Inhibidores TRPA1 para tratamiento del dolor.

Un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

**Fórmula**

donde n es un número entero de 1 a 3 y

R2 representa heteroarilo substituido;

y donde dicho compuesto in hibe una corriente mediada por el TRPA1 con una CI50 menor de 10 micromolar,para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedadpulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino,glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistemainmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis,eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla), migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolordebido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable(SII), síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes), síndrome de la bocaardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente,donde dicha CI50 es determinada por un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo decélulas enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas:

(a) disponer de células de la línea comercial HEK293/TREx (Invitrogen) que expresan TRPA1 a partir de unaconstrucción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC NºID.: 1;

(b) disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2,2 mM, MgCl2 2,08mM y HEPES 10 mM, pH 7,2, y con adición de 60 mg/ml de anfotericina antes del experimento;

(c) disponer de una solución externa de NaCl 150 mM, KCl 4,5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina10 mM, EGTA 1 mM, pH 7,4;

(d) aplicar una rampa de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración, cada 5 segundos;

(e) estudiar la capacidad del compuesto para bloquear la corriente hacia el interior o hacia el exterior en lapresencia continuada de AITC 5 micromolar; y

(f) determinar el valor de la CI50.

Inhibidores TRPA1 para tratamiento del dolor

SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad para las solicitudes provisionales Estadounidenses con números de serie 60/753.665, depositada el 22 de Diciembre de 2005, y 60/817.892, depositada el 29 de Junio de 2006.

Antecedentes [0002] Existen una variedad de proteínas de canales iónicos para mediar en el flujo de iones a través de las membranas celulares. La apropiada expresión y función de las proteínas de los canales iónicos es esencial para el mantenimiento de la función celular, la comunicación intracelular y similares. Numerosas enfermedades son el resultado de una regulación errónea del potencial de membrana o de un manejo anormal del calcio. Dada la importancia primordial de los canales de iones en la modulación del potencial de membrana y del flujo de iones en las células, tiene un gran interés la identificación de agentes que puedan promover o inhibir canales iónicos particulares como herramientas de investigación y como posibles agentes terapéuticos.

Uno de tales canales es el canal de Receptores de Potencial Transitorio A1 (TRPA1) (ANKTM1) . TRPA1 es un canal permeable al calcio, específicamente un canal de cationes permeable al calcio no selectivo. Además de a los iones calcio, los canales TRPA1 son permeables a otros cationes, por ejemplo el sodio. Así, los canales TRPA1 modulan el potencial de membrana modulando el flujo de cationes, tales como los iones calcio y sodio. Aunque los canales catiónicos no selectivos, tales como TRPA1, modulan, entre otros, el flujo de iones calcio, son mecanísticamente distintos de los canales de calcio regulados por voltaje. En general, los canales de calcio regulados por voltaje responden a la despolarización de la diferencia de potencial a través de la membrana y pueden abrirse para permitir un flujo de calcio hacia el interior desde el medio extracelular y un rápido aumento en los niveles o concentraciones de calcio intracelular. Por el contrario, los canales catiónicos no selectivos generalmente se abren por transducción de señal, son de larga duración y producen cambios menos rápidos en la concentración de iones. Estas diferencias mecanísticas van acompañadas de diferencias estructurales entre los canales regulados por voltaje y los permeables a cationes. Así, aunque muchos y diversos canales actúan regulando el flujo de iones y el potencial de membrana en varios tipos celulares y en respuesta a numerosos estímulos, es importante reconocer las diferencias estructurales, funcionales y mecanísticas significativas entre diferentes clases de canales iónicos.

Dado que la regulación errónea de los canales iónicos va con frecuencia asociada a afecciones patológicas, sería deseable identificar y producir compuestos que puedan modular una o más funciones de los canales iónicos, incluido el TRPA1. Dichos compuestos tienen una variedad de usos in vitro e in vivo.

Resumen [0005] Un aspecto importante de la consecución de una homeostasis celular es el mantenimiento de concentraciones iónicas apropiadas en diversos tipos celulares durante el desarrollo y en respuesta a numerosos estímulos. Un gran número de diversos tipos de canales iónicos actúan con el fin de mantener la homeostasis celular moviendo iones hacia dentro y hacia fuera de las células a través de la membrana plasmática, y en el interior de las células moviendo iones a través de las membranas de los orgánulos intracelulares, incluyendo, por ejemplo, el retículo endoplásmico, el retículo sarcoplásmico, las mitocondrias y los orgánulos endocíticos, entre los que se incluyen los endosomas y los lisosomas. Uno de tales canales iónicos es el canal catiónico no selectivo TRPA1. TRPA1 es permeable a los cationes y pertenece a la familia más extensa de los canales iónicos TRP.

Los canales TRP han sido clasificados en al menos seis grupos: TRPC (corto) , TRPV (vainilloide) , TRPM (largo, melastatina) , TRPP (policistinas) , TRPML (mucolipinas) y TRPA (ANKTM1) . El grupo TRPC puede dividirse en 4 subfamilias (TRPC1, TRPC4, 5, TRPC3, 6, 7 y TRPC2) en base a la homología de secuencia y a las similitudes funcionales. Actualmente, la familia TRPV tiene 6 miembros. TRPV5 y TRPV6 están más estrechamente relacionados entre sí que con TRPV1, TRPV2, TRPV3 o TRPV4. TRPA1 está más estrechamente relacionado con TRPV3 que con el resto, y está más estrechamente relacionado con TRPV1 y TRPV2 que con TRPV5 y TRPA6. La familia TRPM tiene 8 miembros. Como constituyentes, se incluyen los siguientes: el miembro fundador TRPM1 (Melastatina o LTRPC1) , TRPM3 (KIAA1616 o LTRPC3) , TRPM7 (TRP-PLIK, ChaK (1) , LTRPC7) , TRPM6 (ChaK2) , TRPM2 (TRPC7 o LTRPC2) , TRPM8 (Trp-p8 o CMR1) , TRPM5 (Mtr1 o LTRPC5) y TRPM4 (FLJ20041 o LTRPC4) . El único miembro en mamíferos de la familia TRPA es ANKTM1. La familia TRPML consiste en las mucolipinas, que incluyen TRPML1 (mucolipinas 1) , TRPML2 (mucolipinas 2) y TRPML3 (mucolipina 3) . La familia TRPP consiste en dos grupos de canales: los que se predice que tienen seis dominios de transmembrana y los que tienen 11. Se predice que TRPP2 (PKD2) , TRPP3 (PKD2L1) y TRPP5 (PKD2L2) tienen todos ellos seis dominios de transmembrana. Se piensa que TRPP1 (PKD1, PC1) , PKDREJ y PKD-1L1 tienen todos 11 dominios de transmembrana.

Los canales TRP constituyen una clase grande e importante de canales implicados en la modulación de la homeostasis celular. La presente invención proporciona compuestos y composiciones que modulan al menos un miembro de la familia TRP. Específicamente, la presente invención proporciona compuestos y composiciones para antagonizar una función de TRPA1. La modulación de una función de TRPA1 proporciona un medio para la modulación de la homeostasis del calcio, de la homeostasis del sodio, de los niveles de calcio intracelular, de la polarización de la membrana (potencial de membrana en reposo) y/o de los niveles de cationes en una célula. Los compuestos que pueden modular una o más funciones de TRPA1 son útiles en muchos aspectos, incluyendo, aunque sin limitación, el mantenimiento de la homeostasis del calcio, el mantenimiento de la homeostasis del sodio, la modulación de los niveles de calcio intracelular, la modulación de la polarización de la membrana (potencial de membrana) , la modulación de los niveles de cationes y/o el tratamiento o la prevención de enfermedades, trastornos

o afecciones asociados a la homeostasis del calcio, a la homeostasis del sodio, a la dishomeostasis del calcio o del sodio o a la polarización/hiperpolarización de la membrana (incluyendo hipo- e hiperexcitabilidad) , y/o el tratamiento

o la prevención de enfermedades, trastornos o afecciones asociados a la regulación o a la regulación errónea de la expresión o de la función de TRPA1. Adicionalmente, la descripción proporciona, en ciertas realizaciones, compuestos y composiciones que antagonizan tanto una función de TRPA1 como una función de uno o más canales TRP adicionales.

La invención proporciona un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

donde n es un número entero de 1 a 3 y R2 representa heteroarilo substituido, y donde dicho compuesto inhibe una corriente mediada por TRPA1 con una CI50 inferior a 10 micromolar, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias, tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmune, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla) , migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido a cáncer, cistitis de vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII) , síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes) , síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida del pelo o inhibir su crecimiento en un paciente, donde dicha CI50 es determinada por medio de un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo de células enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas:

(a) disponer de células de la línea comercializada HEK293/TREx (Invitrogen) que expresen TRPA1 a partir de una construcción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos representada en la SEC. Nº ID.: 1;

(b) disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2, 2 mM, MgCl2 2, 08... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de Fórmula II o una sal del mismo, o un solvato o hidrato del compuesto o de su sal:

donde n es un número entero de 1 a 3 y R2 representa heteroarilo substituido; y donde dicho compuesto inhibe una corriente mediada por el TRPA1 con una CI50 menor de 10 micromolar, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla) , migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII) , síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes) , síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente, donde dicha CI50 es determinada por un registro de pinzamiento zonal de membranas realizado en el modo de células enteras con un potencial de sujeción de -40 mV mediante las siguientes etapas:

(a) disponer de células de la línea comercial HEK293/TREx (Invitrogen) que expresan TRPA1 a partir de una construcción codificante de una proteína TRPA1 con una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC Nº ID.: 1;

(b) disponer de una solución interna de aspartato de cesio 140 mM, EGTA 10 mM, CaCl2 2, 2 mM, MgCl2 2, 08 mM y HEPES 10 mM, pH 7, 2, y con adición de 60 mg/ml de anfotericina antes del experimento;

(c) disponer de una solución externa de NaCl 150 mM, KCl 4, 5 mM, MgCl2 3 mM, HEPES 10 mM, glutamina 10 mM, EGTA 1 mM, pH 7, 4;

(d) aplicar una rampa de voltaje de -120 a +100 mV, de 400 ms de duración, cada 5 segundos;

(e) estudiar la capacidad del compuesto para bloquear la corriente hacia el interior o hacia el exterior en la presencia continuada de AITC 5 micromolar; y

(f) determinar el valor de la CI50.

2. Una preparación farmacéutica adecuada para uso en un paciente humano, o para uso veterinario, que contiene una cantidad efectiva de un compuesto de Fórmula I o una sal del mismo, o de un solvato o hidrato del compuesto o de su sal, según la reivindicación 1, para uso en un método de tratamiento o de prevención de una afección seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple, trastornos del sistema inmunitario, dolor agudo y/o crónico, sensibilidad al tacto, quemaduras, inflamación, neuropatía diabética, psoriasis, eczema, dermatitis, neuralgia postherpética (culebrilla) , migraña, incontinencia, fiebre, sofocos, mucositis oral, dolor debido al cáncer, cistitis de la vejiga, dolor asociado a la enfermedad de Crohn y al Síndrome del Intestino Irritable (SII) , síndrome de Grierson-Gopalan (más conocido como síndrome de los pies ardientes) , síndrome de la boca ardiente (SBA) y tos, o como depilatorio para promover la pérdida, o inhibir el crecimiento, del pelo en un paciente.

3. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es el dolor.

4. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es el dolor oral.

5. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es la inflamación.

6. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es la incontinencia.

7. Un compuesto según la reivindicación 1 para uso en un método según la reivindicación 1, o una preparación farmacéutica según la reivindicación 2 para uso en un método según la reivindicación 2, donde dicha afección es seleccionada entre asma, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, glomerulonefritis, enfermedades neuroinflamatorias tales como la esclerosis múltiple y trastornos del sistema inmunitario.

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hTRPA1 hTRPV3

Zonal P1

Interior hTRPA1 Interior hERG hTRPV4 Comp.

CI50 Flúor CI50 CI50 CI50 hNaV1.2 ID Estructura PM (nM) CI50 (nM) (nM) (nM) (nM) CI50 (nM)