Inhibidores de MRP4 para el tratamiento de trastornos vasculares.

Un inhibidor de MRP4 para uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno vascular seleccionadodel grupo consistente en aterosclerosis,

reestenosis postangioplástica, hipertensión arterial pulmonar y enfermedadde injerto venoso, mediante la inhibición de la proliferación del crecimiento de células de músculo liso.

Inhibidores de MRP4 para el tratamiento de trastornos vasculares

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a inhibidores de la proteína multifarmacorresistente 4 (MRP4) para uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno vascular seleccionado del grupo consistente en aterosclerosis, reestenosis postangioplástica, hipertensión arterial pulmonar y enfermedad de injerto venoso, mediante la inhibición de la proliferación o el crecimiento de células de músculo liso.

La presente invención se refiere a la regulación génica y a la fisiología celular de células de músculo liso. Específicamente, la invención se refiere al uso de inhibidores de MRP4 para bloquear el eflujo de nucleótidos cíclicos fuera de las células.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La proliferación y crecimiento celulares son dos mecanismos que conducen a la remodelación vascular observados comúnmente en células musculares vasculares en respuesta a diversos estímulos patológicos. Una proliferación excesiva de células de músculo liso es un proceso fundamental que contribuye a la respuesta de lesión en los vasos arteriales principales. Dicho proceso está implicado en numerosos trastornos vasculares, incluyendo aterosclerosis, reestenosis postangioplástica, hipertensión arterial pulmonar y enfermedad de injerto venoso (Dzau VJ et aI., 2002; Novak K., 1998) . Por tanto, identificar modificadores de la proliferación de células de músculo liso vascular (VSMC) es un enfoque importante de investigación en biología y medicina cardiovascular.

Se observa un patrón estereotípico de cambios en la expresión génica que incluyen la reexpresión de genes fetales. Dichas diferencias están controladas por rutas de señalización subyacentes particulares. Los avances en la descripción de las rutas de señalización implicadas en la proliferación patológica de células de músculo liso vascular han apuntado a rutas reguladoras controladas por nucleótidos cíclicos. Los nucleótidos cíclicos, a saber 3, 5monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) y 3, 5-monofosfato de guanosina cíclico (GMPc) son segundos mensajeros clave que actúan como reguladores negativos de la proliferación de células de músculo liso. La síntesis de AMP cíclico o GMP cíclico está catalizada por las enzimas adenilato o guanilato ciclasa, respectivamente (McDonald y Murad, 1996; Sunahara et aI., 1996) . La elevación de las concentraciones intracelulares de AMPc y GMPc por análogos de AMPc o GMPc inhibe, independientemente ambas, la proliferación de células de músculo liso vascular de conejo (Assender JW et al., 1992) . La reexpresión de proteína cinasa G (PKG) activa constitutivamente (o PKG de tipo silvestre con estimulación de GMPc) inhibe la migración de VSMC, potencia la apoptosis, reduce la proliferación y disminuye la formación de neoíntima después de lesión vascular (Boerth NJ et al.. 1997; Sinnaeve P et al. 2002) .

Siguiendo estos resultados, se ha centrado el enfoque en el proceso implicado en la eliminación de nucleótidos cíclicos. Estos nucleótidos cíclicos pueden degradarse por miembros específicos de la superfamilia de fosfodiesterasas (PDE) que son responsables de la hidrólisis de AMPc y GMPc intracelulares (Rybalkin et al., 2003) .

Recientemente, Chen et al. (JBC; 2001) han reseñado que AMPc y GMPc pueden transportarse también por transportadores de eflujo activo, a saber las proteínas de multifarmacorresistencia (MRP) MRP4 y MRP5, codificadas por los genes transportadores de módulo de unión a ATP de clase C (ABCC) 4 y ABCC5, respectivamente. Entre esta familia de transportadores, MRP4 y MRP5 muestran una alta afinidad por AMPc y GMPc. Sin embargo, hasta la fecha, la función fisiológica de estas proteínas sigue sin aclarar. Recientemente, se han identificado a MRP4 y MRP5 como bombas de exportación dependientes de ATP para nucleótidos cíclicos (Jedlitschky et al., 2000; Chen et al., 2001) y se ha mostrado que MRP4 y MRP5 se expresan en arterias coronaria y pulmonar porcinas (Mitani et al.; 2003) .

El documento WO2005044244 da a conocer el uso de inhibidores de la proteína multifarmacorresistente 4 (MRP4) en trombocitos para el tratamiento y/o la profilaxis de enfermedades cardiovasculares.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención demuestra formalmente por primera vez que la proliferación de células de músculo liso puede inhibirse inhibiendo MRP4.

La invención se refiere a un inhibidor de MRP4 para uso en el tratamiento y/o la prevención de una enfermedad vascular seleccionada del grupo consistente en aterosclerosis, reestenosis postangioplástica, hipertensión arterial pulmonar y enfermedad de injerto venoso, mediante la inhibición del crecimiento y proliferación de células de músculo liso.

La invención se refiere a un método para tratar un trastorno vascular en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de MRP4.

La invención se refiere también al uso de un inhibidor de MRP4 en la fabricación de un medicamento para inhibir la proliferación de células de músculo liso.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

Definiciones:

El término "MRP4" tiene su significado general en la materia y hace referencia a la proteína multifarmacorresistente 4. MRP4 se designa también como proteína ABCC4, miembro 4 de la subfamilia C (CFTR/MRP) de módulo de unión a ATP, EST 170205, transportador ABC relacionado con MRP/cMOAT (MOATB) , transportador B aniónico orgánico multiespecífico (MOATB) y proteína 4 asociada a multifarmacorresistencia en la materia. El término puede incluir MRP4 de origen natural y variantes y formas modificadas de la misma. El término puede hacer referencia también a proteínas de fusión en que un dominio de MRP4 que retiene al menos una actividad de MRP4 está fusionado, por ejemplo, con otro polipéptido (por ejemplo, un marcaje polipeptídico tales como son convencionales en la materia) . La MRP4 puede ser de cualquier fuente, pero es típicamente una MRP4 de mamífero (por ejemplo, de ser humano y primate no humano) , particularmente una MRP4 humana. Se proporciona una secuencia aminoacídica nativa ejemplar de MRP4 en la base de datos GenPept con número de acceso AAH41560 y se proporciona una secuencia nucleotídica nativa ejemplar que codifica MRP4 en la base de datos GenBank con número de acceso NM_005845.

La expresión "inhibidor de MRP4" debería entenderse en el sentido amplio, engloba inhibidores del eflujo celular de nucleótidos cíclicos mediado por MRP4, llamado de aquí en adelante actividad de MRP4, e inhibidores de la expresión de MRP4.

Un "inhibidor de la expresión" hace referencia a un compuesto natural o sintético que tiene el efecto biológico de inhibir o reducir significativamente la expresión de un gen. En consecuencia, un "inhibidor de la expresión de MRP4" hace referencia a un compuesto natural o sintético que tiene el efecto biológico de inhibir o reducir significativamente la expresión del gen que codifica MRP4.

Como se usa en la presente memoria, el término "inhibidor selectivo de MRP4" hace referencia a un inhibidor que es selectivo de MRP4 en comparación con otras proteínas multifarmacorresistentes (MRP) tales como MRP1, MRP2, MRP3, MRP5, MRP6, MRP7, MRP8, MRP9, MRP10, MRP11, MRP12 y MRP13. Se entiende por "selectivo" que la Ki del inhibidor de MRP4 sea al menos 5 veces, preferiblemente 10 veces, más preferiblemente 25 veces, aún más preferiblemente 100 veces menor que la Ki de otras MRP. La Ki de un inhibidor de MRP4 puede determinarse usando diversos métodos bien conocidos en la materia.

El término "molécula orgánica pequeña" hace referencia a una molécula de un tamaño comparable a aquellas moléculas orgánicas usadas generalmente en farmacia. El término excluye las macromoléculas biológicas (por ejemplo, proteínas, ácidos nucleicos, etc.) . Las moléculas orgánicas pequeñas preferidas oscilan en el intervalo de tamaño de hasta aproximadamente 5000 Da, más preferiblemente hasta 2000 Da y lo más preferiblemente hasta aproximadamente 1000 Da.

Como se usa en la presente memoria, el término "sujeto" denota un mamífero, tal como un roedor, un felino, un canino y un primate. Preferiblemente, el sujeto según la invención es un ser humano.

En su sentido más amplio, el término "tratar" o "tratamiento" hace referencia a la reversión, alivio, inhibición de la progresión o prevención del trastorno o afección al que se aplica dicho término, o de uno o más síntomas de dicho trastorno o afección.

"Farmacéuticamente" o "farmacéuticamente aceptable" hace referencia a entidades moleculares y composiciones... [Seguir leyendo]

1. Un inhibidor de MRP4 para uso en el tratamiento y/o la prevención de un trastorno vascular seleccionado del grupo consistente en aterosclerosis, reestenosis postangioplástica, hipertensión arterial pulmonar y enfermedad de injerto venoso, mediante la inhibición de la proliferación del crecimiento de células de músculo liso.

2. Un inhibidor para uso según la reivindicación 1, en el que el inhibidor es un inhibidor selectivo de MRP4.

3. Un inhibidor para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el inhibidor es un inhibidor de la expresión de MRP4.

4. El inhibidor para uso según la reivindicación 3, en el que dicho inhibidor de la expresión de MRP4 se

selecciona del grupo consistente en moléculas de ARN o ADN anticodificantes, ARN inhibidores pequeños (ARNip) , 10 ARN de horquilla cortos y ribozimas.

5. El inhibidor para uso según la reivindicación 4, en el que dicho inhibidor de la expresión de MRP4 es un ARN de horquilla corto que comprende la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 9.

6. Un inhibidor para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que dicho inhibidor de MRP4 se

selecciona del grupo consistente en moléculas orgánicas pequeñas, aptámeros, anticuerpos y fragmentos de 15 anticuerpos.

7. Una composición farmacéutica para uso para tratar un trastorno vascular según la reivindicación 1, que comprende un inhibidor de MRP4 como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Una composición farmacéutica para uso según la reivindicación 7, que comprende adicionalmente uno o

más inhibidores de fosfodiesterasa (PDE) seleccionados del grupo consistente en inhibidores de PDE3, inhibidores 20 de PDE4, inhibidores de PDE5 y mezclas de los mismos.

9. Un kit para uso para tratar un trastorno vascular que comprende una primera composición farmacéutica según la reivindicación 7 y una segunda composición farmacéutica que comprende uno o más inhibidores de fosfodiesterasa (PDE) seleccionados del grupo consistente en inhibidores de PDE3, inhibidores de PDE4, inhibidores de PDE5 y mezclas de los mismos.

10. Un kit para uso según la reivindicación 9, en el que dicha segunda composición farmacéutica comprende un inhibidor de PDE5.

Figura 1 Figura 2 Figura 3 Figura 4 Figura 5

Figura 7

Figura 1 suplementaria Figura 2 suplementaria Figura 3 suplementaria Figura 4 suplementaria Figura 5 suplementaria