Péptidos de unión a KDR y a VEGF/KDR y su uso en diagnóstico y terapia.

Un agente de contraste para ultrasonidos que comprende una microvesícula conjugada con al menos unpolipéptido que tiene la capacidad de unirse a KDR o al complejo VEGF/KDR que comprende una secuencia deaminoácidos seleccionada de:

AGDSWCSTEYTYCEMIGTGGGK (SEC ID N.º: 4);

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5);

AGVWECAKTFPFCHWFGTGGGK (SEC ID N.º: 6);

AGWVECWWKSGQCYEFGTGGGK (SEC ID N.º: 7);

AGWIQCNSITGHCTSGGTGGGK (SEC ID N.º: 8);

AGWIECYHPDGICYHFGTGGGK (SEC ID N.º: 9);

AGSDWCRVDWYYCWLMGTGGGK (SEC ID N.º: 10);

AGANWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 11);

AGANWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 12);

AGPDWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 13);

AGSNWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 14);

AGPDWCAADWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 15);

AGPEWCEVDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 16);

AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17);

AGSKWCEQDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 18);

AGRNWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 19);

AGVNWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 20);

AGANWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 21);

AGQAWVECYAETGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 22);

AGQAWIECYAEDGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 23);

AGVGWVECYQSTGFCYHSRDGTGGGK (SEC ID N.º: 24);

AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.º: 25);

Péptidos de unión a KDR y a VEGF/KDR y su uso en diagnóstico y terapia

Antecedentes de la invención En el embrión en desarrollo, la principal red vascular se establece mediante diferenciación in situ de las células mesodérmicas en un proceso que se denomina vasculogénesis. No obstante, tras la vasculogénesis embrionaria se cree que toda la posterior generación de nuevos vasos sanguíneos, en el embrión o en adultos, está dirigida por el 10 brote o nacimiento de nuevos capilares en la vasculatura preexistente en un proceso denominado angiogénesis (Pepper, M. y col., 1996. Enzyme Protein, 49: 138-162; Risau, W., 1997. Nature, 386: 671-674) . La angiogénesis no solo está implicada en el desarrollo embrionario y el crecimiento y reparación normal de los tejidos, también está implicada en el ciclo reproductor femenino, establecimiento y mantenimiento del embarazo y en la reparación de heridas y fracturas. Además de la angiogénesis que tiene lugar en el individuo normal, los acontecimientos angiogénicos están implicados en una serie de procesos patológicos, principalmente crecimiento y metástasis tumoral y otras afecciones en la que aumenta la proliferación de vasos sanguíneos, tales como retinopatía diabética, psoriasis y artropatías. La angiogénesis es tan importante en la transición de un tumor desde crecimiento hiperplásico a neoplásico, que la inhibición de la angiogénesis se ha convertido en una terapia activa contra el cáncer (Kim, K. y col., 1993. Nature, 362: 841-844) .

Se piensa que la angiogénesis inducida por tumores depende de la producción de factores de crecimiento proangiogénicos por las células tumorales, que superan otras fuerzas que tienden a mantener a los vasos existentes quiescentes y estables ( (Hanahan, D. y Folkman, J., 1996. Cell, 86: 353-364) . El mejor caracterizado de estos agentes proangiogénicos es el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) (Neufeld, G. y col., 1999. FASEB J.,

13: 9-22) .

El VEGF se produce de forma natural en varios tipos de células en respuesta a hipoxia y algunos otros estímulos. Muchos tumores también producen grandes cantidades de VEGF y/o inducen a las células estromales cercanas para que fabriquen VEGF (Fukumura, D. y col., 1998. Cell, 94: 715-725) . El VEGF, también denominado VEGF-A, se sintetiza como cinco diferentes isoformas de corte y empalme de 121, 145, 165, 189 y 206 aminoácidos. El VEGF121 y el VEGF165 son las formas principales producidas, particularmente en tumores (véase Neufeld, G. y col., 1999, ant.) . El VEGF121 carece de un dominio básico codificado por los exones 6 y 7 del gen de VEGF y no se une a la heparina o a la matriz extracelular, al contrario que el VEGF165.

Los miembros de la familia del VEGF actúan principalmente uniéndose a las tirosina cinasas receptoras. En general, las tirosina cinasas receptoras son glicoproteínas que tienen un dominio extracelular capaz de unirse a uno o más factores de crecimiento específicos, un dominio transmembrana (normalmente una hélice alfa) , un dominio yuxtamembranal (en el que el receptor puede estar regulado mediante, por ejemplo, fosforilación) , un dominio tirosina cinasa (el componente catalítico del receptor) y una cola carboxiterminal, que en muchos receptores, está

implicada en el reconocimiento y unión de los sustratos por la tirosina cinasa. Existen tres tirosina cinasas receptoras específicas de las células endoteliales que se sabe que se unen al VEGF: VEGFR-1 (Flt-1) , VEGFR-2 (KDR o Flk-1) y VEGFR-3 (Flt4) . Flt-1 y KDR se han identificado como los principales receptores de VEGF de alta afinidad. Aunque Flt-1 tiene una mayor afinidad por VEGF, KDR muestra una expresión más abundante en las células endoteliales (Bikfalvi, A. y col., 1991. J. Cell. Physiol., 149: 50-59) . Además, se piensa que el KDR domina la respuesta 45 angiogénica y por tanto, es de mayor interés terapéutico y diagnóstico (véase Neufeld, G. y col., 1999, ant.) . La expresión de KDR está muy regulada por incremento en los vasos angiogénicos, especialmente en tumores que inducen una fuerte respuesta angiogénica (Veikkola, T. y col., 2000. Cancer Res., 60: 203-212) .

El documento WO 99/58162 divulga agentes de contraste para ultrasonidos que se unen a KDR que comprenden un 50 péptido cíclico. Por tanto, estos ligandos son estructuralmente diferentes de los de la presente invención.

KDR está formado por 1336 aminoácidos en su forma madura. Debido a la glucosilación, migra en un gel de SDS-PAGE con un peso molecular aparente de aproximadamente 205 kDa. KDR contiene siete dominios de tipo inmunoglobulina en su dominio extracelular, de los que los primeros tres son los más importantes en la unión a 55 VEGF (Neufeld, G. y col., 1999, ant.) . El propio VEGF es un dímero de omh capaz de unirse a dos moléculas de KDR de forma simultánea. El resultado es que dos moléculas de KDR se han dimerizado tras la unión y se autofosforilan, convirtiéndose en mucho más activas. El incremento de la actividad cinasa a su vez inicia una vía de señalización que media en los efectos biológicos específicos de KDR del VEGF.

A partir de lo anterior, se puede ver que la actividad de unión a VEGF de KDR in vivo no solo es crítica para la angiogénesis sino que la capacidad para detectar regulación por aumento de KDR sobre las células endoteliales o para detectar complejos de unión VEGF/KDR sería extremadamente beneficiosa en la detección o monitorización de la angiogénesis, con particulares aplicaciones diagnósticas tales como detectar el crecimiento de un tumor maligno. También sería beneficioso en aplicaciones terapéuticas, tales como agentes tumoricidas dirigidos o inhibidores de la 65 angiogénesis en un sitio tumoral o dirigiendo KDR, VEGF/KDR, o agonistas de la angiogénesis a un sitio deseado.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a un agente de contraste para ultrasonidos de acuerdo con las reivindicaciones adjuntas útil para detectar y dirigir a receptores primarios sobre las células endoteliales para el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , es decir, el receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR-2, también conocido como región del dominio cinasa (KDR) y cinasa 1 hepática fetal (Flk1) ) y para obtener imágenes y dirigir complejos formados por VEGF y KDR. La implicación de VEGF y KDR en la angiogéneis hace de los polipéptidos de unión VEGF/KDR y KDR de la presente invención particularmente útiles para la obtención de imágenes de importantes sitios de la angiogénesis, por ejemplo tumores neoplásicos.

Se ha descubierto un grupo de polipéptidos que se unen a KDR o al complejo VEGF/KDR (en el presente documento denominados "polipéptidos de unión a KDR" o "restos de unión a KDR" y homólogos de los mismos) . Tales polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR se concentrarán en los sitios de angiogénesis, de modo que proporcionan un medio para detectar y obtener imágenes de sitios de angiogénesis activa, que pueden incluir sitios de crecimiento de tumores neoplásicos. Tales polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR proporcionan nuevos productos terapéuticos para inhibir o estimular, por ejemplo, la angiogénesis. La preparación, uso y rastreo de dichos polipéptidos, por ejemplo como agentes de formación de imágenes o como parejas de fusión para productos terapéuticos de guiado a KDR o a VEGF/KDR se describen con detalle en el presente documento.

En respuesta a la necesidad de materiales y métodos mejorados para detectar, localizar, medir y posiblemente, inhibir afectando, por ejemplo, angiogénesis, los autores de la presente invención han descubierto sorprendentemente siete familias de polipéptidos que no se dan en la naturaleza que se unen específicamente a KDR o al complejo VEGF/KDR. El marcaje adecuado de dichos polipéptidos proporciona agentes de formación de imágenes detectables que se pueden unir a, por ejemplo, una concentración elevada, a células endoteliales que expresan KDR o células que exhiben complejos de VEGF/KDR, proporcionando agentes formación de imágenes específicos de la angiogénesis. Los polipéptidos de unión a KDR y VEGF/KDR de la presente invención pueden usarse así en la detección y diagnóstico de dichos trastornos relacionados con la angiogénesis. La conjugación o fusión de dichos polipéptidos con agentes eficaces tales como inhibidores de VEGF o agentes tumoricidas también se pueden usar para tratar tumores patogénicos, causando, por ejemplo, el conjugado o fusión para “guiar” al sitio de la angiogénesis activa, proporcionando de este modo un medio eficaz para tratar afecciones patogénicas asociadas con la angiogénesis.

Esta invención pertenece a un agente de contraste de ultrasonidos... [Seguir leyendo]

1. Un agente de contraste para ultrasonidos que comprende una microvesícula conjugada con al menos un polipéptido que tiene la capacidad de unirse a KDR o al complejo VEGF/KDR que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de: AGDSWCSTEYTYCEMIGTGGGK (SEC ID N.º: 4) ; AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5) ; AGVWECAKTFPFCHWFGTGGGK (SEC ID N.º: 6) ; AGWVECWWKSGQCYEFGTGGGK (SEC ID N.º: 7) ; AGWIQCNSITGHCTSGGTGGGK (SEC ID N.º: 8) ; AGWIECYHPDGICYHFGTGGGK (SEC ID N.º: 9) ; AGSDWCRVDWYYCWLMGTGGGK (SEC ID N.º: 10) ; AGANWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 11) ; AGANWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 12) ; AGPDWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 13) ; AGSNWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 14) ; AGPDWCAADWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 15) ; AGPEWCEVDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 16) ; AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17) ; AGSKWCEQDWYYCWLLGTGGGK (SEC ID N.º: 18) ; AGRNWCEEDWYYCFITGTGGGK (SEC ID N.º: 19) ; AGVNWCEEDWYYCWITGTGGGK (SEC ID N.º: 20) ; AGANWCEEDWYYCYITGTGGGK (SEC ID N.º: 21) ; AGQAWVECYAETGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 22) ; AGQAWIECYAEDGYCWPRSWGTGGGK (SEC ID N.º: 23) ; AGVGWVECYQSTGFCYHSRDGTGGGK (SEC ID N.º: 24) ; AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.º: 25) ; AGDSWVECDAQTGFCYSFLYGTGGGK (SEC ID N.º: 26) ; AGERWVECRAETGFCYTWVSGTGGGK (SEC ID N.º: 27) ; AGGGWVECRAETGHCQEYRLGTGGGK (SEC ID N.º: 28) ; AGVAWVECYQTTGKCYTFRGGTGGGK (SEC ID N.º: 29) , AGEGWVECFANTGACFTYPRGTGGGK (SEC ID N.º: 30) ; GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31) ; GDDSYCMMNEKGWWNCYLYDPGGGK (SEC ID N.º: 32) ; GDPAQCWESNYQGIFFCDNPDPGGGK (SEC ID N.º: 33) ;

GDGWACAKWPWGGEICQPSDPGGGK (SEC ID N.º: 34) ; GDSSVCFEYSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 104) ; GDSRVCWEYSWGGQICLGYDPGGGK (SEC ID N.º: 105) ; AQQVQYQFFLGTPRYEQWDLDKGGK (SEC ID N.º: 35) ; AQEPEGYAYWEVITLYHEEDGDGGK (SEC ID N.º: 36) ; AQAFPRFGGDDYWIQQYLRYTDGGK (SEC ID N.º: 37) ; AQGDYVYWEIIELTGATDHTPPGGK (SEC ID N.º: 38) ; AQRGDYQEQYWHQQLVEQLKLLGGK (SEC ID N.º: 39) ; AQRSWYLGPPYYEEWDPIPNGGK (SEC ID N.º: 40) ; AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGGK (SEC ID N.º: 41) ; AQAPAWTFGTNWRSIQRVDSLTGGGGGK (SEC ID N.º: 42) ; AQEGWFRNPQEIMGFGDSWDKPGGGGGK (SEC ID N.º: 43) ; AQEGWFRNPQEIMGFGDSWDKPGGGK (SEC ID N.º: 44) ; AQRGDYQEQYWHQQLVEQLKLLGGGK (SEC ID N.º: 45) ; Ac-AGWYWCDYYGIGCK (ivDde) WTGGGK-NH2 (SEC ID N.º: 46) ; Ac-AGWYWCDYYGIGCKWTGTGGGK-NH2 (SEC ID N.º: 47) ; Ac-AQWYYDWFHNQRKPPSDWIDNLGGGK-NH2 (SEC ID N.º: 48) ; Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 49) ; Ac-AGPTWCEDDWYYCWLFGTJK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 50) ; Ac-AQAHMPPWRPVAVDALFDWVEGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 51) ; Ac-AQAHMPPWWPLAVDAQEDWFEGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 52) ; Ac-AQAQMPPWWPLAVDALFDWFEGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 53) ; Ac-AQDWYWREWMPMHAQFLADDWGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 54) ; Ac-AQPVTDWTPHHPK (ivDde) APDVWLFYT-GGGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 55) ; Ac-AQDALEA.PK (ivDde) RDWYYDWFLNHSP-GGGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 56) ; Ac-KWCEEDWYYCMITGTGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 57) ; Ac-AGPKWCEEDWYYCMIGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 58) ; Ac-KWCEEDWYYCMIGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 59) ; Ac-AQPDNWK (ivDde) EFYESGWK (ivDde) -YPSLYK (ivDde) PLGGGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 60) ; Ac-AQMPPGFSYWEQVVLHDDAQVLGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 61) ; Ac-AQARMGDDWEEAPPHEWGWADGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 62) ; Ac-AQPEDSEAWYWLNYRPTMFHQLGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 63) ; Ac-AQSTNGDSFVYWEEVELVDHPGG-GGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 64) ;

Ac-AQWESDYWDQMRQQLK (iv-Dde) TAYMK (iv-Dde) VGGGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 65) ; Ac-AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 66) ; VCWEDSWGGEVCFGGGK (SEC ID N.º: 76) ; GDSRVCWEDSWGGEVCFGGGK (SEC ID N.º: 77) ; SRVCWEDSWGGEVCFRYGGGGK (SEC ID N.º: 79) ; GDSRVCWEDSWGGEVCFRYGGGK (SEC ID N.º: 80) ; DWYYGGGK (SEC ID N.º: 95) ; AQDWYYDEILGRGRGGRGG (SEC ID N.º: 96) ; AGPTWEEDDWYYKWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 90) ; AGPTWKEDDWYYEWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 91) ; AGPTWDprEDDWYYDWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 92) ; AGPTWDEDDWYYDprWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 93) ; y AGPTWDEDDWYYKWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 94) , en las que J es el espaciador o grupo de engarce, 8-amino

3, 6-dioxaoctanoílo y iv-Dde es 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohex-1-iliden) -3-metibutilo.

2. El agente de la reivindicación 1, en el que la microvesícula está conjugada a un compuesto dimérico o multimérico que comprende dos o más polipéptidos que tienen la capacidad de unirse a KDR o al complejo VEGF/KDR.

3. El agente de la reivindicación 1, en el que el agente comprende dos o más polipéptidos y los polipéptidos tienen especificidad por diferentes epítopos en KDR.

4. El agente de la reivindicación 3, en el que los polipéptidos se seleccionan de forma independiente del grupo que consiste en: AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5) ; GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31) ; AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.º: 41) ; AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17) ;

AGDWWVECRVGTGLCYRYDTGTGGGK (SEC ID N.º: 25) ; y Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEQ ID N.º: 49) .

5. El agente de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 4, en el que uno o más de los polipéptidos no incluyen la extensión GGGK C-terminal en su secuencia de aminoácidos.

6. El agente de la reivindicación 4, en el que los polipéptidos comprenden cualquiera de las combinaciones siguientes: AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17) y Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 49) ; AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17) y GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31) ;

AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5) y GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31) ; o

AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.º: 41) y Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 49) .

7. El agente de la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende. AGPKWCEEDWYYCMITGTGGGK (SEC ID N.º: 5) ; AGPTWCEDDWYYCWLFGTGGGK (SEC ID N.º: 17) ; GDSRVCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (SEC ID N.º: 31) ; AQDWYYDEILSMADQLRHAFLSGGK (SEC ID N.º: 41) ; o Ac-VCWEDSWGGEVCFRYDPGGGK (biotina-JJ-) -NH2 (SEC ID N.º: 49) .

8. El agente de la reivindicación 2, en el que la microvesícula está conjugada a un dímero seleccionado del grupo que consiste en D1 (figura 25) , D2 (figura 26) , D3 (figura 27) , D4 (figura 28) , D5 (figura 29) , D6 (figura 50) , D7 (figura 51) , D8 (figura 30) , D9 (figura 31) , D10 (figura 32) , D11 (figura 33) , D12 (figura 34) , D13 (figura 35) , D14 (figura 36) , D15 (figura 37) , D16 (figura 38) , D17 (figura 39) , D18 (figura 40) , D19 (figura 41) , D20 (figura 42) , D21 (figura 43) , D22 (figura 44) , D23 (figura 45) , D24 (figura 46) , D25 (figura 47) , D26 (figura 50) y D27 (figura 51) .

9. El agente de la reivindicación 8, en el que el dímero se selecciona del grupo que consiste en D5 (figura 29) , D6 (figura 50) , D13 (figura 35) y D23 (figura 45) .

10. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el polipéptido está unido a la microvesícula a través de un engarce o espaciador.

11. El agente de la reivindicación 10, en el que dicho engarce o espaciador se selecciona del grupo que consiste en una cadena de alquilo sustituida, una cadena de alquilo insustituida, un derivado de polietilenglicol, un espaciador aminoácídico, un azúcar, un espaciador alifático, un espaciador aromático, una molécula lipídica o combinación de los mismos.

12. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la microvesícula comprende un material formador de microvesículas seleccionado del grupo que consiste en tensioactivos, lípidos, esfingolípidos, oligolípidos, fosfolípidos, proteínas, polipéptidos, hidratos de carbono y materiales poliméricos sintéticos o naturales.

13. El agente de la reivindicación 12, en el que el polipéptido está unido a dicho material formador de microvesículas.

14. El agente de la reivindicación 13, en el que dicho material formador de microvesículas comprende un fosfolípido y el polipéptido está unido a dicho fosfolípido a través de un engarce o espaciador.

15. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la microvesícula se selecciona del grupo que consiste en una microburbuja, un microglobo, una micropartícula o una microesfera.

16. El agente de la reivindicación 15, en el que la microburbuja comprende un fosfolípido.

17. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la microvesícula comprende un gas biocompatible, una mezcla de gases biocompatibles o un precursor de gases.

18. El agente de la reivindicación 17, en el que el gas o la mezcla de gases comprende un gas fluorado.

19. El agente de la reivindicación 17, en el que el gas o la mezcla de gases comprende al menos un gas seleccionado del grupo que consiste en aire; nitrógeno; oxígeno; dióxido de carbono; argón; xenón; criptón; un alcano, cicloalcano, alqueno o alquino de bajo peso molecular; un gas hiperpolarizado, SF6, un freón y un perfluorocarbono.

20. El agente de la reivindicación 17, en el que el gas o la mezcla de gases comprende un gas seleccionado del grupo que consiste en SF6, C3F8, C4F8, C4F10 y C5F12.

21. El agente de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que además comprende un agente terapéutico.

22. Un residuo liofilizado para preparar un agente de contraste para ultrasonidos como se expone en la reivindicación 1, en el que dicho residuo comprende un fosfolípido y al menos uno de los polipéptidos de la reivindicación 1.