Mutaciones en EGFR y KRAS para predecir la respuesta de un paciente al tratamiento con inhibidores de EGFR.

Procedimiento para la identificación de un paciente que no es sensible al tratamiento con un inhibidorde EGFR en combinación con un agente quimioterapéutico,

que comprende la determinación in vitro de la presenciao ausencia de una mutación en KRAS y de EGFR natural o mutado en un tumor de dicho paciente, según lo cual, lapresencia simultánea de una mutación en KRAS y de EGFR en dicho tumor indica que el paciente no responderá adicho tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con quimioterapia.

Mutaciones en EGFRy KRAS para predecir la respuesta de un paciente al tratamiento con inhibidores de EGFR.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al diagnóstico y al tratamiento del cáncer y, en particular, a la detección de mutaciones de diagnóstico y/o pronóstico.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es un miembro de la familia de receptores de factores de crecimiento de tirosina-cinasa del tipo 1, que desempeñan papeles críticos en el crecimiento, la diferenciación y la supervivencia celulares. Típicamente, la activación de estos receptores tiene lugar por medio de una unión a ligandos específicos, lo que resulta en una hetero u homodimerización entre miembros de la familia de receptores, con la subsiguiente autofosforilación del dominio de tirosina-cinasa. Esta activación desencadena una cascada de rutas de señalización intracelular implicadas en la proliferación celular (la ruta de la cinasa de ras/raf/MAP) y en la supervivencia (la ruta de la cinasa de PI3/Akt) . A algunos miembros de esta familia, incluidos EGFR y HER2, se les atribuye una participación directa en la transformación celular.

Algunos tumores malignos están asociados con una expresión aberrante o excesiva de EGFR y/o una expresión excesiva de sus ligandos específicos, p. ej., el factor de crecimiento transformante a (Gullick, Br Med Bull 1991, 47: 87 – 98; Modijtahedi y Dean, Int J Oncol 1994, 4: 277 – 96; Salomon y col., Crit Rev Oncol Hematol 1995,

19: 183 – 232) . La expresión excesiva de EGFR se ha asociado con un pronóstico adverso en algunos cánceres humanos, incluido NSCLC. En algunos casos, la expresión excesiva de EGFR en tumores se ha correlacionado a la vez con quimiorresistencia y un mal pronóstico (Lei y col., Anticancer Res 1999, 19: 221 – 8; Veale y col., Br J Cancer 1993, 68: 162 – 5) . Estas observaciones sugieren que los agentes que inhiben eficazmente la activación del receptor EGFR y la subsiguiente señalización posterior pueden tener actividad clínica en diversos cánceres humanos, incluido NSCLC.

TarcevaTM (también conocida como erlotinib; OSI-774) , una quinazolina, es un potente inhibidor selectivo de la tirosina-cinasa de EGFR, activo por vía oral. Erlotinib inhibe la tirosina-cinasa del EGFR humano con una CI50 de 2 nM (0, 786 mg/ml) en un ensayo enzimático in vitro. Esta inhibición es selectiva para la tirosina-cinasa de EGFR, resulta en una parada del ciclo celular en la fase G1 y es reversible. La administración de erlotinib por vía oral a ratones ha demostrado una reducción superior al 70 % de la autofosforilación de EGFR en xenoinjertos humanos y se ha demostrado una notable inhibición del crecimiento de los xenoinjertos HN5 y A431 en ratones sin pelo. Además de su actividad como agente único en sistemas de ensayo in vivo, erlotinib se ha evaluado en combinación con varios agentes quimioterapéuticos para determinar posibles interacciones. Una interacción aditiva se ha observado entre erlotinib y paclitaxel, cisplatino, gemcitabina y doxorrubicina.

El cáncer de pulmón es la causa principal de mortalidad relacionada con el cáncer, tanto para hombres como mujeres en los Estados Unidos. En el año 2000 se estimó que se diagnosticarían 164.000 nuevos casos y que 157.000 pacientes morirían a causa de esta enfermedad (Greenlee y col., CA Cancer J Clin 2001, 51: 15 – 36) . Aproximadamente el 75 % de estos pacientes habrían tenido histologías no microcíticas y la mayoría se presentaría con los estadios inoperables IIIB o IV de la enfermedad. Para aquellos pacientes con una enfermedad más limitada en el momento de la presentación (estadios I – IIIA) , es común una recaída después de un tratamiento quirúrgico estándar con o sin quimio y/o radioterapia adyuvante o neoadyuvante. Estos resultados dan lugar a una supervivencia general en cinco años en el cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) de aproximadamente el 12 % y sirven para resaltar las necesidades médicas aún no satisfechas en esta enfermedad.

El compuesto de platino cisplatino fue el primer agente quimioterapéutico en mostrar un beneficio clínico en el tratamiento del NSCLC avanzado localmente o metastásico. Ensayos clínicos aleatorizados demostraron una mejora en las tasas de respuesta, en la calidad de vida y en la supervivencia, en comparación con el mejor tratamiento de apoyo (Rapp y col. 1988) . Sin embargo, la magnitud de esta mejora fue moderada, medida en semanas. Por consiguiente, se han evaluado varios agentes quimioterapéuticos nuevos como agentes únicos y en combinación con las sales de platino para el tratamiento de primera línea. La conclusión de estos estudios es que la moderna quimioterapia de “doblete” parece alcanzar tasas de respuesta del 15 – 20 %, una mediana del tiempo hasta la progresión de la enfermedad de 3 – 4 meses y una mediana de la supervivencia de 7 – 8 meses. Las mejoras moderadas de la eficacia con tratamientos combinados con respecto a los resultados obtenidos con cisplatino han establecido estos tratamientos como tratamientos de referencia para los pacientes con NSCLC avanzado y un estado general aceptable (Non-Small Cell Lung Cancer Cooperative Group, Br Med J 1995, 311: 899

– 909; American Society of Clinical Oncology, J Clin Oncol 1997, 15: 2996 – 3018; Breathnach y col., J Clin Oncol 2001, 19: 1734 – 42) .

Pao W., y col. (KRAS mutations and primar y resistance of lung adenocarcinomas to gefitinib or erlotinib. PLOS MEDICINE. vol. 2, n°. 1, enero de 2005 (2005 – 01) , página e17) desvelan que mutaciones en KRAS están asociadas con una falta de sensibilidad a gefinitib o erlotinib, mientras que mutaciones en EGFR están asociadas con sensibilidad a dichas moléculas y proponen mejorar las decisiones sobre el tratamiento mediante la determinación del estado mutacional de ambos, EGFR y KRAS.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona un procedimiento para la identificación de un paciente que no es sensible al tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con un agente quimioterapéutico y un procedimiento para determinar si un tumor responderá al tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con un agente quimioterapéutico, ambos según se definen en las reivindicaciones.

La invención proporciona también un inhibidor de EGFR para uso en un procedimiento para el tratamiento de un tumor, también según se define en las reivindicaciones.

En este documento se desvela un procedimiento para la identificación de un tumor sensible al tratamiento en un sujeto humano que comprende la determinación de la presencia de un gen EGFR mutado o una proteína EGFR mutada en una muestra de dicho tumor, en que dicha mutación se localiza en los exones 18 – 21 de EGFR, según lo cual, la presencia de un gen EGFR mutado o una proteína EGFR mutada indican que el tumor es sensible al tratamiento.

En este documento se desvela un procedimiento para el tratamiento de un tumor en un mamífero que comprende la identificación de la presencia de una mutación en EGFR en dicho tumor y el tratamiento de dicho mamífero con un agente contra el cáncer.

En este documento se desvela un procedimiento para la identificación de una mutación en EGFR en una muestra que comprende la puesta en contacto de un ácido nucleico de dicha muestra con una sonda que es capaz de hibridar específicamente con el ácido nucleico que codifica una proteína EGFR mutada o un fragmento de este que incorpora una mutación y la detección de la hibridación.

En este documento se desvelan sondas de ácido nucleico capaces de hibridar específicamente con un ácido nucleico que codifica una proteína EGFR mutada o un fragmento de este que incorpora una mutación.

En este documento se desvela un procedimiento para la detección de un gen EGFR mutado en una muestra que comprende la amplificación del ácido nucleico de dicha muestra correspondiente al dominio de cinasa de dicho gen EGFR o a un fragmento de este del que se sospecha que contiene una mutación y la comparación de la movilidad electroforética del ácido nucleico amplificado con la movilidad electroforética del correspondiente gen EGFR natural o fragmento de este.

En este documento se desvela un procedimiento para la identificación en un sujeto humano de un tumor sensible al tratamiento con un inhibidor de EGFR que comprende (i) la determinación de la presencia de una proteína o un gen KRAS naturales en una muestra de dicho tumor, según lo cual, la presencia de una proteína o un gen KRAS naturales indica que el tumor es sensible al tratamiento con un inhibidor... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la identificación de un paciente que no es sensible al tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con un agente quimioterapéutico, que comprende la determinación in vitro de la presencia o ausencia de una mutación en KRAS y de EGFR natural o mutado en un tumor de dicho paciente, según lo cual, la presencia simultánea de una mutación en KRAS y de EGFR en dicho tumor indica que el paciente no responderá a dicho tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con quimioterapia.

2. Procedimiento para determinar si un tumor responderá al tratamiento con un inhibidor de EGFR en combinación con un agente quimioterapéutico, que comprende la determinación de la presencia de EGFR natural o mutado y un KRAS mutante en una muestra de dicho tumor, según lo cual, la presencia simultánea de EGFR y una proteína o gen KRAS mutantes indica que el tumor no responderá al tratamiento con un inhibidor de EGFR.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en que dicha mutación en KRAS es una mutación activadora.

4. Procedimiento según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en que dicha mutación en KRAS es al menos una de entre G12C, G12A, G12D, G12R, G12S, G12V, G13C y G13D.

5. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dicho inhibidor de EGFR es uno o más de entre cetuximab, panitumumab, erlotinib o gefitinib.

6. Procedimiento según la reivindicación 5, en que dicho inhibidor de EGFR es erlotinib.

7. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que dicho agente quimioterapéutico es uno o más de entre citarabina, fludarabina, 5-fluoro-2’-desoxiuridina, gemcitabina, hidroxiurea, metotrexato, bleomicina, clorambucilo, cisplatino, ciclofosfamida, doxorrubicina, mitoxantrona, camptotecina, topotecán, tenipósido, colcemida, colchicina, paclitaxel, vinblastina, vincristina o tamoxifeno.

8. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho agente quimioterapéutico es carboplatino y/o paclitaxel.

9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el EGFR es EGFR natural.

10. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el EGFR es EGFR mutado.

11. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la presencia de EGFR se determina por inmunohistoquímica.

12. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la presencia de una mutación en KRAS se determina mediante la amplificación de un ácido nucleico de KRAS a partir de dicho tumor o de un fragmento del mismo, del que se sospecha que contiene una mutación, y la secuenciación de dicho ácido nucleico amplificado.

13. Procedimiento según una cualquiera de la reivindicaciones 1 a 11, en el que la presencia de una mutación en KRAS se determina mediante la amplificación de un ácido nucleico de KRAS a partir de dicho tumor o de un fragmento del mismo, del que se sospecha que contiene una mutación, y la comparación de la movilidad electroforética del ácido nucleico amplificado con la movilidad electroforética del correspondiente ácido nucleico o fragmento de KRAS natural.

14. Procedimiento según la reivindicación 1 o según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 13, como dependientes de ésta, en el que la presencia simultánea de una mutación en KRAS y de EGFR indica que se espera una menor supervivencia para el paciente si se le trata con un inhibidor de EGFR en combinación con quimioterapia que si se le trata solamente con quimioterapia.

15. Inhibidor de EGFR para uso en un procedimiento para el tratamiento de un tumor en combinación con quimioterapia, en el que el tratamiento está contraindicado para tumores que contienen simultáneamente una

mutación en KRAS y EGFR.

16. Inhibidor de EGFR para uso en un procedimiento para el tratamiento de un tumor en combinación con quimioterapia de acuerdo con la reivindicación 15, que es uno o más de entre cetuximab, panitumumab, erlotinib o 5 gefitinib.

17. Inhibidor de EGFR para uso en un procedimiento para el tratamiento de un tumor en combinación con quimioterapia de acuerdo con la reivindicación 16, que es erlotinib.