Nueva cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei dotada de propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras.

Cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que posee propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras,

caracterizada porque es la cepa depositada en la CNCM bajo el número I-3689.

Nueva cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei dotada de propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras La invención se refiere a una nueva cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei dotada de propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras.

Numerosos estudios científicos han informado sobre los efectos beneficiosos para la salud de ciertos microorganismos presentes en los alimentos fermentados, en particular en los productos lácteos. Estos microorganismos son comúnmente denominados "probióticos". Según la definición generalmente admitida actualmente, los probióticos son "unos microorganismos vivos, que cuando se consumen en cantidades adecuadas, tienen un efecto beneficioso sobre la salud del hospedante" (Informe FAO/OMS sobre la evaluación de las propiedades sanitarias y nutricionales de los probióticos en los alimentos, incluyendo la leche en polvo que contiene unas bacterias lácticas vivas; Cordoba, Argentina; 1-4 de octubre de 2001) .

Se ha demostrado que el consumo de productos alimenticios que contienen bacterias probióticas puede producir efectos favorables sobre la salud, en particular por medio del reequilibrio de la flora intestinal, de la mejora de la resistencia a las infecciones, y de la modulación de la respuesta inmunitaria.

Los microorganismos probióticos utilizados en la alimentación humana son generalmente unas bacterias lácticas, que pertenecen principalmente a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium y, en particular, a la especie Lactobacillus paracasei subespecie paracasei (de la cual se describe una cepa en la solicitud de patente EP0794707) .

Sin embargo, los efectos beneficiosos sobre la salud no son generalmente comunes al conjunto de las bacterias de un mismo género, ni siquiera de una misma especie. Muy a menudo, sólo se encuentran en algunas cepas; además, los efectos observados pueden variar cualitativa y/o cuantitativamente de una cepa probiótica a otra, incluso en el interior de una misma especie.

Para que un microorganismo pueda ser considerado como potencialmente utilizable como probiótico, debe satisfacer al menos uno, e idealmente varios, de los criterios siguientes:

- presentar una actividad inhibidora frente a microorganismos patógenos, que pueden estar presentes en la flora intestinal, pudiendo esta actividad resultar bien de la capacidad para adherirse a las células intestinales, excluyendo

o reduciendo así la adherencia de los patógenos, o bien de la capacidad para producir unas sustancias que inhiben los patógenos, o bien la combinación de estas dos características;

- presentar propiedades inmunomoduladoras, y en particular inmunoestimulantes y/o anti-inflamatorias.

Además, si este microorganismo está destinado a ser incorporado en un producto lácteo, preferiblemente, debe presentar un crecimiento satisfactorio en la leche.

Finalmente, debe conservar una buena viabilidad durante la producción y la conservación del alimento en el que se incorpora, así como después de la ingestión de este alimento por el consumidor, de manera que pueda alcanzar el intestino y sobrevivir en el medio intestinal.

Sin embargo, se debe señalar que a pesar de que la viabilidad sea esencial para responder a la definición actual de "probiótico", se ha demostrado que algunos de los efectos beneficiosos asociados a unas cepas probióticas podían ser obtenidos incluso en ausencia de bacterias vivas, y eran atribuibles a ciertas fracciones bacterianas o a fracciones activas de sus sobrenadantes de cultivo. Por ejemplo, la solicitud PCT WO2004093898 describe una preparación inmunomoduladora obtenida por fraccionamiento del sobrenadante de cultivo de la cepa CNCM I-2219.

Los inventores han conseguido aislar una nueva cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que responde a los criterios indicados anteriormente.

La presente invención tiene por objeto esta cepa, que ha sido depositada según el Tratado de Budapest, en la CNCM (Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos, 25 rue du Docteur Roux, Paris) , el 9 de noviembre de 2006, bajo el número I-3689.

La cepa CNCM I-3689 posee las características siguientes:

- Morfología: microorganismo Gram-positivo, pequeños bacilos finos, aislados o cadenas cortas.

- Fermentación de los azúcares siguientes (resultados obtenidos en una galería api 50 CH - Medio MRS API a 37ºC durante 48h) : ribosa, galactosa, D-glucosa, D-fructosa, D-manosa, manitol, N-acetilglucosamina, arbutina, celobiosa,

maltosa, lactosa, trehalosa, melezitosa, D-turanosa, D-tagatosa, gluconato.

- Presencia de un solo locus CRISPR de secuencia SEC ID nº 1, que contiene una secuencia repetida representada por la secuencia nucleotídica SEC ID nº 2.

Posee, por otra parte, unas propiedades antimicrobianas, que se traducen por una fuerte capacidad para inhibir el crecimiento, en cultivo, de microorganismos patógenos, en particular Escherichia coli, Salmonella enteritidis y Listeria monocitogenes.

Igualmente, la cepa CNCM I-3689 posee unas propiedades inmunomoduladoras, y, en particular, anti-inflamatorias.

La presente descripción tiene igualmente por objeto unas cepas de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, susceptibles de ser obtenidas por mutagénesis o por transformación genética de la cepa CNCM I-3689. Preferiblemente, estas cepas conservan las propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras de la cepa CNCM I-3689. Puede tratarse de cepas en las que uno o varios de los genes endógenos de la cepa CNCM I-3689 ha (n) mutado, por ejemplo a fin de modificar algunas de sus propiedades metabólicas (por ejemplo, la capacidad de esta cepa para metabolizar unos azúcares, su resistencia al tránsito intestinal, su resistencia a la acidez, su post-acidificación, o su producción de metabolitos) . Puede tratarse, igualmente, de cepas que resultan de la transformación genética de la cepa CNCM I-3689 por uno o varios genes de interés, que permiten, por ejemplo, conferir a dicha cepa unas características fisiológicas suplementarias, o expresar unas proteínas de interés terapéutico o vaccíneo, que se desea administrar por medio de dicha cepa.

Estas cepas se pueden obtener a partir de la cepa CNCM I-3689, mediante las técnicas clásicas de mutagénesis aleatoria o dirigida, y de transformación genética de lactobacilos, tales como las descritas, por ejemplo, por GURY y otros (Arch Microbiol., 182, 337-45, 2004) o por VELEZ y otros (Appl Environ Microbiol., 73, 3595-3604, 2007) , o mediante la técnica denominada "mezcla de genomas " (PATNAIK y otros Nat Biotechnol, 20, 707-12, 2002; Wang

Y. y otros, J Biotechnol., 129, 510-15, 2007) . Estas cepas poseen, en particular, un locus CRISPR de la secuencia SEC ID nº 1.

La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de obtención de una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que posee unas propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras, que comprende una etapa de mutagénesis o de transformación genética de la cepa CNCM I-3689.

La presente invención tiene igualmente por objeto un procedimiento de obtención de una fracción celular, que posee unas propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras a partir de una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei conforme a la invención. Se trata, en particular, de preparaciones de ADN o de preparaciones de paredes bacterianas obtenidas a partir de cultivos de dicha cepa. Puede tratarse asimismo de sobrenadantes de cultivo o de fracciones de estos sobrenadantes.

La presente invención tiene igualmente por objeto unas composiciones que comprenden una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei conforme a la invención, o una fracción celular obtenida a partir de ésta.

Estas composiciones pueden ser, en particular, unos fermentos lácticos, que asocian una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei conforme a la invención, con una o varias otras cepas de bacterias lácticas, probióticas o no. A título de ejemplo de cepas de bacterias lácticas, se pueden citar las cepas Lactobacillus bulgaricus y Streptococcus thermophilus.

Puede tratarse igualmente de productos alimenticios y, en particular, de productos lácteos, o de productos farmacéuticos o cosméticos que comprenden una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei conforme a la invención, o una fracción celular obtenida a partir de ésta.

Cuando dicha cepa está presente en forma de bacterias vivas, estas estarán preferentemente presentes a razón de al menos 105 ufc por gramo, ventajosamente al menos 106 ufc por gramo de producto, más ventajosamente al menos 107 ufc por gramo y aún más ventajosamente al menos 108 ufc... [Seguir leyendo]

1. Cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que posee propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras, caracterizada porque es la cepa depositada en la CNCM bajo el número I-3689.

2. Cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que posee propiedades antimicrobianas e inmunomoduladoras, caracterizada porque es susceptible de ser obtenida a partir de una cepa, según la reivindicación 1, por mutagénesis o transformación genética, y porque posee las propiedades antimicronianas e inmunomoduladoras de la cepa CNCM I-3689 y/o posee un locus CRISPR de la secuencia SEC ID nº 1.

3. Procedimiento de obtención de una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, que posee propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras, caracterizado porque comprende una etapa de mutagénesis o de transformación genética de la cepa CNCM I-3689.

4. Procedimiento de obtención de una fracción celular que posee propiedades antimicrobianas y/o inmunomoduladoras, caracterizado porque dicha fracción celular se obtiene a partir de una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque dicha fracción celular se selecciona del grupo constituido por: una preparación de ADN, una preparación de paredes bacterianas, un sobrenadante de cultivo y una fracción de dicho sobrenadante.

6. Composición que comprende una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, o una fracción celular obtenida según el procedimiento definido en cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5.

7. Composición, según la reivindicación 6, caracterizada porque se trata de un producto alimenticio.

8. Composición, según la reivindicación 6, caracterizada porque se trata de un producto farmacéutico.

9. Composición, según la reivindicación 6, caracterizada porque se trata de un producto cosmético.

10. Utilización de una cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, o una fracción celular obtenida según el procedimiento definido en cualquiera de las reivindicaciones 4 ó 5, para la obtención de una composición seleccionada del grupo constituido por un grupo alimenticio, un producto farmacéutico y un producto cosmético.

11. Cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para su utilización como agente inmunomodulador.

12. Cepa de Lactobacillus paracasei subespecie paracasei, según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, para su utilización como agente antimicrobiano.