Procedimiento para la preparación de mezclas de acetato de trifluoroacetilglatirámero usando ácido bromhídrico purificado.

Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero,

en el que la mezcla tiene unpeso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos,cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con unasolución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácidobromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0,1 % de bromo libre.

Procedimiento para la preparación de mezclas de acetato de trifluoroacetilglatirámero usando ácido bromhídrico purificado Antecedentes de la invención Una mezcla de polipéptidos que no tienen todos la misma secuencia de aminoácidos referidos como acetato de glatirámero (GA) se comercializa con el nombre comercial Copaxona® y comprende las sales de acetato de polipéptidos que contienen ácido L-glutámico, L-alanina, L-tirosina y L-lisina en fracciones molares promedio de 0, 141, 0, 427, 0, 095 y 0, 338, respectivamente. El peso molecular promedio de Copaxona® está entre 4.700 y 11.000 daltons. ("Copaxone", Physician's Desk Reference, (2000) , Medical Economics Co., Inc., (Montvale, NJ) , 3115) . Químicamente, acetato de glatirámero se designa polímero de ácido L-glutámico con L-alanina, L-lisina, L-tirosina, acetato (sal) . Su fórmula estructural es:

(Glu, Ala, Lys, Tyr) x ·χCH3COOH

(C5H9NO4 · C3H7NO2 · C6H14N2O2 · C9H11NO3) x · χC2H4O2

CAS -147245-92-9

("Copaxone", Physician's Desk Reference, (2000) , Medical Economics Co., Inc., (Montvale, NJ) , 3115) .

El acetato de glatirámero está aprobado para reducción de la frecuencia de recaídas en pacientes con esclerosis múltiple remitente que provoca recaídas. La esclerosis múltiple se ha clasificado como una enfermedad autoinmune. El acetato de glatirámero también se ha descrito para usar en el tratamiento de otras enfermedades autoinmunes (documento WO-A-2003040809) , enfermedades no autoinmunes inflamatorias (Publicación N.º: US 2005/0014694 A1 por V. Wee Yong y cols., y Solicitud de Patente de los Estados Unidos N.º: 2002/0077278 A1, publicada el 20 de junio de 2002 (Young y cols.) ) y para promover la regeneración neural y/o para evitar o inhibir degeneración secundaria que puede seguir a daño principal del sistema nervioso (Publicación N.º: US 2003/0004099 A1 por M. Eisenbach-Schwartz y cols., y Solicitud de Patente de los Estados Unidos N.º: 2002/0037848 A1, publicada el 28 de marzo de 2002 (Eisenbach-Schwartz) ) . Además, el acetato de glatirámero se ha revelado como un tratamiento para enfermedades mediadas por el sistema inmune (por ejemplo, Patente de los Estados Unidos N.º: 6.514.938 B1, publicada el 4 de febrero de 2003 (Gad y cols.) ; Publicación Internacional PCT N.º WO 01/60392, publicada el 23 de agosto de 2001 (Gilbert y cols.) ; y Publicación Internacional PCT N.º: WO 00/27417, publicada el 19 de mayo de 2000 (Aharoni y cols.) , así como enfermedades asociadas con desmielinización (Publicación Internacional PCT N.º WO-1/97846, publicada el 27 de diciembre de 2001/ (Moses y cols.) .

El procedimiento de fabricación como se detalla en las patentes anteriores implica hacer reaccionar polipéptidos protegidos con ácido bromhídrico al 33 % en ácido acético. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Esta reacción de desprotección elimina el grupo protector de bencilo en gamma del 5-carboxilato del residuo de glutamato y escinde el polímero a polipéptidos menores para formar un trifluoroacetilpolipéptido. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . El tiempo necesario para obtener GA del peso molecular promedio apropiado de entre 7.000 ± 2.000 daltons depende de la temperatura de reacción y del perfil de peso molecular del acetato de glatirámero protegido. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . La desprotección ocurre a una temperatura de entre 20 °C y 28 °C (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Una prueba de la reacción se lleva a cabo en cada lote a diferentes periodos de tiempo para determinar el tiempo de reacción necesario a una temperatura dada para lograr trifluoroacetilpolipéptidos de un perfil de peso molecular apropiado. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.981.589, concedida el 9 de noviembre de 1999 a Konfino y cols.) La cantidad de tiempo necesaria para los intervalos de reacción, por ejemplo, entre 10 y 50 horas. (Patente de los Estados Unidos N.º: 5.800.808, concedida el 1 de septiembre de 1998 a Konfino y cols.) . Además, las Patentes de los Estados Unidos N.ºs: 5.981.589, 6.048.898, 6.054.430, 6.342.476, 6.362.161 y 6.620.847, también se refieren a composiciones y procedimientos para elaboración de mezclas de polipéptidos, incluyendo GA.

Esta invención proporciona un procedimiento de fabricación mejorado.

Sumario de la invención La invención objeto proporciona un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 1 % de bromo libre.

La invención objeto también proporciona un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado y en el que durante el

procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 500 ppm de impurezas iónicas metálicas.

La invención objeto proporciona además procedimiento de producir una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado que comprende desproteger una mezcla de polipéptidos que consta cada uno de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 500 ppm de impurezas de iones metálicos.

También se revela en el presente documento una composición que comprende el producto de trifluoroacetilo producido por uno cualquiera de los procedimientos de la invención objeto y un vehículo.

La invención objeto proporciona adicionalmente una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en la que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, no más de 0, 1% de tirosina bromada y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos. También se revela en el presente documento una composición que comprende la mezcla de trifluoroacetil y un vehículo.

La presente invención también proporciona procedimiento para obtener una composición farmacéutica que contiene una mezcla de acetato de glatirámero y en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, que comprende a) polimerizar N-carboxianhídridos de tirosina, alanina, γ-bencilglutamato y N-trifluoroacetil-lisina para formar una mezcla de polipéptidos protegidos;

b) desproteger los polipéptidos protegidos con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, la solución comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos para formar

una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos;

c) hacer reaccionar la mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos con piperidina acuosa para formar una solución de mezcla acuosa de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y lisina; y

d) purificar la mezcla de polipéptidos.

La invención expuesta proporciona adicionalmente procedimiento de producir acetato de glatirámero, que comprende las etapas de:

a) polimerizar N-carboxianhídridos de tirosina, alanina, γ-bencilglutamato y N-trifluoroacetil-lisina para formar acetato de glatirámero protegido;

b) desproteger acetato de glatirámero protegido con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, la solución comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos, para formar

acetato de trifluoroacetilglatirámero;

c) hacer reaccionar acetato de trifluoroacetilglatirámero con piperidina acuosa para formar una solución de acetato de glatirámero; y

d) purificar el acetato de glatirámero.

La invención objeto también proporciona un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que contiene una mezcla de acetato de glatirámero, en el que la mezcla tiene un porcentaje predeterminado de tirosina... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 1 % de bromo libre.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la mejora comprende adicionalmente el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético que comprende menos de 500 ppm de impurezas de iones metálicos.

3. Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un

peso molecular promedio deseado y en el que durante el procedimiento un lote de una mezcla de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina se desprotege con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, comprendiendo la mejora el uso de una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 500 ppm de impurezas de iones metálicos.

4. Un procedimiento para obtener una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado que comprende desproteger una mezcla de polipéptidos consistiendo cada uno en alanina, γ-bencilglutamato, tirosina y trifluoroacetil-lisina con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, solución que comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 500 ppm de impurezas de iones metálicos.

5. Un procedimiento para obtener una composición farmacéutica que contiene una mezcla de acetato de 20 glatirámero, y en el que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, que comprende a) polimerizar N-carboxianhídridos de tirosina, alanina, γ-bencilglutamato y N-trifluoroacetil-lisina para formar una mezcla de polipéptidos protegidos;

b) desproteger los polipéptidos protegidos con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, la solución comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos para 25 formar una mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos;

c) hacer reaccionar la mezcla de trifluoroacetilpolipéptidos con piperidina acuosa para formar una solución de mezcla acuosa de polipéptidos, cada uno de los cuales consta de alanina, ácido glutámico, tirosina y lisina; y

d) purificar la mezcla de polipéptidos.

6. Un procedimiento de producción de acetato de glatirámero, que comprende las etapas de:

a) polimerizar N-carboxianhídridos de tirosina, alanina, γ-bencilglutamato y N-trifluoroacetil-lisina para formar acetato de glatirámero protegido;

b) desproteger acetato de glatirámero protegido con una solución de ácido bromhídrico en ácido acético, la solución comprende menos de 0, 5 % de bromo libre y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos, para formar acetato de trifluoroacetilglatirámero;

c) hacer reaccionar acetato de trifluoroacetilglatirámero con piperidina acuosa para formar una solución de acetato de glatirámero; y

d) purificar el acetato de glatirámero.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 0, 05 % de bromo libre, preferiblemente menos de 0, 01 % de bromo libre, más preferiblemente menos de 0, 001 % de bromo libre, aún más preferiblemente la solución de ácido bromhídrico en ácido acético está exenta de bromo libre.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 100 ppm de impurezas de iones metálicos.

9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende 45 menos de 30 ppm de impurezas de iones metálicos.

10. El procedimiento de la reivindicación 9, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 20 ppm de impurezas de iones metálicos.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético comprende menos de 10 ppm de impurezas de iones metálicos.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético está exenta de impurezas de iones metálicos.

13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que el color de la solución de ácido bromhídrico en ácido acético es menor de 2000 APHA.

14. El procedimiento de una cualquiera de la reivindicación 13, en el que el color de la solución de ácido bromhídrico en ácido acético es menor de 1000 APHA.

15. El procedimiento de una cualquiera de la reivindicación 14, en el que el color de la solución de ácido bromhídrico en ácido acético es menor de 700 APHA.

16. El procedimiento de una cualquiera de la reivindicación 15, en el que el color de la solución de ácido bromhídrico 10 en ácido acético es menor de 500 APHA.

17. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético se produce en un reactor no metálico.

18. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 18, en el que la solución de ácido bromhídrico en ácido acético se prepara en un reactor revestido de vidrio o revestido de teflón.

19. Una mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero, en la que la mezcla tiene un peso molecular promedio deseado, no más de 0, 1% de tirosina bromada y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos.

20. Una mezcla de acetato de glatirámero, en la que la mezcla tiene un peso molecular deseado y menos de 1000 ppm de impurezas de iones metálicos.

21. La mezcla de una cualquiera de las reivindicaciones 19-20, en la que la mezcla comprende menos de 500 ppm de 20 impurezas de iones metálicos.

22. La mezcla de la reivindicación 21, en la que la mezcla comprende menos de 100 ppm de impurezas de iones metálicos.

23. La mezcla de la reivindicación 22, en la que la mezcla comprende menos de 30 ppm de impurezas de iones metálicos.

24. La mezcla de la reivindicación 23, en la que la mezcla comprende menos de 20 ppm de impurezas de iones metálicos.

25. La mezcla de la reivindicación 24, en la que la mezcla comprende menos de 10 ppm de impurezas de iones metálicos.

26. La mezcla de la reivindicación 25, en la que la mezcla está exenta de impurezas de iones metálicos.

27. La mezcla de una cualquiera de las reivindicaciones 19-26, en la que el color de la mezcla es menor de 1000 APHA, preferiblemente menor de 700 APHA.

28. La mezcla de la reivindicación 28, en la que el color de la mezcla es menor de 500 APHA.

29. Procedimiento para preparar una composición farmacéutica que contiene una mezcla de acetato de glatirámero, en el que la mezcla tiene un porcentaje predeterminado de tirosina bromada aceptable para la inclusión en una 35 composición farmacéutica, que comprende obtener un lote de acetato de glatirámero; medir el porcentaje de tirosina bromada del lote por un procedimiento que comprende a) hidrolizar el lote para obtener un hidrolizado; b) eluir el hidrolizado a través de una columna cromatográfica; 40 c) medir el nivel de bromotirosina en el hidrolizado; d) preparar soluciones de muestra de los componentes aminoacídicos del lote y de bromotirosina; e) eluir las soluciones de muestra a través de la columna de la etapa b) ; y f) calcular el porcentaje de tirosina bromada en el lote.

incluir en la composición farmacéutica un lote sólo si su porcentaje de tirosina bromada así medido es menor de 45 0, 3 %.

30. Acetato de trifluoroacetilglatirámero producido por el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4

o 7-18.

31. Acetato de glatirámero producido por el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5-18.

32. Uso de la mezcla de acetato de trifluoroacetilglatirámero de una cualquiera de las reivindicaciones 19 .

2. 28 o el acetato de trifluoroacetilglatirámero de la reivindicación 30 en la fabricación de acetato de glatirámero.