Perfiles metabólicos.

Un método in vitro para la detección de una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos en un sujeto,

causada por la artritis reumatoide (AR), comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 11, con el fin de producir un perfil metabólico de los N metabolitos endógenos de dicho sujeto;

(ii) comparar los niveles medidos de los N metabolitos endógenos con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida de un control;

en donde los N metabolitos endógenos (EM) son:

EM1 Fenilalanina

EM2 Tirosina

EM3 Isoleucina

EM8 Glicina

EM9 Glutamina

EM10 Metionina

EM14 Lisina

EM15 Asparagina

EM16 Serina

EM17 Triptófano

EM18 Treonina

en donde la alteración en el perfil metabólico es aquella en donde hay una disminución en el nivel de cada uno de los N metabolitos endógenos medidos en la muestra biológica obtenida del sujeto en comparación con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en la muestra biológica obtenida del control, y en donde la alteración en el perfil metabólico es debida a la artritis reumatoide del sujeto .

Perfiles metabólicos La invención se refiere a un método in vitro para la detección de alteraciones en los perfiles metabólicos de metabolitos endógenos en sujetos, que son causadas por la artritis reumatoide. Tales alteraciones se pueden normalizar por tratamiento del sujeto con compuestos especificados, particularmente N- (2-cloro-3, 4dimetoxibencilidenamino) guanidina.

Artritis reumatoide La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune (EA) inflamatoria crónica, que hace que el sistema inmunitario ataque a las articulaciones, lo que produce una situación incapacitante y dolorosa que puede llevar a una pérdida sustancial de movilidad debida a la destrucción de las articulaciones y al dolor asociado (Scott, D. L. et al., Best Pract. Res. Clin. Rheumatol. 21: 943-967 (2007) ) . La etiología de la AR es en gran parte desconocida (Jefferies, W. M., Medical Hypotheses. 51: 111-114 (1998) ; Krishnan, E., Joint Bone Spine. 70: 496-502 (2003) ; Klareskog, L. et al., Artritis and Rheumatism. 54: 38-46 (2006) ) . Es probable que los primeros síntomas sean de artritis inflamatoria indiferenciada (UIA) más que de AR, y que la artritis inflamatoria indiferenciada puede evolucionar hacia la artritis reumatoide (Dixon, W. G. et al., Best Pract. Res. Clin. Rheumatol. 19: 37-53 (2005) ) . La evolución de la artritis inflamatoria se puede dividir en cuatro etapas (Figura 2) .

El diagnóstico precoz es crucial para un tratamiento más efectivo para prevenir el daño irreversible de las articulaciones (Emer y , P., Br. J. Rheumatol. 33: 765-768 (1994) ; van Aken, J. et al., Ann. Rheum. Dis. 63: 274-279 (2004) ; Emer y , P., Br. Med. J. 332: 152-155 (2006) ) . La detección de los pacientes que van a desarrollar la inflamación crónica de las articulaciones ayudaría a identificar a los que necesitan tratamiento y evitar el innecesario tratamiento de aquellos que es menos probable que desarrollen la enfermedad (Emer y , P. et al., Rheumatol. Int. 27: 793-806 (2007) ; Emer y , P. et al., Rheumatology. 47: 392-398 (2008) ) . Por lo tanto existe la necesidad de métodos para diagnosticar la respuesta autoinmune que es artritis inflamatoria indiferenciada antes de que evolucione a artritis reumatoide (Firestein, G. S., Artritis Res. Ther. 7: 157-159 (2005) ) . Trang et al. (Scandinavian Journal of Rheumatology 14 (4) : 393-492 (1985) han demostrado que los pacientes con AR tienen alterados los niveles plasmáticos de aminoácidos. Similarmente, Hernanz et al. (Clinical Biochemistr y 32 (1) : 65-70 (1999) ) demostraron el aumento de los niveles plasmáticos de homocisteína y otros compuestos tioles en mujeres con AR. La medida de las concentraciones de metabolitos endógenos tiene el potencial no sólo de diagnosticar la enfermedad sino de proporcionar también nuevas pistas sobre los mecanismos implicados en la patogénesis. En los ejemplos se demuestra que es posible separar a los sujetos que padecen AR de los sujetos con enfermedades relacionadas y de los voluntarios sanos analizando los datos generados por GC-MS (cromatografía de gases -espectrometría de masas) del plasma sanguíneo, véase la Tabla 3. Esto es crucial para el desarrollo de fármacos que actúan para retrasar o incluso evitar la aparición de la AR.

Tabla 3: Metabolitos de la AR humana Se ha encontrado ahora un conjunto de metabolitos endógenos que identifica a los sujetos con riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmune (EA) . Un perfil de estos metabolitos endógenos del sujeto puede ayudar por tanto en el pronóstico, detección y diagnóstico de la enfermedad autoinmune, que se puede realizar antes de que aparezca ningún síntoma clínico, y esto hace posible que se empiece tempranamente el tratamiento preventivo o profilaxis de manera que se minimice cualquier daño de los tejidos a largo plazo. El perfil de los metabolitos endógenos se puede usar también como un instrumento para el cribado e identificación de fármacos y de nuevas entidades químicas (NCEs) que pueden actuar para restablecer los niveles normales de estos metabolitos endógenos, evitando o retrasando de este modo la aparición de la enfermedad autoinmune y siendo por tanto eficaces en el tratamiento de la enfermedad autoinmune.

Metabolito Dirección en AR Significancia, p

Isoleucina ↓ <0, 001

Glicina ↓ 0, 03

Succinato ↓ <0, 001

Ácido glicérico ↓ <0, 001

Serina ↓ <0, 001

Treonina ↓ <0, 001

Ácido málico ↓ <0, 001

Metionina ↓ 0, 002

Aspartato ↓ <0, 001

Piroglutamato ↓ <0, 001

4-Hidroxiprolina ↓ <0, 001

Ácido treónico ↓ 0, 005

Glutamato ↓ <0, 001

Fenilalanina ↑ 0, 62

Asparagina ↓ <0, 001

Glutamina ↑ 0, 64

Ornitina ↓ <0, 001

Glucosa ↑ <0, 001

Lisina ↓ <0, 001

Tirosina ↓ 0, 001

Triptófano ↓ <0, 001

alfa-tocoferol ↑ <0, 001

Se ha identificado aquí un compuesto que en los ensayos ha demostrado capacidad para restablecer los niveles de metabolitos endógenos y el cual será beneficioso por tanto para prevenir, retrasar o reducir la aparición de enfermedades o trastornos, particularmente los que se creen de origen autoinmune, en muchas de sus formas.

Los términos “biomarcador” y “metabolito endógeno”, y los plurales de los mismos, se utilizan en esta memoria de manera intercambiable.

En una realización, la invención proporciona un método in vitro para la detección de una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos en un sujeto causada por la artritis reumatoide (AR) , comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 11, con el fin de producir un perfil metabólico de los N metabolitos endógenos de dicho sujeto;

(ii) comparar los niveles medidos de los N metabolitos endógenos con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida de un control;

en donde los N metabolitos endógenos (EM) se seleccionan del grupo que consiste en:

EM1 Fenilalanina EM2 Tirosina EM3 Isoleucina EM8 Glicina EM9 Glutamina EM10 Metionina EM14 Lisina EM15 Asparagina EM16 Serina EM17 Triptófano EM18 Treonina en donde la alteración en el perfil metabólico es aquella en donde hay una disminución en el nivel de cada uno de los N metabolitos endógenos medidos en la muestra biológica obtenida del sujeto en comparación con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en la muestra biológica obtenida del control, y en donde la alteración en el perfil metabólico es debida a la artritis reumatoide del sujeto.

La invención proporciona también un método in vitro para la detección de una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos de un sujeto causada por la artritis reumatoide (AR) , comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 11, con el fin de producir un perfil metabólico de los N metabolitos endógenos de dicho sujeto;

(ii) comparar los niveles medidos de los N metabolitos endógenos con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida previamente del sujeto;

en donde los N metabolitos endógenos se seleccionan del grupo que consiste en:

EM1 Fenilalanina EM2 Tirosina EM3 Isoleucina

EM8 Glicina

EM9 Glutamina

EM10 Metionina

EM14 Lisina

EM15 Asparagina

EM16 Serina

EM17 Triptófano

EM18 Treonina

en donde la alteración en el perfil metabólico es aquella en donde hay una disminución en el nivel de cada uno de los N metabolitos endógenos medidos en la muestra biológica obtenida del sujeto en comparación con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en la muestra biológica obtenida previamente del sujeto, y en donde la alteración en el perfil metabólico es debida a la artritis reumatoide del sujeto.

También se describe un método para diagnosticar o detectar la AR en un sujeto, comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N biomarcadores en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 2-11;

(ii) comparar los niveles medidos de los N biomarcadores con los niveles correspondientes de los biomarcadores en una muestra biológica obtenida de un control; en donde los N biomarcadores se seleccionan del grupo que consiste en: EM1 Fenilalanina EM2 Tirosina EM3 Isoleucina EM8 Glicina EM9 Glutamina EM10 Metionina EM14 Lisina EM15 Asparagina EM16 Serina EM17 Triptófano

EM18 Treonina en donde una... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para la detección de una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos en un sujeto, causada por la artritis reumatoide (AR) , comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 11, con el fin de producir un perfil metabólico de los N metabolitos endógenos de dicho sujeto;

(ii) comparar los niveles medidos de los N metabolitos endógenos con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida de un control;

en donde los N metabolitos endógenos (EM) son:

EM1 Fenilalanina EM2 Tirosina EM3 Isoleucina EM8 Glicina EM9 Glutamina EM10 Metionina EM14 Lisina EM15 Asparagina EM16 Serina EM17 Triptófano EM18 Treonina en donde la alteración en el perfil metabólico es aquella en donde hay una disminución en el nivel de cada uno de los N metabolitos endógenos medidos en la muestra biológica obtenida del sujeto en comparación con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en la muestra biológica obtenida del control, y en donde la alteración en el perfil metabólico es debida a la artritis reumatoide del sujeto.

2. Un método in vitro para la detección de una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos en un sujeto, causada por la artritis reumatoide (AR) , comprendiendo el método:

(i) medir los niveles de N metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida del sujeto, en donde N es 11, con el fin de producir un perfil metabólico de los N metabolitos endógenos de dicho sujeto;

(ii) comparar los niveles medidos de los N metabolitos endógenos con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en una muestra biológica obtenida previamente del sujeto;

en donde los N metabolitos endógenos son:

EM1 Fenilalanina EM2 Tirosina EM3 Isoleucina EM8 Glicina EM9 Glutamina EM10 Metionina EM14 Lisina EM15 Asparagina EM16 Serina EM17 Triptófano EM18 Treonina en donde la alteración en el perfil metabólico es aquella en donde hay una disminución en el nivel de cada uno de los N metabolitos endógenos medidos en la muestra biológica obtenida del sujeto en comparación con los niveles correspondientes de los metabolitos endógenos en la muestra biológica obtenida previamente del sujeto;

y en donde la alteración en el perfil metabólico es debida a la AR en el sujeto.

3. Un método para monitorizar la velocidad de empeoramiento o la velocidad de mejora o la velocidad de restablecimiento de un perfil metabólico sano en un sujeto, que comprende un método como se define en la reivindicación 2,

y que adicionalmente comprende la etapa de dividir la disminución de los metabolitos endógenos por el intervalo de tiempo entre la toma de la primera muestra (esto es, la previa) y la segunda muestra del sujeto.

4. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la muestra biológica es un fluido biológico, preferiblemente sangre o fluido sinovial.

5. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el sujeto es un animal de sangre caliente.

6. Un método según la reivindicación 5, en donde el sujeto es un mamífero, preferiblemente un ser humano.

7. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde uno o más de los niveles de los N metabolitos endógenos se miden por medios cromatográficos o espectroscópicos, preferiblemente en donde los métodos cromatográficos o espectroscópicos son espectroscopía de infrarrojos por transformada de Fourier (FT-IR) , espectroscopía de resonancia magnética nuclear (NMR) , cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) , cromatografía de líquidos-espectrometría de masas (LC-MS) o cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS) .

8. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde uno o más de los niveles de los N metabolitos endógenos se miden por técnicas espectroscópicas utilizadas conjuntamente con métodos quimiométricos, preferiblemente en donde el método quimiométrico es análisis del componente principal (PCA) , proyecciones de mínimos cuadrados parciales a estructuras latentes (PLS) , PLS ortogonal (OPLS) , análisis discriminatorio por PLS (PLS-DA) o PLS-DA ortogonal (OPLS-DA) .

9. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde:

(a) uno o más de los metabolitos endógenos se miden tomando una medida de espectroscopía de multi-longitudes de onda; o

(b) uno o más de los metabolitos endógenos se transforman químicamente (esto es, se derivatizan) antes de que sean medidos.

10. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde uno o más de los metabolitos endógenos se miden utilizando reactivos que se unen individualmente a los metabolitos endógenos individuales, y que son detectados entonces.

11. Un método según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde las disminuciones en los niveles de los metabolitos endógenos (entre las muestras del sujeto y del control o entre las muestras del sujeto tomadas a diferentes intervalos de tiempo) son disminuciones significativas.

12. La N- (2-cloro-3, 4-dimetoxibencilidenamino) guanidina, ya sea como base libre o en forma de sal, para uso en el tratamiento de la artritis reumatoide en un sujeto, en donde el sujeto es aquel en que ha sido detectada una alteración en el perfil metabólico de los metabolitos endógenos causada por la artritis reumatoide por un método según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11.