Uso de la proteína estimulante del crecimiento KIAA1524.

Uso de un oligonucleótido antisentido, un ARN de interferencia pequeño (ARNip),

o una ribozima que inhibe KIAA1524 para la preparación de una composición farmacéutica para tratar, prevenir y/o aliviar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en cáncer y otras enfermedades hiperproliferativas.

Uso de la proteína estimulante del crecimiento KIAA1524

Campo de la invención La presente invención se refiere al uso de un agente que inhibe una proteína estimulante del crecimiento recién descubierta para la fabricación de una composición farmacéutica para prevenir o tratar un cáncer, o prevenir o tratar crecimiento canceroso, invasión o metástasis, o prevenir o tratar otras enfermedades hiperproliferativas en un individuo, regulando negativamente la expresión de dicha proteína estimulante del crecimiento o inactivando dicha proteína.

Antecedentes de la invención El cáncer es una enfermedad devastadora que afecta a todas las comunidades en todo el mundo. Se ha estimado que 1 de cada 2 hombres y 1 de cada 3 mujeres desarrollarán alguna forma de cáncer durante su vida. También se ha estimado que más de 550.000 personas morirán debido al cáncer en los Estados Unidos solamente durante 2005. El cáncer es un término generalizado para un conjunto complejo y ampliamente diferente de enfermedades relacionadas con el crecimiento incontrolado, supervivencia e invasión de células. Aunque hay más de 100 tipos diferentes de cáncer, así como subtipos de cada uno, estudios recientes han revelado un número limitado de elementos genéticos que se requieren para la transformación de células benignas en células cancerosas (Zhao et al., 2004) . En general, se ha concluido que la transformación de células humanas requiere la activación de GTPasa Ras, sobreexpresión de telomerasa, inactivación de proteínas supresoras de tumores p53 y proteína retinoblastoma (Rb) e inhibición de proteína fosfatasa 2A (PP2A) (Zhao et al., 2004) . Es obvio que el entendimiento de la función de estos elementos genéticos podría conducir al desarrollo de terapias de cáncer que se podrían aplicar ampliamente a diferentes tipos de cáncer.

Se conocen en la técnica muchas proteínas asociadas con cáncer. Por ejemplo, la expresión potenciada del autoantígeno p90, también conocido como KIAA1524, se ha detectado en cáncer de próstata humana (Fu-Dong Shi, Proc. Annu. Meet. Am. Assoc. Cáncer Res., 2003, 44: 360-361; Fu-Dong Shi et al., Prostate, 2005, 63: 252-258) así como en cánceres gástricos y de hígado humanos (Linda Soo Hoo et al. Mol. Bio. Cell, 2000, Supl., 11: 357a; Linda Soo Hoo et al., Oncogene, 2002, 21: 5006-5015) . Sin embargo, el papel de KIAA1524 en la patogénesis del cáncer no se conoce.

Como se ha descrito anteriormente, la inhibición de la actividad de PP2A se ha identificado como uno de los prerrequisitos para la transformación de células humanas primarias (Zhao et al., 2004) . PP2A es un complejo proteico trimérico que consiste en una subunidad catalítica (PP2Ac o C) , una subunidad de armazón (PR65 o A) y una de las subunidades B reguladoras alternativas (Figura 1A) (Janssens y Goris, 2001) . PP2A regula el comportamiento celular desfosforilando restos ser/thr reguladores de las proteína quinasas y otras proteínas de señalización. El factor de transcripción oncogénico c-Myc es uno de los muchos sustratos para PP2A. Se ha mostrado recientemente que la desfosforilación mediada por PP2A de serina 62 en c-Myc da como resultado la degradación proteosómica de la proteína (Yeh et al., 2004) . Resulta importante que el antígeno t pequeño viral, que inactiva PP2A, ejerce su potencial oncogénico mediante estabilización de c-Myc (Yeh et al., 2004) .

Incluso aunque la importancia de la inhibición de PP2A para la transformación de células humanas se ha establecido firmemente usando antígenos virales como herramientas de investigación, en la actualidad no se entienden los mecanismos moleculares por los que se produce inhibición de PP2A en células cancerosas humanas transformadas de forma espontánea. Hay por lo tanto una necesidad identificada para dilucidar el mecanismo por el que PP2A inhibe la transformación.

Breve descripción de la invención La invención se basa en el descubrimiento de una proteína estimulante del crecimiento. Los inventores de la presente invención han descubierto que la proteína KIAA1524 (número de referencia de GenBank AAI30565; SEC ID Nº: 1) es un inhibidor endógeno de proteína fosfatasa 2A (PP2A) y que la proteína KIAA1524 se requiere para crecimiento tumoral y proliferación de células cancerosas y que la proteína KIAA1524 está regulada positivamente en tejido canceroso.

La invención se refiere al uso de un oligonucleótido antisentido, un ARN de interferencia pequeño (ARNip) , o una ribozima, que inhibe KIAA1524 para la fabricación de una composición farmacéutica para tratar, prevenir y/o aliviar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en cáncer y otras enfermedades hiperproliferativas.

De acuerdo con una realización específica, el agente previene o inhibe la proliferación y el crecimiento celular inhibiendo que dicha proteína KIAA1524 interaccione con el complejo de PP2A o con el factor de transcripción c-Myc, o en el que dicho agente inhibe los efectos proliferativos y de crecimiento de KIAA1524 que no dependen de la interacción de KIAA1524 con PP2A o c-Myc.

De acuerdo con otra realización específica, dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de células escamosas de la región de cabeza y cuello, cáncer de mama y cáncer de colon.

De acuerdo con otra realización más, dicha enfermedad hiperproliferativa se selecciona del grupo que consiste en psoriasis, hipertrofia miocárdica y tumor benigno.

De acuerdo con una realización adicional, dicho ARNip se selecciona del grupo que consiste en SEC ID Nº: 2 a 6.

Breve descripción de los dibujos Figura 1. KIAA1524 es un inhibidor endógeno de PP2A. La Figura 1A) muestra una imagen esquemática del complejo de PP2A que contiene armazón PR65, subunidad catalítica PP2Ac y una subunidad B reguladora. Se muestra la fusión de TAP de la proteína PR65 usada en la purificación de TAP. Figura 1B) purificación de TAP del complejo proteico de PR65 de las células de fibrosarcoma HT-1080. Se identificaron proteínas en los eluatos de PR65TAP mediante secuenciación peptídica por espectrometría de masas. Figura 1C) El análisis por coinmunoprecipitación de extractos citoplasmáticos de células HeLa con anticuerpo PR65 revela la interacción entre las proteínas endógenas KIAA1524, PR65 y PP2Ac. Pl, suero preinmune; entrada, material de entrada. Figura 1D) Identificación de un mutante de proteína KIAA1524 deficiente en unión de PR65 mediante análisis de coinmunoprecipitación. Figura 1E) Se analizaron células HeLa transfectadas con construcciones de expresión indicadas mediante microscopia confocal para colocalización de KIA1524-PP2Ac. Figura 1F) El agotamiento mediado por ARNip de la expresión de proteína KIAA1524 en células HeLa potencia la actividad serina/treonina fosfatasa de PP2Ac inmunoprecipitado.

Figura 2. Proteína KIAA1524. Figura 2A) La estructura predicha de proteína KIAA1524 revela varios dominios de interacción proteína-proteína potenciales. La proteína KIAA1524mut analizada en las figuras 1D y 1E. Figura 2B) secuencia de aminoácidos de la proteína KIAA1524 (SEC ID Nº 1) .

Figura 3. Identificación del dominio de interacción de PP2A en KIAA1524. Figura 3A) Coinmunoprecipitación de las construcciones de supresión de KIAA1524 con PR65 engódeno de lisados celulares de HeLa. Se analizó la coinmunoprecipitación de proteínas Flag-KIAA1524 indicadas y el complejo de PP2A mediante transferencia de wester de los inmunoprecipitados anti-Flag con el anticuerpo PR65. La eficacia de inmunoprecipitación de las deleciones de KIAA1524 se confirmó mediante inmunotransferencia de KIAA1524. Figura 3B) Identificación de dominio que interacciona con PP2A potencial en KIAA1524. Los resultados en la Figura 3A muestran que KIAA1524 natural interacciona con PP2A (PR65) , mientras que KIAA1524 en la que el dominio 461-533 está suprimido presenta interacción alterada con PP2A. Por lo tanto, se espera que el dominio de KIAA1524 461-533 medie en la interacción entre KIAA1524 y PP2A.

Figura 4. KIAA1524 inhibe la actividad de PP2A asociada con c-Myc y degradación de c-Myc. Figura 4A) el agotamiento inducido por ARNip de proteína KIAA1524 da como resultado regulación negativa de la expresión proteica de c-Myc en células HeLa. Figura 4B) el agotamiento inducido por ARNip de proteína KIAA1524 no inhibe la expresión de ARNm de c-Myc. Figura 4C) el agotamiento inducido por ARNip de proteína KIAA1524 potencia la actividad de PP2A en inmunoprecipitados de c-Myc. Figura 4D) la proteína KIAA1524 no regula la interacción entre las proteínas PP2Ac y c-Myc. Las células HeLa transfectadas con ARNip mezclado o KIAA1524 se sometieron a análisis por coinmunoprecipitación con anticuerpo específico de c-Myc.... [Seguir leyendo]

1. Uso de un oligonucleótido antisentido, un ARN de interferencia pequeño (ARNip) , o una ribozima que inhibe KIAA1524 para la preparación de una composición farmacéutica para tratar, prevenir y/o aliviar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en cáncer y otras enfermedades hiperproliferativas.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el agente previene o inhibe la proliferación y crecimiento celular

inhibiendo la interacción de dicha proteína KIAA1524 con el complejo de PP2A o con el factor de transcripción c-Myc, o en el que dicho agente inhibe los efectos proliferativos y de crecimiento de KIAA1524 que no dependen de la interacción de KIAA1524 con PP2A o c-Myc.

3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que dicho cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de células escamosas de la región de cabeza y cuello, cáncer de mama y cáncer de colon.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicha enfermedad hiperproliferativa se selecciona del grupo que consiste en psoriasis, hipertrofia miocárdica y tumor benigno.

5. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho ARNip se selecciona del grupo que consiste en SEC ID Nº: 2 a 6.