Procedimientos de modificación de oligómeros beta amiloides utilizando compuestos no peptídicos.

Compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por

N-(2-metoxi-fenil)-2-oxo-2-{N'-[3-oxo-3-tiofen-2-il-1-trifluorometil-prop-(Z)-ilideno]-hidrazino}-acetamida;

éster etílico del ácido 2-{[1-(2-hidroxi-3-metoxi-fenil)-met-(E)-iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4,5,6,7- tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico; éster etílico del ácido 2-{[1-(2-hidroxinaftalen-1-il)-met-(E)-iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4,5,6,7-tetrahidro- benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1-(2-hidroxifenil)-met-(E)-iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4,5,6,7-tetrahidro- benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

2-(5-hidroxi-3-isobutil-5-(trifluorometil)-4,5-dihidro-1H-pirazol-1-il)-N-(2-metoxifenil)-2-oxoacetamida; y

(E)-2-hidroxi-N'-((1-hidroxinaftalen-2-il) metilen)benzohidrazida para su utilización en un procedimiento in vivo en un paciente que consiste en:

(a) antagonizar la formación de LDDA neurotóxico del Aß1-42 monomérico poniendo en contacto Aß1-42 monomérico con dicho compuesto; o para

(b) inhibir, regular y/o modular la disfunción neuronal y/o la neurotoxicidad provocadas por LDDA en una célula neuronal o tejido neuronal inhibiendo la formación de los LDDA que comprende poner en contacto los monómeros de Aß1-42 que pueden estar en presencia de células neuronales con una cantidad eficaz de dicho compuesto.

Procedimientos de modificación de oligómeros º amiloides utilizando compuestos no peptídicos.

Antecedentes de la invención Campo de la invención La presente invención se refiere a procedimientos para inhibir, regular y/o modular la formación de oligómeros º1-42 amiloides solubles, globulares, no fibrilares, neurotóxicos procedentes de monómeros º1-42 amiloides utilizando compuestos no peptídicos que tienen un peso molecular inferior a 1000. La presente invención también se refiere a procedimientos de tratamiento de un paciente que padece enfermedades relacionadas con la formación de oligómeros º1-42 amiloides neurotóxicos solubles, globulares, no fibrilares mediante la administración de compuestos no peptídicos a los pacientes.

Estado de la técnica

La enfermedad de Alzheimer (EA) es una demencia progresiva mortal sin cura en la actualidad. Aunque la base molecular de la enfermedad no se ha demostrado, considerables pruebas implican actualmente a las neurotoxinas derivadas de péptidos beta amiloides (Aß) y, en particular, el péptido beta amiloide de 42 aminoácidos (Aß1-42) . Aß es un péptido anfipático, cuya abundancia aumenta por mutaciones genéticas y factores de riesgo relacionados con la EA. Las fibrillas formadas a partir de Aß constituyen los núcleos de las placas amiloides seniles, que son señas de identidad del cerebro EA. Las fibrillas análogas generadas in vitro son letales para las neuronas cerebrales cultivadas. Estos descubrimientos proporcionan la lógica central para la hipótesis de la cascada amiloide original, una teoría en la que se propuso que la pérdida de memoria es la consecuencia de la muerte neuronal producida por Aß fibrilar (Hardy y Higgins (1992) Science 256:184-185) .

A pesar de su fuerte apoyo experimental y atractivo intuitivo, la hipótesis de la cascada amiloide original ha demostrado ser inconsistente con las observaciones clave, incluida la escasa correlación entre la demencia y la carga amiloide de la placa senil (Katzman (1988) Ann. Neurol. 23 (2) :138-144) . Utilizando un modelo de ratón transgénico de la EA, se obtuvieron dos conclusiones sorprendentes cuando los ratones se trataron con anticuerpos monoclonales contra Aß: (1) los ratones vacunados presentaron inversión de la pérdida de memoria, con recuperación evidente en 24 horas, y (2) beneficios cognitivos de la vacunación acumulados a pesar de ningún cambio en los niveles de la placa senil (Dodart et al. (2002) Nat. Neurosci 5:452-457; Kotilinek et al. (2002) J. Neurosci. 22:6331-6335) . Dichos descubrimientos no son coherentes con un mecanismo para la pérdida de memoria dependiente de la muerte neuronal producida por fibrillas de amiloide.

Los defectos destacados en la hipótesis de la cascada amiloide original se han eliminado por una hipótesis actualizada de la cascada amiloide que incorpora una función para moléculas adicionales neurológicamente activas formadas por autoensamblaje Aß. Estas moléculas son ligandos difundibles derivados de º-amiloides (LDDA) , que se ensamblan en Aß1-42 a bajas concentraciones (Lambert et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:6448-6453) . Esencialmente los eslabones que faltan en la hipótesis de la cascada amiloide original, LDDA inhiben rápidamente a largo plazo la potenciación (Lambert et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:6448-6453; Walsh et al. (2002) Nature 416:535-539; Wang et al. (2002) Brain Res. 924:133-140) , un paradigma experimental clásico para la memoria y la plasticidad sináptica. En la hipótesis de la cascada Aß actualizada la pérdida de memoria surge de la falta de sinapsis, antes de la muerte de las neuronas, originándose el fallo por LDDA, no fibrillas (Hardy y Selkoe (2002) Science 297:353-356) . Los LDDA se producen en el tejido cerebral y son sorprendentemente elevados en el tejido cerebral de EA en comparación con referencias de edad similar (Kayed et al. (2002) Science 300:486-489; Gong et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:10417-10422) y en modelos de ratones transgénicos de EA (Kotilinek et al. (2002) . J. Neurosci. 22:6331-6335; Chang et al. (2003) J. Mol. Neurosci. 20:305-313) .

Un enfoque mecanicista simplista a esta teoría puede ilustrarse de la manera siguiente:

Placa amiloide senil º Aß1-42 monomérico º LDDA

donde la formación de LDDA es una ruta separada de formación de la placa amiloide senil de los cuales ambas están en equilibrio con Aß1-42 monomérico.

Otros experimentos han demostrado importantes propiedades neurológicas de los LDDA. Se ha demostrado que los LDDA tienen toxicidad selectiva para las neuronas CA1 del hipocampo en comparación con neuronas CA3, y completa ausencia de toxicidad para con las neuronas cerebelares (Kim et al. (2003) FASEB J. 17:118-120) . La inyección ventricular de oligómeros Aß1-42 en ratas naturales dio lugar a modelos de comportamiento rápidos y alterados con recuperación completa que ocurre en 24 horas (Clear y et al. (2005) Nat. Neurosci. 8:79-84) , y estas carencias se atribuyen a oligómeros de orden superior, específicamente 12-meros (Lesne et al. (2006) Nature 440:352-357) . La unión de LDDA a las neuronas se produce con una alta especificidad y se localiza en receptores posinápticos en un subconjunto de neuronas del hipocampo (Lacor et al. (2004) J. Neurosci. 24:10191-10200) . Esto provoca la rápida y persistente regulación por incremento del arco del producto génico precoz inmediato, cuya traducción es dependiente de la actividad en polirribosomas situados en subconjuntos de las espinas dendríticas (Steward et al. (1998) Neuron 21:741-751; Guzowski et al. (2000) J. Neurosci. 20:3993-4001) . Más recientemente, los LDDA han estado implicados como activadores corriente arriba de la fosforilación de tau y se ha demostrado que interfiere en el comportamiento animal a niveles femtomolares (Matsubara et al. (2004) Neurobiol. Aging 25:833841) .

La reversibilidad de la pérdida de memoria en modelos de ratón, acoplados con las propiedades neurológicas de los LDDA y su presencia en el cerebro de un EA, proporciona un fuerte apoyo a la hipótesis de que la EA es una enfermedad sináptica provocada por LDDA (Lambert et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:6448-6453; Klein et al. (2001) Trends Neuroscis. 24:219-220; Selkoe (2002) Science 298:789-791) .

La utilización de anticuerpos específicos para los LDDA es una poderosa manera de modular el equilibrio entre Aß142 monomérico y los LDDA proporcionando de este modo tratamiento para las enfermedades mediadas por LDDA. Sin embargo, la administración de anticuerpos por lo general está limitada a soluciones inyectables que plantean problemas de observancia por parte del paciente, así como la presencia de un médico adjunto. Las pequeñas moléculas que modulan este equilibrio, administrables por medios no inyectables tales como la administración oral, la administración transdérmica, la administración pulmonar, la administración nasal, etc. serían especialmente beneficiosas.

Se afirma que numerosas moléculas pequeñas desarrolladas originalmente como bloqueadores de fibrillas de amiloide poseen propiedades de bloqueo de ensamblaje de Aß oligómeros. Algunos de estos compuestos incluyen Alzhemd™ (Gervais (2004) Neurobiol. Aging 25:S11-12) , Clioquinol (Ritchie et al. (2003) Arch. Neurol. 60:16851691) , -ciclodextrinas sustituidas (Yu et al. (2002) J. Mol. Neurosci. 19:51-55) , trehalosa (Lui (2005) Neurobiol. Disease 20:74-81) , fenoles sustituidos con un solo amino, carbonilo y nitro (De Felice et al. (2001) FASEB J. 20 de marzo; De Felice et al. (2004) FASEB J. 18:1366-1372) , Curcumina (Yang et al. (2005) J. Biol. Chem. 280 (7) :58925901) , análogos de ciclohexanhexol (McLaurin et al. (2006) Nature Med. 12:801-808) , espirosteroles (Lecanu et al. (2004) Steroids 69:1-16) y pironas tricíclicas (Maeqawa et al. (2006) J. Neurochem. 98:57-67) . Dos de estos compuestos, Alzhemd™ y Clioquinol, han avanzado en ensayos clínicos.

Alzhemed™ (ácido 3-amino-1-propansulfónico) , denominado "GAG mimético", se propone para reducir los niveles de amiloide soluble e insoluble al unirse al monómero Aß, aunque ningún detalle experimental ha aparecido para confirmar el modo de acción propuesto. Alzhemed™ ha completado recientemente una ampliación de 20 meses de estudio abierto de un ensayo en fase II, y hay informes de deterioro cognitivo ralentizado en algunos pacientes con EA leve, sin embargo, no se observó eficacia durante la fase a ciegas del estudio (Gervais (2004.) Neuirobiol Aging

25: S11-12) .

El segundo compuesto en un ensayo clínico en fase II, Clioquinol, se demostrado que estabiliza la capacidad cognitiva de los pacientes en comparación con los pacientes no tratados y presentaban concentraciones... [Seguir leyendo]

1. Compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por 5 N- (2-metoxi-fenil) -2-oxo-2-{N'-[3-oxo-3-tiofen-2-il-1-trifluorometil-prop- (Z) -ilideno]-hidrazino}-acetamida;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxi-3-metoxi-fenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico; éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxinaftalen-1-il) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidro

benzo[b]tiofeno-3-carboxílico; éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxifenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

2. (5-hidroxi-3-isobutil-5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida; y (E) -2-hidroxi-N'- ( (1-hidroxinaftalen-2-il) metilen) benzohidrazida para su utilización en un procedimiento in vivo en un paciente que consiste en:

(a) antagonizar la formación de LDDA neurotóxico del Aß1-42 monomérico poniendo en contacto Aß1-42 monomérico con dicho compuesto; o para (b) inhibir, regular y/o modular la disfunción neuronal y/o la neurotoxicidad provocadas por LDDA en una célula neuronal o tejido neuronal inhibiendo la formación de los LDDA que comprende poner en contacto los monómeros de Aß1-42 que pueden estar en presencia de células neuronales con una cantidad eficaz de dicho compuesto.

2. Compuesto para su utilización según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es la 2- (5-hidroxi-3-isobutil5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida.

3. Compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por

N- (2-metoxi-fenil) -2-oxo-2-{N'-[3-oxo-3-tiofen-2-il-1-trifluorometil-prop- (Z) -ilideno]-hidrazino}-acetamida;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxi-3-metoxi-fenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxinaftalen-1-il) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxifenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico; 45 2- (5-hidroxi-3-isobutil-5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida; y

(E) -2-hidroxi-N'- ( (1-hidroxinaftalen-2-il) metilen) benzohidrazida para su utilización en el tratamiento de un paciente que padece o está en situación de riesgo de padecer una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por la enfermedad de Alzheimer, el síndrome de Down, apoplejía, el deterioro cognitivo leve, la demencia relacionada con la isquemia focal y la degeneración neuronal.

4. Composición para su utilización in vivo en el antagonismo de la formación de LDDA neurotóxico del Aß1-42

monomérico en un paciente en la que la composición comprende una cantidad eficaz de un compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por

N- (2-metoxi-fenil) -2-oxo-2-{N'-[3-oxo-3-tiofen-2-il-1-trifluorometil-prop- (Z) -ilideno]-hidrazino}-acetamida;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxi-3-metoxi-fenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxinaftalen-1-il) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico; 65 éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxifenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidro

benzo[b]tiofeno-3-carboxílico; 2- (5-hidroxi-3-isobutil-5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida; y 5 (E) -2-hidroxi-N'- ( (1-hidroxinaftalen-2-il) metilen) benzohidrazida.

5. Composición para su utilización in vivo en la inhibición, la regulación y/o la modulación de cualquier disfunción neuronal o la neurotoxicidad provocadas por LDDA en una célula neuronal de un paciente inhibiendo la formación de los LDDA, en la que la composición comprende una cantidad eficaz de un compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por

N- (2-metoxi-fenil) -2-oxo-2-{N'-[3-oxo-3-tiofen-2-il-1-trifluorometil-prop- (Z) -ilideno]-hidrazino}-acetamida;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxi-3-metoxi-fenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 715 tetrahidro-benzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxinaftalen-1-il) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

éster etílico del ácido 2-{[1- (2-hidroxifenil) -met- (E) -iliden-hidrazinooxalil]-amino}-6-metil-4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo[b]tiofeno-3-carboxílico;

2. (5-hidroxi-3-isobutil-5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida; y

(E) -2-hidroxi-N'- ( (1-hidroxinaftalen-2-il) metilen) benzohidrazida.

6. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que dicho compuesto es 2- (5-hidroxi-3isobutil-5- (trifluorometil) -4, 5-dihidro-1H-pirazol-1-il) -N- (2-metoxifenil) -2-oxoacetamida.

7. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que el compuesto se administra en un cantidad de aproximadamente 0, 05 mg a aproximadamente 1.000 mg, una o más veces al día.

8. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que la composición comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable. 35

9. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que el LDDA, si existe, está asociado a fibrillas amiloides insolubles, placas seniles u ovillos.

10. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que el LDDA, si existe, está asociado a una

enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por la enfermedad de Alzheimer, el síndrome de Down, la apoplejía y el deterioro cognitivo leve.

11. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que el LDDA, si existe, está asociado a una enfermedad seleccionada de entre el grupo constituido por la demencia relacionada con la isquemia focal y la 45 degeneración neuronal.

12. Composición para su utilización según la reivindicación 4 o 5, en la que el LDDA, si existe, está asociado a la sobrexpresión de la proteína 1-42 amiloide.