Método de evaluación de riesgo de insuficiencia cardiaca.

Un método de determinación del riesgo de insuficiencia cardiaca en un mamífero que comprende determinar en una muestra biológica obtenida del mamífero el nivel de cada una de los biomarcadores IL-6,

MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF en la muestra, en donde un resultado positivo de al menos tres de dichos biomarcadores en la muestra es indicativo de un riesgo de insuficiencia cardiaca en el mamífero y en donde un resultado positivo está representado por un aumento en la concentración de cualquiera de IL-6, MCP-1, IL-10 y VEGF, y una disminución en la concentración de EGF en la muestra en comparación con una concentración mediana de cada una de los biomarcadores en una población dada.

Método de evaluación de riesgo de insuficiencia cardiaca Campo de la Invención La presente invención se refiere a un método de pronóstico en el campo de la cardiología, y en particular, a un método de evaluación de riesgo de insuficiencia cardiaca o muerte en un mamífero.

Antecedentes de la Invención Se ha demostrado que concentraciones moderadamente elevadas de Proteína C Reactiva (CRP) , un marcador de inflamación, son predictivas de riesgo de insuficiencia cardiaca (HF) y muerte tanto a corto como a largo plazo pero no de infarto agudo de miocardio (AMI) , en pacientes con síndromes coronarios agudos (ACS) . Un informe reciente ha indicado también que concentraciones elevadas de CRP están asociadas con nueva insuficiencia cardiaca en pacientes sin ACS con enfermedad estable de las arterias coronarias. La CRP es una sustancia reaccionante de fase aguda, pero su concentración requiere tiempo para aumentar durante un evento agudo. Adicionalmente, las elevaciones no son específicas de la inflamación vascular. La interleuquina 6 (IL-6) es una citoquina pro-inflamatoria que se cree es el estimulador próximo más importante para la CRP y estimula también la activación de los leucocitos. La interleuquina-8 (IL-8) y la Proteína-1 Quimioatrayente de los Monocitos (MCP-1) son ambas quimioquinas que reclutan neutrófilos y monocitos, respectivamente, al proceso inflamatorio. Se ha informado con anterioridad que concentraciones elevadas de IL-6 y MCP-1 son predictores independientes de muerte/HF en una población ACS; sin embargo, la inflamación representa solamente un proceso patológico en este escenario y biomarcadores adicionales que evalúen la fibrosis cardiaca, remodelación, función y supervivencia son importantes para la estratificación completa de los riesgos.

Tian et al. (Clin. Chem. 2006; 52:A139) describe la variación de citoquinas séricas en pacientes con estrés y enfermedades cardiacas coronarias. Guo et al. (Clin. Chem. 2005; 51: (s6) :A119) describe la estabilidad e intervalos de referencia de citoquinas séricas y correlaciones entre citoquinas séricas, edades y sexos en una población sana utilizando tecnología de biochips. Fitzgerald et al. (J. Proteome Res. 2007; 7 (1) :450-455) describe la aplicabilidad de la tecnología de redes de biochips para medir simultáneamente 12 citoquinas humanas circulantes con detección de alta sensibilidad. Kavsak et al. (Clin. Chem. 2007; 53:2112-2118) expone que IL-6, MCP-1 y NT-proBNP son predictores independientes de muerte e insuficiencia cardiaca en una población de síndrome coronario agudo. Kavsak et al. (Clin Chem Acta 2008; 387:133-138) expone el uso de un panel de biomarcadores que incluyen IL-6, IL-8, MCP-1, VEGF, L-selectina, P-selectina, E-selectina, VCAM-1, ICAM-1, cTnI y NT-proBNP para identificar pacientes en riesgo de infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca. Bimer et al. (2007; 40:89-97) expone el uso de IL-6 y NT-proBNP como biomarcadores de infarto de miocardio en humanos, y BNP e IL-6 como biomarcadores de insuficiencia cardiaca congestiva en animales. US 2006/094056 describe métodos para diagnóstico, tratamiento, o evaluación de enfermedades inflamatorias y autoinmunes por muestreo de fluidos corporales respecto a la presencia y cantidad de ciertas citoquinas, lo que facilita el diagnóstico, el pronóstico o la evaluación de una respuesta terapéutica.

Así pues, sería deseable desarrollar un método predictivo exacto del riesgo de muerte/insuficiencia cardiaca en un mamífero.

Sumario de la Invención Se ha encontrado ahora que IL-6, MCP-1, I L-10, VEGF, y EGF pueden utilizarse colectivamente como biomarcadores para identificar mamíferos en riesgo de insuficiencia cardiaca o muerte, en donde un cambio en la concentración de al menos tres de estos biomarcadores en comparación con una línea base media es indicativo de un estado patológico.

Así pues, en un aspecto de la presente invención, se proporciona un método de determinación del riesgo de insuficiencia cardiaca en un mamífero, que comprende determinar en una muestra biológica obtenida del mamífero el nivel de cada una de los biomarcadores IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF en la muestra, en donde un resultado positivo de al menos tres de dichos biomarcadores es indicativo de un riesgo de insuficiencia cardiaca en el mamífero y en donde un resultado positivo está representado por un aumento en la concentración de cualquiera de IL-6, MCP-1, IL-10, y EGF y una disminución en la concentración de EGF en la muestra en comparación con una concentración mediana de cada una de los biomarcadores en una población dada.

En otro aspecto de la invención, se estipula el uso de un kit para la práctica del método definido en esta memoria a fin de determinar el riesgo de insuficiencia cardiaca en un mamífero. El kit comprende una sustancia reaccionante específica de citoquinas para cada una de IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF, en donde cada una de dichas sustancias reaccionantes está asociada con un indicador capaz de dar lugar a un producto detectable que es indicativo de la concentración de la citoquina en una muestra biológica.

Estos y otros aspectos de la invención resultarán evidentes a partir de la descripción detallada que sigue y las figuras que se describen brevemente a continuación.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 ilustra curvas Kaplan-Meier para supervivencia exenta de eventos acumulativos (muerte/HF) para cada una de los biomarcadores, IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF (A-E) basada en análisis de cuartiles (siendo el Cuartil 1 el grupo de concentración mínima y el Cuartil 4 el grupo de concentración máxima) ; y

la Figura 2 ilustra curvas de supervivencia Kaplan-Meier para un grupo con tres-5 biomarcadores positivos en comparación con un grupo < 3 biomarcadores positivos.

Descripción Detallada de la Invención Se proporciona un método de determinación del riesgo de insuficiencia cardiaca en un mamífero que comprende los pasos de medir el nivel de cada una de los biomarcadores IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF en una muestra biológica obtenida del mamífero. La determinación de un resultado positivo de al menos tres de estos biomarcadores es indicativa de un riesgo de insuficiencia cardiaca en el mamífero.

El término "IL-6" se refiere a la citoquina de mamífero Interleuquina-6, y abarca tanto IL-6 humana, como se representa por el nº de Acceso NCBI NP000591, así como IL-6 de otra especie de mamífero, por ejemplo IL-6 de ratón como se representa por el nº de Acceso NCBI NP112445. Se abarcan también compuestos semejantes a IL-6 tales como el miembro de la familia de citoquinas gp130 (v.g. gp130, LIF-IR (NP002301) , OSM-R (Q99650) , y G-CSF-R (NP000751) , o un receptor de gp130 soluble (v.g., el receptor soluble de IL-6) .

El término "MCP-1" se refiere a la Proteína-1 Quimioatrayente de los Monocitos, que es un miembro de la familia de genes inducibles pequeños (SIG) y es conocida también citoquina inducible pequeña A2 (SCYA2) y factor quimiotáctivo y activador de los monocitos (MCAF) . "MCP-1" como se utiliza en esta memoria abarca tanto MCP-1 humana, como se representa por el nº. de Acceso NCBI NP000591, así como MCP-1 de otras especies de mamífero, por ejemplo, MCP-1 de ratón como se representa por el nº de Acceso NCBI NP112445. Se abarcan también compuestos semejantes a MCP-1 tales como un compuesto de la familia de quimioquinas CC, v.g. CCL128, o un receptor del mismo.

El término "IL-10" se refiere a la interleuquina-10 de mamífero. IL-10 se conoce también como factor inhibidor de la síntesis de citoquinas humanas (CSIF) y es una citoquina anti-inflamatoria. "IL-10" abarca tanto IL-10 humana como se representa por el nº de Acceso NCBI NP000563, como IL-10 de otras especies de mamífero, por ejemplo IL-10 de ratón como se representa por el nº de Acceso NCBI NP034678. Se abarcan también compuestos semejantes a IL-10 tales como citoquinas pertenecientes a la superfamilia IL-10 extendida (v.g., la superfamilia IL-10 extendida: IL10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL-26, IL-28, e IL-29) o un receptor de las mismas.

El término "VEGF" se refiere a los Factores de Crecimiento Endotelial Vascular de la familia de factores de crecimiento derivados de las plaquetas que incluye VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C y VEGF-D y las variantes de remodelación VEGF121, VEGF121b, VEGF145, VEGF165, VEGF165b, VEGF189, VEGF206. "VEGF", tal como se define abarca tanto VEGF humano, por ejemplo VEGF-A como se representa por el nº de Acceso NCBI NP001020537 y VEGF-B como se representa por el nº de Acceso NCBI XP001128909, y VEGF de otras especies de mamífero, por ejemplo, VEGF-A de ratón como se representa por el nº de Acceso NCBI NP001020421 y VEGF-B de ratón como se representa por el nº de Acceso... [Seguir leyendo]

1. Un método de determinación del riesgo de insuficiencia cardiaca en un mamífero que comprende determinar en una muestra biológica obtenida del mamífero el nivel de cada una de los biomarcadores IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF, y EGF en la muestra, en donde un resultado positivo de al menos tres de dichos biomarcadores en la muestra es indicativo de un riesgo de insuficiencia cardiaca en el mamífero y en donde un resultado positivo está representado por un aumento en la concentración de cualquiera de IL-6, MCP-1, IL-10 y VEGF, y una disminución en la concentración de EGF en la muestra en comparación con una concentración mediana de cada una de los biomarcadores en una población dada.

2. Un método como se define en la reivindicación 1, en donde la concentración de cada biomarcador se determina utilizando una sustancia reaccionante específica de citoquina para cada biomarcador, en donde cada una de dichas sustancias reaccionantes está asociada con un indicador capaz de dar lugar a un producto detectable que es indicativo de la concentración de la citoquina en la muestra biológica.

3. Un método como se define en la reivindicación 2, en donde la sustancia reaccionante específica de la citoquina es un anticuerpo.

4. Un método como se define en la reivindicación 2, en donde el indicador es una enzima capaz de reaccionar con un sustrato para dar lugar a un producto detectable.

5. Un método como se define en la reivindicación 1, en donde un resultado positivo en al menos 4 de dichos biomarcadores es indicativo de un mayor riesgo de insuficiencia cardiaca que un resultado positivo en 3 de dichos biomarcadores.

6. Un método como se define en la reivindicación 1, en donde cuanto mayor es el resultado positivo de uno o más de dichos al menos tres biomarcadores, tanto mayor es el riesgo de insuficiencia cardiaca.

7. Uso de un kit para practicar el método de la reivindicación 1, en donde dicho kit comprende una sustancia reaccionante específica de citoquina para cada una de IL-6, MCP-1, IL-10, VEGF y EGF, en donde cada una de dichas sustancias reaccionantes está asociada con un indicador capaz de dar lugar a un producto detectable que es indicativo de la concentración de la citoquina en una muestra biológica.

8. El uso como se define en la reivindicación 7, en donde la sustancia reaccionante específica de citoquina es un anticuerpo.

9. El uso como se define en la reivindicación 7, en donde el indicador es una enzima capaz de reaccionar con un sustrato para dar lugar a un producto detectable.

10. El uso como se define en la reivindicación 9, en donde la enzima se selecciona del grupo constituido por peroxidasa de rábano picante (HRP) , fosfatasa alcalina (AP) , β-galactosidasa, acetilcolinesterasa y catalasa.