Reactivos y procedimientos de radiomarcado.

Un compuesto de fórmula (I): **Fórmula**

Reactivos y procedimientos de radiomarcado La presente invención se refiere a reactivos y procedimientos para la fluoración con [18F] de biomoléculas, particularmente de péptidos. Los compuestos marcados con 18F resultantes, son útiles como radiofármacos, 5 específicamente para su uso en tomografía por emisión de positrones (PET) .

La aplicación de péptidos bioactivos radiomarcados para la formación de imágenes diagnósticas está adquiriendo importancia en la medicina nuclear. Las moléculas biológicamente activas que interaccionan selectivamente con tipos celulares específicos son útiles para la administración de radioactividad a los tejidos diana. Por ejemplo, los péptidos radiomarcados tienen un potencial significativo para la administración de radionúclidos a tumores, infartos, 10 y tejidos infectados para el diagnóstico por imagen y la radioterapia. El 18F, con su vida media de 110 minutos, es el núclido emisor de positrones de elección para muchos estudios de imagen de receptores. Por lo tanto, los péptidos 18F

bioactivos marcados con tienen gran potencial clínico debido a su utilidad en la PET para detectar cuantitativamente y caracterizar una amplia variedad de enfermedades.

Una dificultad en la preparación de péptidos marcados con 18F es que los reactivos de marcado con 18F existentes precisan de mucho tiempo para su preparación. El marcado efectivo de péptidos y proteínas con 18F sólo se consigue mediante el uso de grupos prostéticos adecuados. En la literatura se han propuesto varios de estos grupos prostéticos, incluyendo la N-succinimidil-4-[18F]fluorobenzoato, m-maleimido-N- (p-[18F]fluorobencil) -benzamida, bromuro de N- (p-[18F]fluorofenil) maleimida y 4-[18F]fluorofenacilbromuro. Casi todos los procedimientos actualmente utilizados hoy en día para el marcado de péptidos y proteínas con 18F utilizan ésteres activos. El reactivo para el

18F

marcado con más comúnmente utilizado es N-succinimidil-4-[18F]fluorobenzoato (SFB) . SFB tiene el inconveniente de que necesita 3 etapas sintéticas para su preparación (fluoración, hidrólisis y generación del éster activo) , seguido de una etapa de purificación mediante HPLC prolongada, por lo que la preparación de SFB es difícil de automatizar. Además, la presencia del anillo fenilo en el reactivo de marcado añade hidrofobicidad significativa al producto marcado con 18F, lo que puede afectar negativamente a su perfil de biodistribución. Por lo tanto, todavía existe una necesidad de reactivos de marcado con 18F alternativos y metodologías que permitan la introducción quimioselectiva rápida de 18F, en particular en péptidos, en condiciones suaves para dar productos marcados con 18F. Además, hay una necesidad de tales metodologías que son susceptibles de automatización para facilitar la preparación de radiofármacos en el contexto clínico.

El documento WO 2004/002984 divulga derivados maleimida marcados con 18F y su uso para marcar 30 macromoléculas.

De acuerdo con un primer aspecto de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I) :

En un aspecto, el marcado con 18F se añade en orto respecto al nitrógeno del piridilo, de tal manera que el compuesto de fórmula (I) tiene la fórmula (Ia) :

Los compuestos de fórmula (I) y (Ia) deben añadir ventajas significativas para el marcado con 18F de biomoléculas. Los compuestos de fórmula (I) y (Ia) pueden marcarse con 18F en un solo paso, el marcado es rápido a una temperatura cercana a la temperatura ambiente, la purificación se puede realizar con un sistema basado en cartucho (por ejemplo, columna Oasis MCX) que hacen que la automatización sea más practicable. También se sabe que el

sistema de piridina es más hidrófilo que el análogo de bencilo y se espera, por lo tanto, añadir un impacto positivo en el perfil de biodistribución del producto 18F. Como se demuestra a continuación, se ha observado que el éster fenílico tetrafluoro es más estable durante el marcado con 18F que otros ésteres activos Los compuestos de fórmula (I) y (Ia) pueden prepararse a partir del correspondiente compuesto de fórmula (II) : 5

o una sal del mismo, en la que L es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, yodo, nitro y tri (alquil C1-6) amonio (convenientemente trimetil amonio) . Dichos compuestos de fórmula (II) son novedosos y, por lo tanto, forman un aspecto adicional de la invención.

En un aspecto, L en el compuesto de fórmula (II) es tri (alquil C1-6) amonio (convenientemente trimetil amonio) , con un contraión adecuado seleccionado de los derivados de ácidos minerales, por ejemplo, ácido clorhídrico, bromhídrico, fosfórico, metafosfórico, perclórico, nítrico y sulfúrico y de los derivados de ácidos orgánicos, por ejemplo, los ácidos tartárico, trifluoroacético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, glucónico, succínico, metanosulfónico, trifluorometanosulfónico y ácido para-toluenosulfónico; adecuadamente seleccionados entre cloruro, bromuro, perclorato, sulfonato, nitrato, fosfato y trifluorometanosulfonato, más adecuadamente con un contraión trifluorometanosulfonato.

En un aspecto, el compuesto de fórmula (II) es:

en la que X-es un contraión como se ha definido anteriormente y es preferiblemente trifluorometanosulfonato.

La preparación de un compuesto de fórmula (I) a partir del compuesto correspondiente de fórmula (II) o una sal del mismo se puede efectuar mediante procedimientos de marcado con 18F estandarizados. El [18F]fluoruro se prepara convenientemente a partir de agua enriquecida con 18O usando la reacción nuclear (p, n) , (Guillaume y col., Appl. Radiat. Isot. 42 (1991) 749-762) y generalmente se aísla como una sal tal como Na18F, K18F, Cs18F, [18F]fluoruro de tetraalquilamonio o [18F]fluoruro de tetraalquilfosfonio. Para aumentar la reactividad del [18F]fluoruro, se puede añadir un catalizador de transferencia de fase, tal como un aminopoliéter o éter corona, por ejemplo, 4, 7, 13, 16, 21, 24 hexaoxa-1, 10-diazabiciclo [8, 8, 8] hexacosano (Kr y ptofix 2.2.2 ) y la reacción se lleva a cabo en un disolvente adecuado. Estas condiciones dan iones fluoruro reactivos. Opcionalmente, se puede usar una trampa de radicales libres para mejorar los rendimientos de fluoración, como se describe en el documento WO 2005/061415. La expresión "trampa de radicales libres" se define como cualquier agente que interacciona con los radicales libres y los inactiva. Una trampa de radicales libres adecuada para este propósito se puede seleccionar a partir de 2, 2, 6, 6tetrametilpiperidina-N-óxido (TEMPO) , 1, 2-difeniletileno (DPE) , ascorbato, ácido para-amino benzoico (PABA) , αtocoferol, hidroquinona, di-t-butil-fenol, β-caroteno y ácido gentísico.

El tratamiento de un compuesto de fórmula (II) con [18F]fluoruro se puede efectuar en presencia de un disolvente orgánico adecuado, tal como acetonitrilo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido, dimetilacetamida, tetrahidrofurano, dioxano, 1, 2-dimetoxietano, sulfolano, N-metilpirolidininona o en un líquido iónico, tal como un derivado de imidazolio (por ejemplo, hexafluorofosfato de 1-etil-3-metilimidazolio) , un derivado de piridinio (por ejemplo, tetrafluoroborato de 1-butil-4-metilpiridinio) , un compuesto de fosfonio o un compuesto de tetraalquilamonio a una temperatura no extrema, por ejemplo, 15ºC a 50ºC, preferiblemente a aproximadamente la temperatura ambiente tal como 15ºC a 30ºC, por ejemplo 18ºC a 25ºC.

Los compuestos de fórmula (II) y las sales de los mismos se pueden preparar a partir de materiales de partida disponibles comercialmente, tales como el ácido 6-cloro-nicotínico. Los rendimientos para el proceso general son buenos (> 50%) . Los pasos incluyen esterificación con tetrafluorofenol activado, por ejemplo, con diciclohexil carbodiimida (DCC) , generación de la sal trimetilamonio mediante el tratamiento del éster del ácido 6-cloro-nicotínico activo con una solución saturada de trimetilamina en tetrahidrofurano (THF) y generación de la sal trifluorometanosulfonato (triflato) con triflato de plata.

Después de la preparación de un compuesto de fórmula (I) , este se puede purificar por procedimientos estándar, generalmente usando extracción en fase sólida, por ejemplo, con una columna Oasis MCX™, de la que el compuesto de fórmula (I) se puede eluir con buena pureza usando un mezcla de disolvente orgánico/agua adecuada.

De acuerdo con un aspecto adicional de la invención, se proporciona un procedimiento para la fluoración con 18F que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I) con un compuesto de fórmula (III) :

para dar un 18F-producto de fórmula (IV) :

La reacción de un compuesto... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de fórmula (I) :

2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de fórmula (Ia) :

3. Un compuesto de fórmula (II) :

o una sal del mismo, en la que L es un grupo saliente seleccionado entre cloro, bromo, yodo, nitro y tri (alquilC1-6) amonio (convenientemente trimetil amonio) .

4. Un compuesto de fórmula (II) o una sal del mismo, de acuerdo con la reivindicación 3, en el que L es tri (alquilC1-6) amonio (convenientemente trimetil amonio) .

5. Un compuesto de fórmula (II) , según la reivindicación 3 o 4, que es:

en la que X-es un contraión y es preferiblemente trifluorometanosulfonato.

6. Un procedimiento para la fluoración con 18F que comprende la reacción de un compuesto de fórmula (I) o (Ia) , como se define en la reivindicación 1 o 2, con un compuesto de fórmula (III) :

para dar u.

18. producto de fórmula (IV) :

7. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6 en el que la biomolécula es un péptido.

8. Un procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6 o 7 en el que la biomolécula es un péptido seleccionado de análogos de la somatostatina, tales como octreótido, bombesina, péptido intestinal vasoactivo, análogos de péptidos quimiotácticos, hormona estimulante de α-melanocitos, neurotensina, péptido Arg-Gly-Asp y sus análogos, péptido de conexión de la pro-insulina humana, endotelina, angiotensina y formil-norleucil-leucil-fenilalanil-norleucil-tirosillisina.

9. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8 en el que la biomolécula comprende el fragmento:

10. Un procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 9 en el que la biomolécula es un péptido de fórmula (A) :

en la que X7 es o bien -NH2º donde a es un número entero de 1 a 10, preferiblemente a es 1.