Fluido de diálisis peritoneal basado en carbohidratos que comprende residuo de glutamina.

Un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa, que contiene un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina,

- un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina

- un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y

- mezclas de los mismos.

Fluido de diálisis peritoneal basado en carbohidratos que comprende residuo de glutamina.

La presente invención se refiere a un fluido de diálisis peritoneal (en lo sucesivo también llamado "FDP") .

Los fluidos de diálisis peritoneal retiran solutos y agua del paciente urémico. Mediante varias observaciones clínicas y experimentales se ha mostrado que el FDP es citotóxico, asociado con un riesgo de fallo técnico de hasta el 30 % con tratamiento de diálisis peritoneal (DP) (6) a largo plazo. Por lo tanto, el tratamiento de DP prolongado da como resultado frecuentemente daños crónicos graves en la integridad de la membrana peritoneal. La bioincompatibilidad del FDP y la inflamación peritoneal se consideran las principales culpables. La exposición al FDP dificulta el metabolismo celular peritoneal, reduce la proliferación e incrementa la muerte celular, así como altera la organización del citoesqueleto y la señalización celular, incluyendo la regulación de la diferenciación y la inflamación. Lo anterior tiene como resultado procedimientos curativos aberrantes, transdiferenciación epitelial-mesenquimal, neoangiogénesis, fibrosis y esclerosis crónica de la membrana peritoneal (7) . El análisis de muestras de biopsia peritoneal secuenciales de pacientes en DP reveló alteraciones estructurales dañinas. En casos graves, las células mesoteliales se desprenden, el peritoneo se queda al descubierto y se cubre con una capa amoría gruesa de tejido conjuntivo. Estos cambios morfológicos dan como resultado una alteración grave de la función barrera del peritoneo como una membrana de diálisis semipermeable. Hasta un tercio de los pacientes adultos en DP sufrirán fallos técnicos durante el curso del tratamiento debido al fallo de la membrana peritoneal (6) .

Por tanto, la investigación presente actual tiene como objetivo incrementar la biocompatibilidad del FDP y, por consiguiente, reducir el daño en las células mesoteliales durante la DP. De hecho, en varios estudios experimentales y clínicos in vitro e in vivo (7, 10) se ha demostrado que las nuevas y mejoradas formulaciones son menos tóxicas. Se ha demostrado que la adición del antioxidante/secuestrante carnosina (un dipéptido de β-alanil-L-histidina) , o glutatión (gamma-glutamil-L-cisteinil-glicina) y de compuestos relacionados (tales como el profármaco de la cisteína L-2-oxotiazolidina-4-carboxilato) tiene una influencia positiva sobre la biocompatibilidad del FDP y que reduce de forma pasiva el impacto perjudicial de los productos de degradación de la glucosa en la DP (20-22) .

Sin embargo, el principal principio de trabajo del FDP es la eliminación de solutos y agua del paciente urémico debido a su hipertonicidad. Por tanto, es probable que el FDP nunca represente un fluido fisiológicamente inerte o completamente biocompatible y la carga y el drenaje repetidos hacia y desde la cavidad abdominal retendrá siempre alguna citotoxicidad.

Las desventajas mencionadas en lo que antecede se aplican especialmente al FDP basado en carbohidratos. En el FDP "basado en carbohidratos" el técnico experto entiende un fluido de análisis peritoneal basado en glucosa o en oligómeros de glucosa y polímeros de glucosa como agente osmótico. En la presente invención preferentemente se usan FDP basados en glucosa y pueden contener típicamente desde 10 hasta 45 g/l de glucosa (véase el documento EP 1 166 787) . Ejemplos adicionales de FDP basados en carbohidratos se divulgan en los documentos WO 82/03773 Al, US 4.976.683 A, WO 01/02004 Al, US 2003/0232093 Al, EP 1 369, 432 A2, KR 2001/008659, WO 94/14468 Al, WO 99/01144 Al, US 6.077.836 A, WO 95/19778 A l , US 2005/0074485 A l , EP 0 207 676 A2, EP 1 563 858 A1 y WO 93/14796.

Recientemente, se demostró que la citotoxicidad de, especialmente, el FDP basado en glucosa no solamente da como resultado daño celular, sino que activa también una maquinaria endógena hallada en cada célula, las proteínas del choque térmico (HSP) en células mesoteliales en modelos in vitro, ex vivo e in vivo de DP (1-4, 16) . Mientras que los estudios anteriores se centraron en regulación por aumento de las HSP como marcadores de biocompatibilidad del FDP, los datos más recientes han puesto de manifiesto que las HSP protegen células durante la DP experimental (3, 5, 9) .

La sobreexpresión de las HSP dio como resultado la supervivencia de una exposición a FDP usualmente letal en el modelo in vitro de DP y evitó que las células mesoteliales se desprendieran de su revestimiento peritoneal en el modelo in vivo de DP (5, 9) .

Sin embargo, ninguno de los protocolos usados para inducir sobreexpresión de HSP, tales como hipertermia o transfección transitoria, son aproximaciones atractivas en el ámbito clínico de la DP.

Es un objeto de la presente invención proporcionar un fluido de diálisis peritoneal basado en carbohidratos que tiene menos citotoxicidad que los productos conocidos anteriormente. Especialmente, es un objeto de la presente invención proporcionar un fluido de diálisis peritoneal basado en carbohidratos que inhiba el fallo técnico en un paciente en tratamiento de DP optimizando de forma activa las respuestas celulares al estrés patofisiológico tras la exposición al FDP.

La expresión "fallo técnico" es bien conocida por el técnico experto y quiere decir la necesidad de terminar la diálisis peritoneal y de alternar terapias de reemplazo renal tal como la hemodiálisis (6) . Especialmente, la inhibición del fallo técnico incluye etapas para evitar el fallo de la membrana peritoneal y para atenuar la alteración de la función de barrera y de prevenir el desprendimiento de las células mesoteliales.

Este objeto se resuelve mediante un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa que contiene un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina,

-un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, seleccionado preferentemente del grupo que consiste en 5 glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina

-un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y

-mezclas de los mismos.

Adicionalmente, este objeto se resuelve mediante un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina,

-un dipéptido capaz de liberar L-glutamina en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina

-un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y

-mezclas de los mismos

para el uso específico de prevención de fallo de la membrana peritoneal, atenuación de la alteración de la función de 15 barrera y prevención del desprendimiento de las células mesoteliales en un tratamiento de diálisis peritoneal con un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa.

El objeto de la presente invención se resuelve también mediante un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa que comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina,

-un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina

-un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y

-mezclas de los mismos

para el uso específico de prevención de fallo de la membrana peritoneal, atenuación de la alteración de la función de 25 barrera y prevención de desprendimiento de las células mesoteliales.

Sorprendentemente se ha encontrado que la glutamina induce expresión de HSP en células mesoteliales. Además, se ha encontrado que un fluido de diálisis basado en glucosa que contiene L-glutamina, o un dipéptido capaz de liberar L-glutamina en forma libre, tal como glutaminil-alanina y alanil-glutamina, tiene una citotoxicidad más baja que los productos conocidos anteriormente. El uso de dipéptidos que contienen L-glutamina tales como glutaminil-glicina y glicinil-glutamina como precursores de glutamina también es ventajoso.

La glutamina es no tóxica y anteriormente se ha comunicado que participa en la citoprotección incrementando expresión de HSP (14, 18) . In vitro, las dosis farmacológicas de glutamina dieron como resultado mayor unión a ADN de HSF-1 a su promotor, de forma similar a como se ha descrito para la indometacina y otros AINE (11, 12) . Como alternativa, se ha demostrado que los suplementos con glutamina dan como resultado estabilización del ANRm de HSP-72 en condiciones de estrés, incrementando por lo tanto la expresión de HSP (8) . Sin embargo, el uso de glutamina para potenciar la expresión de HSP en células mesoteliales... [Seguir leyendo]

1. Un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa, que contiene un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina, -un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina

-un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y -mezclas de los mismos.

2. Un compuesto seleccionado del grupo que consiste en -L-glutamina, -un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina -un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y -mezclas de los mismos,

para uso en la prevención de fallo de la membrana peritoneal, atenuación de la alteración de la función de barrera y prevención del desprendimiento de células mesoteliales en un tratamiento de diálisis peritoneal con un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa.

3. Un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa que comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste en - L-glutamina, -un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina y alanil-glutamina - un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y -mezclas de los mismos, para uso en la prevención de fallo de la membrana peritoneal, atenuación de la alteración de la función de barrera y prevención del desprendimiento de células mesoteliales.

4. Fluido de diálisis peritoneal de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque dicho oligopéptido está seleccionado del grupo que consiste en alanil-glutamina y glutaminil-alanina.

5. Compuesto para uso de acuerdo con la reivindicación 2 o el fluido de diálisis peritoneal para uso de acuerdo con la reivindicación 3, caracterizado por que dicho oligopéptido está seleccionado del grupo que consiste en alanilglutamina y glutaminil-alanina.

6. Uso de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en -L-glutamina, -un dipéptido capaz de liberar L-glutamina, en forma libre, preferentemente seleccionado del grupo que consiste en

glutaminil-glicina, glicinil-glutamina, glutaminil-alanina, alanil-glutamina -un oligopéptido que consiste en de dos a siete residuos de L-glutamina y -mezclas de los mismos,

para la preparación de un fluido de diálisis peritoneal basado en glucosa para la prevención del fallo de la membrana peritoneal, la atenuación de la alteración de la función de barrera y la prevención del desprendimiento de las células mesoteliales.

Figura 1

Expresión de HSP-72 (% con.)

Liberación de LDH (% con.)

GLN (mmol/l)

Figura 2

GLN (mmol/l) Figura 3

Liberación de LDH (% con.)

Exposición al FDP (120 minutos)

Figura 4

Exposición al FDP (120 minutos) Figura 5

Pérdida de proteínas (mg/dl) CM desprendidas (n.º)

FDP GLN-FDP

Figura 6

FDP GLN-FDP