atenuada es una variante de rotavirus individual, o sustancialmente una variante de rotavirus individual, que tiene un gen VP4 que comprende, en la secuencia de nucleótidos, una adenina (A) en posiciones 788 y 802 y una timina (T) en posición 501 a partir del codón de partida; y en la que el gen VP7 comprende, en la secuencia de nucleótidos, una timina (T) en posición 605 y una adenina (A) en posición 897 a partir del codón de partida.

2. Uso de una cepa de rotavirus atenuada de un serotipo G1 en la preparación de una composición para inducir una respuesta inmune contra infección por rotavirus del G1 y al menos dos de los serotipos de rotavirus no G1 seleccionados del grupo que consiste en: serotipos G2, G3, G4 y G9, en el que la cepa de rotavirus atenuada es depósito 99081301 de ECACC, o una variante de rotavirus individual, o sustancialmente una variante de rotavirus individual, obtenible o derivable del depósito 99081301 de ECACC y que tiene un gen VP4 que comprende, en la secuencia de nucleótidos, una adenina (A) en posiciones 788 y 802 y una timina (T) en posición 501 a partir del codón de partida; y en la que el gen VP7 comprende, en la secuencia de nucleótidos, una timina (T) en posición 605 y una adenina (A) en posición 897 a partir del codón de partida.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en el que la composición es capaz de inducir una respuesta inmune contra infección por rotavirus de al menos tres de los serotipos no G1 de rotavirus seleccionados del grupo que consiste en: serotipos G2, G3, G4 y G9.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 a 3, en el que la composición es capaz de inducir una respuesta inmune frente al serotipo G1 y frente a los serotipos G2, G3, G4 y G9.

5. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 en el que la composición es al menos protectora al 50 %, en una población de individuos vacunados, contra diarrea y/o gastroenteritis y/o gastroenteritis grave causada por infección de un rotavirus de al menos dos serotipos no G1.

6. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 en el que la composición es protectora hasta el 60 %, en una población de individuos vacunados, contra diarrea causada por infección de un rotavirus de al menos dos serotipos no G1.

7. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 en el que la composición es protectora hasta el 81 % contra gastroenteritis causada por infección de un rotavirus de al menos dos serotipos no G1.

8. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 en el que la composición es protectora hasta el 83 % en una población de individuos vacunados contra gastroenteritis grave causada por infección de rotavirus de al menos dos serotipos no G1.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 5, 7 y 8 en el que la gastroenteritis está causada por infección de un rotavirus de al menos tres serotipos no G1 seleccionados del grupo que consiste en G2, G3, G4 y G9.

10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9 en el que la gastroenteritis está causada por infección con G2, G3, G4 y G9.

11. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 10, en el que la composición es para administración en un régimen de 2 dosis.

12. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 11 en el que la cepa de rotavirus atenuada está formulada con un vehículo farmacéutico adecuado o con un tampón antiácido o con ambos.

FIG. 1. Secuencia de VP4 de P43 FIG. 2. Secuencia de VP7 de P43