Procedimientos de interrupción mejorados para un proceso de inactivación de glóbulos rojos.

Un procedimiento de tratamiento de una composición de glóbulos rojos para inactivar un patógeno,

si está presente, que comprende mezclar los siguientes con la composición de glóbulos rojos:

(a) un compuesto inactivador de patógenos que es β-alanina, N-(acridin-9-il), 2-[bis(2-cloroetil)amino]etil éster;

(b) un interruptor que es glutatión, en el que la proporción molar de interruptor con respecto al compuesto inactivador de patógenos es de 20:1 a 200:1,

en el que el glutatión se neutraliza con 0,5 a 2 equivalentes de base, en el que un equivalente se refiere a una cantidad molar que es equivalente a la cantidad molar de interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base.

Procedimientos de interrupción mejorados para un proceso de inactivación de glóbulos rojos.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

El campo de esta invención se refiere a procedimientos para interrumpir compuestos electrófilos reactivos usados en el tratamiento de productos sanguíneos para inactivar posibles contaminantes patógenos. En particular, se usan compuestos nucleófilos, tales como tioles, para interrumpir los compuestos electrófilos reactivos en composiciones de glóbulos rojos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La transmisión de enfermedades a través de productos sanguíneos y otros materiales biológicos permanece como un serio problema de la salud. Aunque han tenido lugar avances significativos en la clasificación de donadores de sangre y ensayos de sangre, los virus, tales como el virus de la hepatitis B (VHB) , hepatitis C (VHC) , y el virus de inmunodeficiencia humana (VIH) pueden escapar a la detección en productos sanguíneos durante las pruebas debido a los bajos niveles de virus o anticuerpos virales. Además del peligro vírico, actualmente no existen pruebas reguladas adecuadas para clasificar la presencia de microbios no virales, tales como bacterias o protozoos, en sangre prevista para su uso en transfusiones. El riesgo también existe en que un patógeno hasta ahora desconocido puede hacerse prevalente en el suministro sanguíneo y presentar una amenaza de transmisión de enfermedades, como el hecho ocurrido antes del reconocimiento del riesgo de la transmisión de VIH a través de las transfusiones sanguíneas.

Los agentes químicos se han introducido en la sangre o en el plasma sanguíneo para inactivar patógenos antes del uso clínico del producto sanguíneo. Típicamente, para productos sanguíneos que tienen poco o ningún contenido de glóbulos rojos, tales como plaquetas y plasma, se utilizan compuestos fotoquímicamente activados tales como psoralenos. Para productos sanguíneos que contienen glóbulos rojos, se han desarrollado compuestos para la inactivación del patógeno, que no requieren fotoactivación. Estos compuestos típicamente tienen grupos electrófilos que reaccionan con patógenos, más específicamente con ácido nucleico patógeno. Por ejemplo, la patente de Estados Unidos Nº 5.055.485 describe la inactivación de virus en composiciones que contienen células y proteínas utilizando epóxidos de aril diol. Pueden usarse otros compuestos que generan electrófilos in situ. LoGrippo y col., evaluaron el uso de mostaza de nitrógeno, CH3-N (CH2CH2C1) 2, para la inactivación viral. LoGrippo y col., Proceedings of the Sixth Congress of the International Society of Blood Transfusion, Bibliotheca Haematologica (Hollander, ed.) , 1958, págs. 225-230. Más significativamente, las patentes de Estados Unidos Nº 6.410.219 y 5.691.132, describen el uso de compuestos que tienen un componente que se dirige al ácido nucleico, así como un componente electrófilo que reacciona con el ácido nucleico con el fin de inactivar el patógeno. La patente de Estados Unidos Nº 6.514.987 describe compuestos similares, en la que el componente que se dirige al ácido nucleico del compuesto está enlazado al componente electrófilo reactivo a través de un enlazador hidrolizable. Las patentes de Estados Unidos Nº 6.136.586 y 6.617.157 describen el uso de oligómeros de etilendiamina y compuestos relacionados para la inactivación de patógenos. Estos compuestos derivados de etilendiamina típicamente tienen un grupo aziridina, que proporciona el componente electrófilo reactivo, y un componente de poliamina, que proporciona la dirección al ácido nucleico del compuesto. La clase general de compuestos dirigidos al ácido nucleico que tienen un grupo reactivo electrófilo o similar con el ácido nucleico se utilizan para inactivar patógenos en la sangre, productos sanguíneos, y una variedad de muestras de origen biológico.

Existe una preocupación en que, mientras estos compuestos están diseñados para reaccionar específicamente con ácidos nucleicos, pueden reaccionar con otros compuestos de la sangre, tales como proteínas o membranas celulares. Estas reacciones secundarias son desfavorables y pueden causar efectos adversos, tales como modificaciones de proteínas y membranas celulares que pueden reconocerse por el sistema inmunitario. Cuando se usan repetidamente dichos productos sanguíneos, pueden dar como resultado una respuesta inmune del receptor para el producto sanguíneo tratado. La patente de Estados Unidos 6.709.810 describe métodos de interrupción de dichos compuestos inactivadores de patógenos con el fin de reducir el nivel de cualquier reacción secundaria adversa de este tipo.

El documento US 2003/0113704 A1 se refiere a procedimientos para la inactivación de patógenos en un material biológico mediante un procedimiento que comprende: (i) poner en contacto el material biológico con una solución de aditivos que comprende una concentración de cloruro de menos de aproximadamente 10 mM, (ii) poner en contacto el material biológico con un compuesto de inactivación de patógenos en una cantidad suficiente para inactivar al menos 1 log de la bacteria, y (iii) incubar el material biológico en contacto con la solución de aditivos y el compuesto de inactivación de patógenos durante un tiempo suficiente para inactivar al menos 1 log de la bacteria. Opcionalmente, el procedimiento puede incluir el uso de un interruptor que reduce reacciones secundarias no deseadas de los agentes de inactivación de patógenos en materiales biológicos.

Sin embargo, aunque dichos procedimientos reducen significativamente las reacciones secundarias no deseadas, es deseable una reacción adicional de las respuestas inmunes no deseadas. Ensayos clínicos recientes usando dichos compuestos para el tratamiento de los glóbulos rojos han indicado la posibilidad de dichos acontecimientos adversos. En un comunicado de prensa de V.I. Technologies, Inc. con fecha del 17 de noviembre de 2003, se recomendó que su ensayo crónico de la Fase III del sistema de reducción de patógenos INACTINE™ para glóbulos rojos se detuviera debido a una preocupación acerca de las respuestas del anticuerpo para los glóbulos rojos tratados con INACTINE™. En un comunicado de prensa de Cerus Corporation con fecha del 4 de septiembre de 2003, se indicó que detuvieron voluntariamente un ensayo de Fase III para su programa de glóbulos rojos de patógenos inactivados después de que dos pacientes del estudio desarrollasen anticuerpos para los glóbulos rojos tratados con S-303, el compuesto usado en su sistema de inactivación de patógenos para los glóbulos rojos. Dichos anticuerpos se detectan típicamente con el uso de un ensayo de anti-globulina indirecto que puede realizarse sin un conocimiento detallado de la naturaleza u homogeneidad del anticuerpo real. Dichos ensayos se conocen bien por los expertos en la técnica y son muy sensibles, permitiendo la detección de hasta 500 moléculas por GR. El procedimiento más común de detección de estos anticuerpos es a través de la mezcla del suero del paciente con la preparación de GR que es una candidata para infusión y detectando si tiene lugar una reacción de aglutinación: Esto se denomina una correspondencia cruzada de la unidad de GR con respecto al suero del paciente. Se proporciona más sensibilidad por la inclusión de una inmunoglobulina anti-humana que reacciona de forma cruzada con el anticuerpo. Esto mejora la reactividad entre IgG u otros anticuerpos sobre la superficie de los GR. Finalmente, puede obtenerse incluso más sensibilidad de detección mediante la inclusión de potenciadores en el medio de reacción que mejoran la tasa de anticuerpos con otro diferente (AABB manual 13ª edición) . Dichos ensayos son más sensibles que, por ejemplo, los ensayos de citometría de flujo, y pueden observarse incluso cuando otros procedimientos indican la ausencia de cualquier anticuerpo potencial. Dichos fenómenos tienen lugar en ensayos clínicos y muchas veces se asocian con poblaciones de pacientes específicas que pueden tener una mayor tendencia a desarrollar estos anticuerpos.

Por lo tanto, existe la necesidad de procedimientos para reducir reacciones secundarias electrófilas no deseadas de compuestos inactivadores de patógenos que reaccionan con patógenos a través de un grupo electrófilo, mientras se conserva la habilidad del compuesto inactivador de patógenos para inactivar patógenos dañinos. Específicamente, existe la necesidad de procedimientos mejorados para interrumpir los compuestos inactivadores de patógeno en los glóbulos rojos. Se necesita un nuevo procedimiento de este tipo para reducir de forma significativa el riesgo de una respuesta inmune adversa para los glóbulos rojos debido al tratamiento con un compuesto inactivador de patógenos.

1. Un procedimiento de tratamiento de una composición de glóbulos rojos para inactivar un patógeno, si está presente, que comprende mezclar los siguientes con la composición de glóbulos rojos:

(a) un compuesto inactivador de patógenos que es 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2-cloroetil) amino]etil éster;

(b) un interruptor que es glutatión, en el que la proporción molar de interruptor con respecto al compuesto inactivador de patógenos es de 20:1 a 200:1, en el que el glutatión se neutraliza con 0, 5 a 2 equivalentes de base, en el que un equivalente se refiere a una cantidad molar que es equivalente a la cantidad molar de interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que tanto la base como el interruptor se mezclan con la composición de glóbulos rojos antes de, al mismo tiempo, o no más de 30 minutos después de mezclar el compuesto inactivador de patógenos con la composición de glóbulos rojos.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que la base y el interruptor se mezclan entre sí antes de mezclar la base o el interruptor con la composición de glóbulos rojos.

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que tanto el interruptor como la base se proporcionan por una sal básica que comprende el interruptor.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la base es NaOH.

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la base es un tampón básico.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la base comprende al menos 1 equivalente de base.

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la concentración del interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base es mayor de 2 mM.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la concentración del interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base es mayor de 2 mM, y en el que el pH de la mezcla resultante a temperatura ambiente está en el intervalo de 7, 0 a 8, 5, comprendiendo adicionalmente el procedimiento la etapa de:

(c) ajustar el pH de la composición que comprende glóbulos rojos de manera que el pH de la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base a temperatura ambiente esté en el intervalo de 7, 0 a 8, 5.

10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que el pH de la composición que comprende glóbulos rojos se ajusta mediante la adición de al menos 1 equivalente de base.

11. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que el interruptor se neutraliza con al menos un equivalente de una base adecuada anterior a la adición del interruptor a la composición de glóbulos rojos, y el pH de la composición que comprende glóbulos rojos se ajusta mediante la adición del interruptor neutralizado.

12. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la concentración del interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base está en el intervalo de 4 mM a 40 mM.

13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la concentración de glutatión en la mezcla resultante es de 5 mM a 30 mM, y la concentración del 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2cloroetil) amino]etil éster es de 0, 05 mM a 0, 5 mM.

14. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que la concentración de glutatión en la mezcla resultante es de 5 mM a 30 mM, y la concentración del 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2cloroetil) amino]etil éster es de 0, 1 mM a 0, 3 mM.

15. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que la proporción molar de interruptor con respecto al compuesto inactivador de patógenos es de 50:1 a 200:1.

16. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en el que el tratamiento da como resultado una inactivación de al menos 1 log de un contaminante patógeno en la composición de glóbulos rojos.

17. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, que comprende adicionalmente una etapa final de reducir la concentración del compuesto inactivador de patógenos en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base.

18. El procedimiento de la reivindicación 1, que comprende, en el siguiente orden:

(a) proporcionar i) 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2-cloroetil) amino]etil éster, ii) glutatión neutralizado, y iii) una composición que comprende glóbulos rojos, en la que existe la posibilidad de que la composición de glóbulos rojos esté contaminada con un patógeno;

(b) mezclar el glutatión neutralizado con la composición que comprende glóbulos rojos;

(c) incubar la mezcla de glutatión neutralizado y la composición que comprende glóbulos rojos durante un intervalo de tiempo apropiado; y

(d) mezclar el 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2-cloroetil) amino]etil éster con la mezcla de glutatión neutralizado y la composición que comprende glóbulos rojos, en la que un patógeno, si está presente en la composición que comprende glóbulos rojos, está inactivado por al menos 1 log.

19. Una composición que comprende:

(a) glóbulos rojos;

(b) 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2-[bis (2-cloroetil) amino]etil éster;

(c) glutatión neutralizado como un interruptor, donde el interruptor está a una concentración mayor de 2 mM y la proporción de interruptor con respecto al compuesto inactivador de patógenos es de 20:1 a 200:1, y en la que el glutatión se neutraliza con 0, 5 a 2 equivalentes de base, donde un equivalente se refiere a una cantidad molar que es equivalente a la cantidad molar de interruptor en la mezcla resultante que comprende la composición de glóbulos rojos, el compuesto inactivador de patógenos, el interruptor y la base, y en la que el pH de la composición está en el intervalo de 6, 8 a 8, 5.

20. Un kit, que comprende un compuesto inactivador de patógenos que es 1-alanina, N- (acridin-9-il) , 2[bis (2-cloroetil) amino]etil éster, un interruptor que es glutatión, y al menos de 0, 5 a 2 equivalentes de base, en el que un equivalente se refiere a una cantidad molar que es equivalente a la cantidad molar de interruptor en el kit.

21. El kit de la reivindicación 20, en el que la base comprende al menos 1 equivalente de base.