Moduladores de pequeñas moléculas de la actividad de TRP-P8.

Compuesto de fórmula I-E:**Fórmula**

en la que A, B, C, y D se seleccionan independientemente de entre CR1 y N;

en la que al menos uno de A, B, C,y D es CR1; en la que R1 se selecciona de entre H, alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, halógeno; y en la que,cuando dos adyacentes de A, B, C, y D son CR1, los dos R1 se pueden combinar para formar un único grupoarilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo;

R2 se selecciona de entre alquilo, heteroalquilo y arilalquilo;

R3 se selecciona de entre H, alquilo, heteroalquilo, y arilalquilo; y

R2 y R3, junto con el grupo nitrógeno, forman una amina alifática.

Moduladores de pequeñas moléculas de la actividad de TRP-P8

Referencias cruzadas a solicitudes relacionadas Esta solicitud reivindica los derechos de prioridad de la solicitud de patente provisional US nº 60/773.435, presentada el 15 de febrero de 2006.

Antecedentes de la invención La presente invención se refiere generalmente a los campos de biología celular, bioquímica, y química orgánica. Más particularmente, la presente invención proporciona moduladores de pequeñas moléculas de la actividad de Trpp8, que incluye agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8, así como a composiciones que comprenden moduladores de Trp-p8 de pequeñas moléculas. También se proporcionan procedimientos para identificar y caracterizar nuevos moduladores de Trp-p8 de pequeñas moléculas, así como compuestos para su utilización en procedimientos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresión, activación y/o señalización de Trpp8. Las enfermedades ejemplificativas tratadas adecuadamente por las composiciones y compuestos de la presente invención incluyen cánceres, tales como cánceres de pulmón, de mama, de colon, y/o de próstata.

Antecedentes de la invención El carcinoma de próstata es el cáncer más habitual diagnosticado en hombres en los Estados Unidos de América, y tiene la segunda tasa de mortalidad por cáncer más elevada, cediendo únicamente ante el adenocarcinoma pulmonar. Parker et al., CA Cancer J. Clin. 46:5-27 (1996) . Aunque es posible tratar eficazmente cáncer de próstata confinado en el órgano, existen opciones de tratamiento muy limitadas para la enfermedad metastásica. De este modo, es de gran importancia encontrar nuevas formas de diagnosticar la enfermedad en la etapa temprana y monitorizar cuidadosamente tanto la progresión como el tratamiento de la enfermedad, así como desarrollar nuevos enfoques terapéuticos. Para lograr esto, es importante comprender los mecanismos moleculares del desarrollo del cáncer de próstata e identificar nuevos marcadores bioquímicos para el diagnóstico y progresión de la enfermedad.

Actualmente se dispone muy pocos marcadores específicos para la próstata. Los marcadores mejor conocidos y bien caracterizados de valor de diagnóstico probado para el cáncer de próstata son las proteínas ácido prostático fosfatasa (PAP) , antígeno específico de la próstata (PSA) , y antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) . Cada una de estas proteínas también se ha convertido en la diana para nuevos enfoques inmunoterapéuticos para el tratamiento de la enfermedad. Horoszewicz et al., Anticancer Res. 7:927-935 (1987) ; Barren et al., Prostate 30:65-68 (1997) ; Murphy et al., Prostate 33:281-285 (1997) ; Murphy et al., Prostate 26:164168 (1995) ; Rochon et al., Prostate 25:219-223 (1995) ; Correale et al., J. Immunol. 161:3186-3194 (1998) ; y Murphy et al., Prostate 38:73-78 (1999) .

Se ha dado a conocer que una proteína de canales catiónicos, denominada de forma diversa Trp-p8 (potencial del receptor transitorio-p8) , TRPM8, y CMR1 (receptor 1 de frío y de mentol) , se expresa preferentemente en la próstata. La clonación de ADNc de Trp-p8 humano de longitud completa reveló un transcrito que corresponde a un polipéptido de 1104 aminoácidos que comparte homología con la familia trp de canales de calcio. Clapham et al., Nature Reviews 2: 387-396 (2001) y Clapham et al., IUPHAR Compendium, TRP Channels (2002) . Trp-p8 muestra homología particularmente elevada con el gen TRPC7 humano – una proteína putativa del canal de Ca2+ de la familia trp que está muy expresada en el tejido cerebral. Nagamine et al., Genomics 54: 124-131 (1998) . Trp-p8 también muestra homología significativa con melastatina humana, otra proteína relacionada con la familia Trp expresada en melanocitos y que se cree que es un gen supresor de tumores. Duncan et al., Cancer Res. 58: 15151520 (1998) y Hunter et al., Genomics 54: 116-123 (1998) . Quizás el mayor interés es la observación de que el gen Trp-p8 parece estar expresado en un gran espectro de lesiones neoplásicas no prostáticas, además de prostáticas. Tsavaler et al., Cancer Res. 61 (9) : 3760-9 (2001) .

La superfamilia Trp comprende más de 20 proteínas de canales de calcio relacionadas que se han visto implicadas en procesos que incluyen fisiología sensorial a vasorrelajación y fertilidad masculina. Los defectos en los canales de Trp se han asociado con cambios en el control del crecimiento y supresión de tumores. Mientras que todas las proteínas de Trp son canales de calcio, varían significativamente en su selectividad y modo de activación. Los miembros de la superfamilia Trp comparten una homología de secuencia significativa y similitudes estructurales predichas, tales como tamaño de segmentos transmembranarios predichos.

El Trp-p8 está sobreexpresado en un abanico de cánceres, incluyendo de próstata, de mama, pulmonar y de colon, mientras que, en tejidos normales, está expresada predominantemente en la próstata humana [Tsavaler et al., más arriba] y ganglios de la raíz dorsal (DRG) , (Dendreon, observación no publicada) . Fuessel et al. dio a conocer que Trp-p8 es un gen muy específico de la próstata y asociado con carcinoma de próstata, clasificándolo así como una diana potencial para terapias específicas. International J. of Oncology 23: 221-228 (2003) . Entre otras especies, se da a conocer que los ortólogos de Trp-p8 se expresan en un subconjunto de DRG y neuronas de ganglios trigeminales (TG) en rata [McKemy et al., Nature 416 (6876) : 52-8 (2002) ] y ratón [Peier et al., Cell 108 (5) : 705-15 (2002) ] igualmente. De este modo, el Trp-p8 es un marcador expresado en todos los tumores, con uso potencial significativo en el diagnóstico de la enfermedad y monitorización de la progresión de la enfermedad durante el tratamiento, así como una diana viable para la terapia contra el cáncer.

La asociación de Trp-p8 con los cánceres de próstata, pulmonar, de mama, y de colon, y los diversos papeles importantes que ejerzan los canales iónicos en funciones celulares vitales sugieren que el canal de Trp-p8 puede tener una función significativa en la señalización y/o proliferación de células cancerosas. La modulación de la actividad de Trp-p8, ya sea mediante activación vía un agonista, o mediante inhibición vía un antagonista, a una temperatura fisiológica, puede ser valiosa como un terapéutico para modular de manera específica las células que expresan Trp-p8. Véase, por ejemplo, la solicitud de patente US 10/923.413. El documento WO 2005/020897 describe composiciones y procedimientos para el tratamiento de enfermedades asociadas con la expresión de Trpp8.

En consecuencia, continúa existiendo la necesidad en la técnica de moduladores de pequeñas moléculas de la actividad de Trp-p8, composiciones que comprendan uno o más moduladores de Trp-p8 de pequeñas moléculas, y métodos para la identificación y uso de pequeñas moléculas para modular la actividad de Trp-p8 en una célula y para el tratamiento de la enfermedad asociada con la expresión aberrante de Trp-p8.

Breve sumario de la invención La presente invención satisface estas y otras necesidades relacionadas al proporcionar moduladores de pequeñas moléculas de la actividad de Trp-p8, incluyendo agonistas de Trp-p8 y antagonistas de Trp-p8, así como composiciones que comprenden tales moduladores de Trp-p8, y procedimientos para identificar y usar moduladores 25 de Trp-p8. Dentro de ciertas formas de realización, los compuestos de la presente invención se unen a y activan Trpp8 y/o estimulan el influjo catiónico, incluyendo, pero sin limitarse a, influjo de calcio, en una célula en la que el influjo de calcio se correlaciona con la toxicidad inducida por el modulador de Trp-p8. De este modo, en estas y otras formas de realización, los agonistas de Trp-p8 de la presente invención son eficaces inhibiendo el crecimiento de y/o induciendo apoptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8. En las formas de realización alternativas se proporcionan antagonistas de Trp-p8 que son eficaces reduciendo la actividad basal de Trp-p8 en una célula, reduciendo de ese modo la viabilidad de células que expresan Trp-p8. Por lo tanto, ventajosamente, los agonistas y antagonistas de la presente invención se pueden usar para tratar enfermedades que comprenden de manera no limitativa, cánceres de mama, pulmón, colon y/o próstata, que están asociados con la expresión de Trp-p8.

Uno o más moduladores de Trp-p8 se pueden formular en composiciones, incluyendo composiciones farmacéuticas, que comprenden uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables y/o uno o más compuestos terapéuticos adicionales. Tales composiciones encontrarán utilidad en procedimientos... [Seguir leyendo]

1. Compuesto de fórmula I-E:

en la que A, B, C, y D se seleccionan independientemente de entre CR1 y N; en la que al menos uno de A, B, C, y D es CR1; en la que R1 se selecciona de entre H, alquilo, heteroalquilo, arilo, arilalquilo, halógeno; y en la que, cuando dos adyacentes de A, B, C, y D son CR1, los dos R1 se pueden combinar para formar un único grupo arilo, cicloalquilo o heterocicloalquilo;

R2 se selecciona de entre alquilo, heteroalquilo y arilalquilo;

R3 se selecciona de entre H, alquilo, heteroalquilo, y arilalquilo; y

R2 y R3, junto con el grupo nitrógeno, forman una amina alifática.

2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es –ORi, –SRii, -S (O) Riii, -S (O) 2Riv, -C (O) NRvRvi, CF3, halógeno, o metoxi, en el que Ri, Rii, Riii, y Riv se seleccionan independientemente de entre metilo, hidroximetilo,

etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, acetonitrilo, fenilo, fenilmetoxi, feniletoxi, fenilpropoxi, fenilbutoxi, y bencilo, en el que Rv y Rvi se seleccionan independientemente de entre H, metilo, hidroximetilo, etilo, hidroxietilo, propilo, hidroxipropilo, butilo, hidroxibutilo, dietilaminoetilo, fenilo, piridinilo, metoxietilo, hidroxietoxietilo, bencilo, metilfenilo, feniletilo, hidroxihidroximetilfeniletilo, carbamoilmetilo, e hidroximetilhidroxietilo, o Rv y Rvi forman juntos morfolina, piperazina, éster etílico de piperazina.

3. Compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es 3- (2-aminoetil) -1- (2-isopropil-5-metilciclohexano-carbonil) -5-metoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona.

4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es H. 30

5. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es metoxi.

6. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R2 es seleccionado de entre metileno, etileno, propileno, o

butileno. 35

7. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R3 es H.

8. Compuesto según la reivindicación 1, en el que el resto:

se selecciona de entre el grupo que consiste en 3- (2-amino-etil) -5-metoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2amino-etil) -5- (3-hidroxi-propoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-etoxi-1, 3-dihidrobenzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5-metanosulfonil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5- (2

hidroxi-etoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-etil) -5-metilsulfanil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -5metanosulfinil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, (2-dietilamino-etil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-propil) -2, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, [3- (2-amino-etil) -2ºxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-iloxi]-acetonitrilo, etilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico, piridin-3-ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5carboxílico, (2-metoxi-etil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, 1 (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-nafto[2, 3-d]imidazol-2-ona, (2-hidroxietil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-etil) -5propoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo[4, 5-c]piridin-2-ona, (2-dietilaminoetil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-4-carboxílico, piridin-4-ilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo[4, 5b]piridin-2-ona, 1- (3-amino-propil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, fenilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, [2- (2-hidroxi-etoxi) -etil]-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, 1- (2-amino-etil) -5-trifluorometil-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 1- (2amino-etil) -1, 3-dihidro-imidazo[4, 5-c]piridin-2-ona, bencilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico, 3- (2-amino-etil) -5- (morfolin-4-carbonil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-aminoetil) -5- (2-oxo-2-fenil-etoxi) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, 3- (2-metilamino-etil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2ºna, 3- (2-amino-etil) -5-butoxi-1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona, metil-fenil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5-carboxílico, éster etílico del ácido 4-[3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carbonil]-piperazin-1-carboxílico, dietilamida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico, fenetil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol-5carboxílico, (2-hidroxi-1-hidroximetil-2-fenil-etil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1Hbenzoimidazol-5-carboxílico, carbamoilmetil-amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol5-carboxílico, (2-hidroxi-1-hidroximetil-etil) -amida del ácido 3- (2-amino-etil) -2-oxo-2, 3-dihidro-1H-benzoimidazol5-carboxílico, N-{2-[2-oxo-2, 3-dihidro-benzoimidazol-1-il]-etil}-guanidina, 3- (2-aminoetil) -5-benciloxi-1, 3-dihidrobenzoimidazol-2-ona, y 1- (4-amino-butil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona.

9. Compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es la 1- (2-aminoetil) -3- (2-isopropil-5-metilciclohexanocarbonil) -1, 3-dihidro-benzoimidazol-2-ona.

10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en forma aislada y purificada.

11. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su utilización para disminuir la viabilidad celular y/o inhibir el crecimiento celular, inducir apoptosis y/o necrosis en una célula que expresa Trp-p8, modular la función del receptor de Trp-p8, o el diagnóstico o terapia médicos.

12. Compuesto para su utilización según la reivindicación 11, en el que la terapia médica se selecciona de entre el grupo que consiste en tratar una enfermedad o afección en un mamífero en la que está indicado un receptor de Trpp8 y se desea la modulación de la función del receptor, tratar una enfermedad asociada con la expresión de Trp-p8, y tratar cáncer.

13. Compuesto para su utilización según la reivindicación 12, en el que dicho mamífero es un ser humano.

14. Compuesto para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, en el que la terapia médica es tratar el cáncer.

15. Compuesto para su utilización según la reivindicación 14, en el que el cáncer es cáncer de próstata, pulmón, mama y colon.

16. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o sus combinaciones, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

17. Composición farmacéutica según la reivindicación 16, que comprende además un vehículo o agente farmacéuticamente aceptable.

18. Procedimiento para identificar un agonista de Trp-p8, comprendiendo dicho procedimiento la etapa de poner en contacto una célula que expresa Trp-p8 y una célula que no expresa Trp-p8 con un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 in vitro durante un tiempo y en una cantidad suficiente para disminuir la viabilidad de dicha célula que expresa Trp-p8 pero no de dicha célula que no expresa Trp-p8.