Formación de vesículas reconstituidas y secadas para un uso farmacéutico.

Una composición farmacéutica secada que comprende un agente activo secado por congelación que tambiéncomprende unas vesículas,

que comprende

a) por lo menos un lípido,

b) por lo menos un agente activo,

c) un agente favorecedor de la fusión, en donde el agente favorecedor de la fusión es un aminoácido decarácter alcalino seleccionado entre arginina, histidina, lisina o citrulina, y

d) ningún agente estabilizador de membranas,

en la que la que una rehidratación con una solución acuosa de la composición farmacéutica secada da comoresultado la formación de unos liposomas multilaminares que tienen un diámetro liposomal medio de más 1 μm,cuyos liposomas encapsulan al agente activo.

Formación de vesículas reconstituidas y secadas para un uso farmacéutico El presente invento se refiere a unas composiciones de vesículas reconstituidas y secadas (DRV = acrónimo de dried reconstituted vesicles) y a unas formulaciones basadas en agua de las mismas, que contienen uno o más agentes terapéuticos (p.ej. una proteína hidrófila) . Más particularmente, éste se refiere a unas DRV’s que comprenden por lo menos un lípido y un agente favorecedor de la fusión que, después de una reconstitución, forman unos grandes liposomas multilaminares que encapsulan a un agente activo en una fase acuosa.

Se sabe que los liposomas son útiles como vehículos de compuestos activos biológica y terapéuticamente, que facilitan el suministro de estos compuestos al cuerpo. Los liposomas comprenden generalmente una gotita encerrada de un lípido, que tiene un núcleo que contiene típicamente un compuesto en un medio acuoso. En ciertas formas de realización, el compuesto está unido químicamente con un componente de lípido o simplemente está contenido dentro del compartimiento interno acuoso del liposoma. Hay diferentes tipos de liposomas: unos liposomas multivesiculares (MVL’s acrónimo de MultiVesicular Liposomes) con múltiples cámaras acuosas internas no concéntricas dentro de cada partícula de liposoma; unas vesículas multilaminares (MLV’s acrónimo de MultiLamellar Vesicles) que tienen una serie de envolturas sustancialmente esféricas formadas por unas bicapas de lípidos interdispersadas con unas capas acuosas, que varían en cuanto a su diámetro hasta llegar a uno de 5 μm o mayor; unas vesículas unilaminares grandes (LUV’s acrónimo de Large Unilamellar Vesicles) que varían en cuanto a su diámetro entre uno de 600 nm hasta de 1 μm o mayor, que tienen una bicapa de lípido que rodea a una fase acuosa no estructurada, grande; y unas pequeñas vesículas unilaminares (SUV’s acrónimo de Small Unilamellar Vesicles) , que son similares en su estructura a las LUV’s excepto en que su diámetro es menor que aproximadamente 0, 2 μm.

Se conocen bien en la especialidad una diversidad de métodos para preparar liposomas, varios de los cuales se describen en la obra Liposome Technology [Tecnología de los liposomas] 2ª edición en G. Gregoriadis, CRC Press Inc., Boca Raton (1993) . Los retos principales de la tecnología de los liposomas son conseguir un alto nivel de carga de un agente activo dentro del liposoma y hacer que esa carga sea estable durante la manipulación y el almacenamiento. Otro reto es adaptar la velocidad de liberación del agente activo a unas metas específicas en la formulación de liposomas. Aunque la encapsulación de un material biológico en liposomas tiene un potencial importante para el suministro de fármacos a seres humanos, con frecuencia ha resultado problemática la producción de un material encapsulado a una escala comercial.

La mayor parte de los usos farmacéuticos para la aplicación por vía parenteral se enfocan sobre unos liposomas pequeños para evitar unos efectos colaterales indeseados tales como una embolia, tal como se han descrito para liposomas grandes. Además, por uso de liposomas pequeños, parecía que era más fácil producir un producto estable.

Hay diversos procedimientos conocidos para producir un material encapsulado de MLV’s o bien a una pequeña escala o a una escala industrial (Rao, “Preparation of Liposomes on the Industrial Scale. Problems And Perspectives” [Preparación de liposomas a la escala industrial. Problemas y perspectivas], en Liposome Technology 2ª Edición en G. Gregoriadis, CRC Press Inc., Boca Raton, páginas 49-65 (1993) ) . En la mayor parte de los casos, una delgada película de lípido se deposita a partir de un disolvente orgánico sobre las paredes de un recipiente, se añade una solución acuosa del material que ha de ser encapsulado, y el recipiente se agita. Este procedimiento da como resultado una encapsulación del agente activo dentro de las MLV’s. La principal desventaja de dicho procedimiento es la variación en la encapsulación y con frecuencia un atrapamiento bajo y no reproducible del agente biológico dentro de los liposomas, además de una degradación del agente biológico y una inestabilidad en almacenamiento de la suspensión liposomal.

Un método tal como se describe en el documento de patente europea EP0678017 produce unas vesículas multilaminares por congelación y descongelación (FATMLV’s acrónimo de Freeze And Thaw MultiLamellar Vesicles) . El método de FATMLV requiere que la congelación y la descongelación se hagan en la presencia del material que ha de ser atrapado. Sin embargo, el hecho de someter a unos materiales sensibles, tales como unas proteínas, a tal ruda manipulación física, da como resultado una desactivación o degradación del material. Además, unos frecuentes ciclos de congelación y descongelación no son factibles para una producción a gran escala y requieren un alto gasto técnico de funcionamiento.

Es sabido que los liposomas y sus contenidos pueden resultar relativamente inestables en una dispersión acuosa. Correspondientemente, los intentos para aumentar la corta vida en almacenamiento de una formulación liposomal por deshidratación han sido el foco de diversos métodos de preparación.

Un atrapamiento pasivo y un almacenamiento mejorados de liposomas que contienen un agente activo se han conseguido por uso de un método de deshidratación y rehidratación (documento EP0485143, documento de

solicitud de patente internacional WO90/03795, y documento EP0678017 y las referencias allí contenidas) en el que unos liposomas previamente formados se añaden a una solución acuosa que contiene un agente activo o se mezclan con una proteína liofilizada, seguido por una deshidratación de la mezcla y una subsiguiente rehidratación en un medio acuoso. Cuando la solución es secada para dar una mezcla de lípidos altamente viscosa, los liposomas individuales se fusionan para formar unas MLV’s, que encapsulan al agente activo dentro de las láminas. Después de una rehidratación, se forman unas vesículas de lípidos, en las que el material está encapsulado. Este método conduce a una eficacia bastante baja de encapsulación, dependiente del fármaco que ha de ser encapsulado, debido a la inestabilidad de los liposomas, a la fuga del agente activo o a la inactivación o degradación física del material que ha de ser encapsulado.

Es conocido que la adición de un agente conservante (un agente conferidor de voluminosidad) del tipo de un azúcar antes de una deshidratación y una formación de un polvo de lípido secado puede conservar a unos liposomas, implicando una desecación por congelación. Los agentes conferidores de voluminosidad se describen en los documentos EP0678017, WO90/03795, WO97/42936, WO92/02208, EP190315 y en la obra Liposomes [Liposomas] 2ª edición, A Practical Approach [Un enfoque práctico], compilada por Vladimir P. Torchilin y Volkmar Weissig, Oxford University Press (2002) . Ellos se usan para proteger a las vesículas contra el daño y la fuga del agente activo durante una liofilización y evitar una fusión de vesículas unilaminares pequeñas para formar unas estructuras multilaminares grandes.

El documento WO97/42936 describe un procedimiento para preparar unas MLV’s secadas por congelación, que encapsulan a una composición anfífila de fármaco, además de sorbitol como un agente de estabilización de membranas.

El documento WO90/03795 describe el uso de agentes crioprotectores tales como un azúcar (p.ej. sacarosa, manitol, lactosa, trehalosa) y por lo menos una proteína (p.ej. una albúmina, gelatina o caseína) durante una desecación de las formulaciones liposomales para proteger al producto deshidratado con respecto del daño y deterioro durante una desecación por congelación (= liofilización) y una subsiguiente reconstitución, con el fin de mantener la integridad de la bicapa de liposomas (p.ej. se observa poca o ninguna fusión o conglomeración) , y para evitar una fuga de los liposomas. Sin que se añadan agentes lioprotectores (protectores de liofilización) los liposomas se desploman completamente después de una desecación y una rehidratación y forman unas MLV’s cuyos contenidos se han perdido en gran parte y cuyo gran tamaño impide una distribución apropiada para aplicaciones sistémicas.

Özer y colaboradores describen el uso de unos medios de crioprotección (protección criogénica) tales como polialcoholes y sacáridos y proteínas o aminoácidos para conservar la estructura y la integridad de bicapas demembranas y para evitar la fusión y la conglomeración de las vesículas por deshidratación y congelación (Özer, Y. y colaboradores... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica secada que comprende un agente activo secado por congelación que también comprende unas vesículas, que comprende a) por lo menos un lípido, 5 b) por lo menos un agente activo, c) un agente favorecedor de la fusión, en donde el agente favorecedor de la fusión es un aminoácido de carácter alcalino seleccionado entre arginina, histidina, lisina o citrulina, y d) ningún agente estabilizador de membranas, en la que la que una rehidratación con una solución acuosa de la composición farmacéutica secada da como resultado la formación de unos liposomas multilaminares que tienen un diámetro liposomal medio de más 1 μm, cuyos liposomas encapsulan al agente activo.

2. La composición farmacéutica secada de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el por lo menos un agente activo es una proteína, en particular una proteína hidrófila o un fragmento activo de la misma.

3. La composición farmacéutica secada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la 15 que no está presente ningún azúcar protector, alcohol de azúcar o glicósido.

4. La composición farmacéutica secada de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un anión inorgánico u orgánico.

5. La composición farmacéutica secada de acuerdo con la reivindicación 2, en la que la proteína hidrófila es un agente de regeneración de huesos y/o cartílagos.

6. Un procedimiento para la preparación de una composición secada de liposomas que, después de una rehidratación con una solución acuosa, forma unos liposomas multilaminares con un diámetro liposomal medio de más que 1 μm, que encapsulan a un agente activo, el cual comprende las etapas de a) hidratación de un lípido, de una mezcla de lípidos o de una película de lípidos en la ausencia de un disolvente orgánico, 25 b) generación de pequeñas vesículas unilaminares que tienen preferiblemente un diámetro medio comprendido entre 50 y 200 nm, c) adición de una solución acuosa de un agente activo, d) después de, antes de o conjuntamente con la etapa c) , adición de un agente favorecedor de la fusión, en donde el agente favorecedor de la fusión es un aminoácido de carácter alcalino seleccionado entre 30 arginina, histidina, lisina o citrulina, y opcionalmente de un anión inorgánico u orgánico, y e) deshidratación de dicha dispersión de lípidos sin la adición de un agente estabilizador de membranas.

7. Un procedimiento para la preparación de una composición administrable de liposomas, que comprende liposomas multilaminares con un diámetro medio de liposomas de más que 1 μm, que encapsulan a un agente activo, el cual comprende las etapas de a) hidratación de un lípido, de una mezcla de lípidos o de una película de lípidos en la ausencia de un disolvente orgánico, f) generación de pequeñas vesículas unilaminares que tienen preferiblemente un diámetro medio comprendido entre 50 y 200 nm, g) adición de una solución acuosa de un agente activo,

h) después de, antes de o conjuntamente con la etapa c) , adición de un agente favorecedor de la fusión, en donde el agente favorecedor de la fusión es un aminoácido de carácter alcalino seleccionado entre arginina, histidina, lisina o citrulina, y opcionalmente de un anión inorgánico u orgánico, y

i) deshidratación de dicha dispersión de lípidos sin la adición de un agente estabilizador de membranas, j) rehidratación con una solución acuosa y formación de unas vesículas multilaminares que tienen un 45 diámetro liposomal medio de más que 1 μm, que encapsulan al agente activo, en el que la etapa de filtración en condiciones estériles se realiza después de las etapas b) y/o c) .

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 6 hasta 7, en el que el lípido comprende por lo menos un lípido neutro, de manera preferible por lo menos dos lípidos neutros.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 6 hasta 8, en el que el agente favorecedor de la fusión 50 es un aminoácido seleccionado entre el conjunto de arginina, histidina, lisina o citrulina.

10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 6 hasta 9, en el que el anión inorgánico u orgánico se seleccionan entre el conjunto de los de succinato, fumarato, citrato, malato, fosfato, acetato y cloruro.

11. Una composición farmacéutica secada por congelación, obtenible por el procedimiento de la reivindicación 6.

12. Una composición farmacéutica obtenible por el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 7 hasta

10.

13. Uso de una composición farmacéutica secada por congelación de una cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 5 u 11 para la producción de una composición farmacéutica destinada al tratamiento de un defecto de hueso y/o de cartílago, de una enfermedad inmunológica, preferiblemente de una osteoartritis, una artritis reumatoide y un trastorno espinal en un individuo, por inyección después de una rehidratación con una solución acuosa de la composición secada por congelación.

14. Uso de una composición farmacéutica secada por congelación de la reivindicación 13, en el que la inyección es una inyección local o no sistémica, de manera preferible dentro de la sinovia, del espacio sinovial, del núcleo 10 pulposo o del espacio del núcleo pulposo, intradiscalmente o transdiscalmente.