Procedimientos para producir ácidos cicloalquilcarboxiamido-piridinabenzoicos.

Un procedimiento de preparación del Compuesto 1:**Fórmula**

que comprende las etapas de:

i) proporcionar 2-bromo-3-metilpiridina (Compuesto 2) y ácido 3-(t-butoxicarbonil)fenilborónico (Compuesto3)

ii) acoplar de forma cruzada el Compuesto 2 y el Compuesto 3 en una mezcla bifásica que comprendeagua, un primer disolvente orgánico, una primera base y un catalizador de metal de transición para producirel Compuesto 4.

Procedimientos para producir ácidos cicloalquilcarboxiamido-piridinabenzoicos

Campo técnico de la invención La presente invención se refiere a procedimientos para la preparación de compuestos útiles para tratar una enfermedad mediada por CFTR tal como fibrosis quística.

Antecedentes de la invención CFTR es un canal de aniones mediado por AMPc/ATP que se expresa en diversos tipos de células, que incluyen células epiteliales absorbentes y secretoras, donde regular el flujo de aniones a través de la membrana, además de la actividad de otros canales de iones y proteínas. En células del epitelio, el funcionamiento normal de CFTR es crítico para el mantenimiento del transporte de electrolitos por el cuerpo, que incluye tejido respiratorio y digestivo. CFTR está compuesto por aproximadamente 1480 aminoácidos que codifican una proteína constituida por una repetición en tándem de dominios transmembrana, cada uno de los cuales contiene seis hélices transmembrana y un dominio de unión a nucleótido. Los dos dominios transmembrana están ligados por un dominio regulador (R) polar grande con múltiples sitios de fosforilación que regulan la actividad de canales y el tráfico celular.

El gen que codifica CFTR se ha identificado y secuenciado (véanse Gregor y , R. J. y col. (1990) Nature 347:382-386; Rich, D. P. y col. (1990) Nature 347:358-362) (Riordan, J. R. y col. (1989) Science 245:1066-1073) . Un defecto en este gen produce mutaciones en CFTR produciendo fibrosis quística (“FQ”) , la enfermedad genética letal más común en los seres humanos. La fibrosis quística afecta aproximadamente a uno de cada 2.500 bebés en los Estados Unidos. Dentro de la población general de los Estados Unidos, hasta 10 millones de personas llevan una única copia del gen defectuoso sin efectos de enfermedad aparente. A diferencia, individuos con dos copias del gen asociado a FQ sufren los efectos debilitantes y letales de la FQ, que incluyen enfermedad pulmonar crónica.

En pacientes con fibrosis quística, las mutaciones en CFTR expresadas endógenamente en epitelios respiratorios conducen a secreción apical de aniones reducida, causando un desequilibrio en el transporte de iones y fluido. La disminución resultante en el transporte de aniones contribuye a la acumulación potenciada de moco en el pulmón y las infecciones microbianas acompañantes que, en último término, producen la muerte en pacientes con FQ. Además de enfermedades respiratorias, los pacientes con FQ normalmente sufren problemas gastrointestinales e insuficiencia pancreática que, si se deja sin tratar, produce la muerte. Además, la mayoría de los hombres con fibrosis quística son infértiles y la fertilidad es disminuida entre mujeres con fibrosis quística. A diferencia de los graves efectos de dos copias del gen asociado a FQ, individuos con una única copia del gen asociado a FQ presentan elevada resistencia al cólera y a deshidratación resultante de diarrea - que quizás explica la frecuencia relativamente alta del gen de FQ dentro de la población.

El análisis de secuencias del gen de CFTR de cromosomas de FQ ha revelado diversas mutaciones causantes de enfermedad (Cutting, G. R. y col. (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. y col. (1990) Cell 61:863:870; y Kerem, B-S. y col. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S y col. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451) . Hasta la fecha se han identificado > 1000 mutaciones causantes de enfermedad en el gen de FQ (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/) . La mutación más prevalente es una deleción de fenilalanina en la posición 508 de la secuencia de aminoácidos de CFTR, y se denomina comúnmente LF508-CFTR. Esta mutación se produce en aproximadamente el 70 % de los casos de fibrosis quística y está asociado a una enfermedad grave.

La deleción del residuo 508 en LF508-CFTR previene el plegamiento correcto de la proteína naciente. Esto produce la incapacidad de la proteína mutante a salir del ER, y circular a la membrana plasmática. Como resultado, el número de canales presentes en la membrana está muy por debajo del observado en células que expresan CFTR natural. Además del tráfico alterado, la mutación produce selección defectuosa de canales. Juntos, el número reducido de canales en la membrana y la selección defectuosa conducen a un transporte de aniones reducido a través de epitelios que conducen a transporte de iones y fluido defectuoso (Quinton, P. M. (1990) , FASEB J. 4: 27092727) . Sin embargo, los estudios han mostrado que los números reducidos de LF508-CFTR en la membrana son funcionales, no obstante inferiores a CFTR natural (Dalemans y col. (1991) , Nature Lond. 354: 526-528; Denning y col., arriba; Pasyk y Foskett (1995) , J. Cell. Biochem. 270: 12347-50) . Además de LF508-CFTR, otras mutaciones causantes de enfermedad en CFTR que producen tráfico, síntesis y/o selección de canales defectuosa podrían regularse por incremento o por defecto para alterar la secreción de aniones y modificar la progresión y/o gravedad de la enfermedad.

Aunque CFTR transporta diversas moléculas además de aniones, es evidente que esta función (el transporte de aniones) representa un elemento en un mecanismo importante de transporte de iones y agua a través del epitelio. Los otros elementos incluyen el canal de Na+ epitelial, ENaC, co-transportador Na+/2Cl -/K+, bomba de Na+-K+-ATPasa y los canales de K+ de la membrana basolateral, que son responsables de la captación de cloruro en la célula.

Estos elementos colaboran para lograr el transporte direccional a través del epitelio mediante su expresión y localización selectiva dentro de la célula. La absorción de cloruro tiene lugar por la actividad coordinada de ENaC y

CFTR presente sobre la membrana apical y la bomba de Na+-K+-ATPasa y canales de Cl - expresados sobre la superficie basolateral de la célula. El transporte activo secundario de cloruro del lado luminal conduce a la acumulación de cloruro intracelular, que puede entonces abandonar pasivamente la célula mediante canales de Cl -, produciendo un transporte vectorial. La disposición del co-transportador de Na+/2Cl-/K+, bomba de Na+-K+-ATPasa y los canales de K+ de la membrana basolateral sobre la superficie basolateral y CFTR sobre el lado luminal coordinan la secreción de cloruro mediante CFTR sobre el lado luminal. Debido a que el agua es probable que nunca sea transportada activamente por sí misma, su flujo a través de los epitelios depende de minúsculos gradientes osmóticos transepiteliales generados por el flujo global de sodio y cloruro.

Como se ha tratado anteriormente, se cree que la deleción del residuo 508 en LF508-CFTR impide el plegamiento correcto de la proteína naciente, produciendo la incapacidad de esta proteína mutante para salir del RE y trasladarse a la membrana plasmática. Como resultado, cantidades insuficientes de la proteína madura están presentes en la membrana plasmática y el transporte de cloruro dentro de tejidos epiteliales es significativamente reducido. De hecho, se ha mostrado que este fenómeno celular de procesamiento del RE defectuoso de transportadores ABC por la maquinaria del RE es la base subyacente no solo para enfermedad de FQ, sino para una amplia gama de otras enfermedades aisladas y heredadas. Las dos formas en las que la maquinaria del RE puede fallar es tanto por pérdida de acoplamiento a la exportación del RE de las proteínas que conducen a degradación como por la acumulación en el RE de estas proteínas defectuosas/erróneamente plegadas [Aridor M y col., Nature Med., 5 (7) , pág. 745-751 (1999) ; Shastr y , B.S. y col., Neurochem. International, 43, pp 1-7 (2003) ; Rutishauser, J. y col., Swiss Med Wkly, 132, pp 211-222 (2002) ; Morello, JP y col., TIPS, 21, pp. 466- 469 (2000) ; Bross P. y col., Human Mut., 14, pp. 186-198 (1999) ].

El ácido 3- (6- (1- (2, 2-difluorobenzo[d][1, 3]dioxol-5-il) ciclopropanocarboxamido) -3-metilpiridin-2-il) benzoico en forma de sal se desvela en la publicación PCT internacional WO 2007056341 (estando dicha publicación incorporada en el presente documento por referencia en su totalidad) como modulador de actividad de CFTR y, por tanto, útil en el tratamiento de enfermedades mediadas por CFTR tales como fibrosis quística. Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de procedimientos económicos para la preparación de los ácidos cicloalquilcarboxamidopiridinabenzoicos descritos en el presente documento.

Sumario de la invención Como se describe en el presente documento, la presente invención proporciona procedimientos para preparar correctores de CFTR útiles en el tratamiento de fibrosis quística. Tales compuestos incluyen ácido 3- (6- (1- (2, 2difluorobenzo[d][1, 3]dioxol-5-il) ciclopropanocarboxamido) -3-metilpiridin-2-il) benzoico... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de preparación del Compuesto 1:

que comprende las etapas de:

i) proporcionar 2-bromo-3-metilpiridina (Compuesto 2) y ácido 3- (t-butoxicarbonil) fenilborónico (Compuesto 3)

ii) acoplar de forma cruzada el Compuesto 2 y el Compuesto 3 en una mezcla bifásica que comprende agua, un primer disolvente orgánico, una primera base y un catalizador de metal de transición para producir el Compuesto 4

iii) oxidar el Compuesto 4 para producir el Compuesto 5

iv) añadir un grupo amina a la posición 6 del resto piridilo para producir el Compuesto 6

v) hacer reaccionar el Compuesto 6 con el Compuesto 7

en un segundo disolvente orgánico en presencia de una segunda base para producir el Compuesto 8 5

vi) desesterificar el Compuesto 8 en una mezcla bifásica que comprende agua, un tercer disolvente orgánico y un primer ácido para producir el Compuesto 9

y vii) suspender o disolver el Compuesto 9 en un disolvente apropiado durante una cantidad eficaz de tiempo para producir el Compuesto 1.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el primer, segundo y/o tercer disolvente orgánicos son un disolvente aprótico.

3. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el primer y/o segundo disolvente orgánicos son tolueno.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el primer disolvente orgánico es un disolvente prótico, metanol, etanol o isopropanol.

5. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la primera base es una base inorgánica o carbonato de potasio.

6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el catalizador de metal de transición es un catalizador a base de paladio o Pd (dppf) Cl2.

7. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción de oxidación se lleva a cabo usando un peróxido o ácido peracético.

8. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción de oxidación se lleva a cabo en presencia de un anhídrido o en presencia de anhídrido ftálico.

9. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción de aminación se lleva a cabo en presencia de un compuesto de sulfonilo o en presencia de anhídrido metanosulfónico.

10. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el reactivo de aminación usado en la reacción de aminación es una alcoholamina o etanolamina.

11. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la segunda base es una base orgánica o trietilamina.

12. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción entre el Compuesto 6 y el Compuesto 7 se lleva a cabo en presencia de una amina catalítica o en presencia de una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina.

13. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el tercer disolvente orgánico es acetonitrilo.

14. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el primer ácido es un ácido inorgánico o ácido clorhídrico.

15. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el disolvente apropiado está seleccionado de agua o de una mezcla de 50 % de metanol/agua o agua.

16. El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende además la etapa de filtrar la suspensión del Compuesto 1 o concentrar la solución del Compuesto 1 para efectuar la recristalización y filtrar el Compuesto 1 recristalizado.

17. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula 1:

que comprende la etapa de: ia) hacer reaccionar un compuesto de fórmula 6a:

en la que R es H, C1-6 alifático, arilo, aralquilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo; R1 está seleccionado independientemente de -RJ, -ORJ, -N (RJ) 2, -NO2, halógeno, -CN, -haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4, -C (O) N (RJ) 2, -NRJC (O) RJ, -SORJ, -SO2RJ, -SO2N (RJ) 2, -NRJSO2RJ, -CORJ, - CO2RJ, -NRJSO2N (R) 2, -COCORJ;

RJ es hidrógeno o C1-6 alifático;

o es un número entero de 0 a 3 inclusive; y p es un número entero de 0 a 5 inclusive;

con un compuesto de fórmula 7a:

en la que A es un anillo de heterocicloalquilarilo condensado; R1 está seleccionado independientemente de -RJ, -ORJ, -N (RJ) 2, -NO2, halógeno, -CN, -haloalquilo C1-4, haloalcoxi C1-4, -C (O) N (RJ) 2, -NRJC (O) RJ, -SORJ, -SO2RJ, -SO2N (RJ) 2, -NRJSO2RJ, -CORJ, - CO2RJ, NRJSO2N (RJ) 2, -COCORJ;

RJ es hidrógeno o C1-6 alifático; m es un número entero de 0 a 3 inclusive; n es un número entero de 1 a 4 inclusive; y X es un halógeno o OH;

en un segundo disolvente orgánico en presencia de una segunda base.

18. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que el segundo disolvente orgánico es un disolvente aprótico.

19. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que el segundo disolvente orgánico es tolueno.

20. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que la segunda base es una base orgánica.

21. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que la segunda base es trietilamina.

22. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que la reacción entre el Compuesto 6a y el Compuesto 7a se lleva 30 a cabo en presencia de una amina catalítica.

23. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que la reacción entre el Compuesto 6a y el Compuesto 7a se lleva a cabo en presencia de una cantidad catalítica de dimetilaminopiridina.

24. El procedimiento de la reivindicación 17, en el que cuando R1 en el anillo de fenilo en la fórmula 1 es un éster, el procedimiento comprende además desesterificar el compuesto de fórmula 1 en una mezcla bifásica que comprende agua, un tercer disolvente orgánico y un primer ácido dando una sal de ácido.

25. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el tercer disolvente orgánico es acetonitrilo.

26. El procedimiento de la reivindicación 24, el primer ácido es un ácido inorgánico.

27. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que el primer ácido es ácido clorhídrico.

28. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que la reacción de desesterificación se realiza a entre 20 ºC y 60 ºC.

29. El procedimiento de la reivindicación 24, en el que la sal de ácido se convierte en la forma libre, Forma I, 10 suspendiendo o disolviendo la sal de ácido en un disolvente apropiado durante una cantidad eficaz de tiempo.

30. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que el disolvente apropiado está seleccionado de agua o de una mezcla de 50 % de metanol/agua.

31. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que el disolvente apropiado es agua.

32. El procedimiento de la reivindicación 29, en el que la cantidad eficaz de tiempo es entre 2 y 24 horas.

33. El procedimiento de la reivindicación 29, que comprende además la etapa de filtrar la suspensión del compuesto de fórmula 1 en la Forma I, o concentrar la solución del compuesto de fórmula 1 en la Forma I, para efectuar la recristalización y filtrar el compuesto recristalizado de fórmula I en la Forma I.