Desinfección de productos alimenticios.

Un procedimiento de desinfección de ganado que comprende administrar al menos un bacteriófago,

seleccionadodel grupo que consiste en CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) y CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) en una cantidadeficaz a dicho ganado para reducir el número de Campylobacter spp presentes en el tubo digestivo de dicho ganado.

Desinfección de productos alimenticios La presente invención se refiere al uso de bacteriófagos en la desinfección de productos alimenticios y, en particular, pero no exclusivamente, ganado o productos alimenticios contaminados con Campylobacter spp, a un procedimiento5 de uso de dichos bacteriófagos para la desinfección y a bacteriófagos para su uso en dicho procedimiento.

Campylobacter spp. es una causa importante de enfermedad diarreica transmitida por producto alimenticios. La contaminación por Campylobacter spp. persistente de carne de ave es un problema significativo para productores e, igualmente, para minoristas. Se sabe que las aves actúan como reservorio para este patógeno; un porcentaje alto (aproximadamente 60 a 80 %) de aves alojan Campylobacter jejuni en sus tubos digestivos.

En pollos de engorde, las especies de Campylobacter son organismos comensales más que una infección. La colonización del tubo digestivo de aves tiene lugar a una edad temprana, por ejemplo por medio de contaminación de agua de bebida o por el medio ambiente. La transferencia horizontal posterior dentro del recinto de engorde en el que los pollos se guardan es progresiva y rápida, de modo que todo el grupo se infectará antes de su sacrificio.

Las aves se mantienen frecuentemente en ayunas antes de su sacrificio, lo que reduce la eliminación fecal de Campylobacter spp, pero puede dar como resultado niveles superiores en el animal sacrificado. Un objetivo de la presente invención es reducir los niveles de Campylobacter jejuni y/o Campylobacter coli presentes en las aves antes de su sacrificio y presentes en la carne de ave resultante.

En consecuencia, la presente invención proporciona un procedimiento de desinfección de ganado según lareivindicación 1.

Campylobacter spp. son organismos comensales que no afectan al ganado (especialmente aves y animales de caza) ; en consecuencia, la presente invención no está relacionada con el tratamiento de ninguna enfermedad presente en el ganado.

Es una ventaja de la presente invención usar los bacteriófagos para tratamiento de fagos profiláctico, es decir, losbacteriófagos se administran a los pollos antes de su sacrificio con el fin de reducir la cantidad de especies de Campylobacter spp que contaminan la carne de ave y que entran en la cadena alimenticia humana.

Al menos uno de los bacteriófagos es de la familia Myoviridae.

Los bacteriófagos, o cada bacteriófago, pueden administrarse al ganado en un intervalo de entre 102 y 109 ufp/ml-1. Preferentemente, los bacteriófagos se administran al ganado a 105 ufp/ml-1.

El ganado son preferentemente pollos. En particular, el ganado pueden ser pollos de engorde. Alternativamente, el30 ganado se selecciona del grupo que consiste en patos, pavos, cerdos, ganado vacuno, cabras y ovejas.

Los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran preferentemente por vía oral por medio de una solución antiácida y más preferentemente en el agua de bebida del ganado.

Los bacteriófagos o cada bacteriófago pueden administrarse entre 1 y 4 días antes del sacrificio. Preferentemente, los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran 2 días antes del sacrificio.

Campylobacter spp. es preferentemente Campylobacter jejuni.

Alternativamente, Campylobacter spp. puede ser Campylobacter coli.

La presente invención también proporciona un procedimiento de desinfección de productos alimenticios según la reivindicación 11.

Al menos uno de los bacteriófagos es de la familia Myoviridae.

Los bacteriófagos, o cada bacteriófago, pueden administrarse al producto alimenticio en un intervalo de entre 102 y109 ufp/ml-1. Preferentemente los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran al producto alimenticio a 105 ufp/ml-1.

El producto alimenticio es preferentemente carne de ave fresca. Alternativamente, el producto alimenticio puede sercarne de ave congelada.

El producto alimenticio puede seleccionarse también del grupo que consiste en carne de ternero, cordero, pato, pavo, cerdo o cabra, fresca o congelada.

La Campylobacter spp. es preferentemente Campylobacter jejuni. Alternativamente, la Campylobacter spp. puede ser Campylobacter coli.

La presente invención también proporciona el bacteriófago CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) aislado.

La presente invención también proporciona el bacteriófago CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) aislado.

La presente invención también proporciona el uso del bacteriófago CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) aislado como desinfectante según la invención.

La presente invención también proporciona el uso del bacteriófago CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) aislado como desinfectante según la invención.

La presente invención también proporciona un kit según la reivindicación 23.

Opcionalmente, el kit contiene aparatos para administrar el bacteriófago a ganado o producto alimenticios. El5 aparato es preferentemente un dispensador con bomba de pulverización, un aerosol o una pipeta.

Opcionalmente, el kit contiene uno o varios tampones para preparar el bacteriófago. Los tampones o cada tampónse seleccionan preferentemene de un tampón de almacenamiento y un tampón de administración. El tampón de almacenamiento puede comprender NaCl 100 mM, MgSO4 10 mM, Tris 20 mM, pH 7, 4, y gelatina al 0, 1 %.

La presente invención se describirá ahora meramente a modo de ejemplo, con referencia a los ejemplos y la figura10 siguiente, de la que:

La figura 1 (a) es una micrografía electrónica del bacteriófago CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) aislado.

La figura 1 (b) es una micrografía electrónica del bacteriófago CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) .

1. Materiales y procedimientos El procedimiento usado para el aislamiento de bacteriófagos a partir de muestras de ave se desarrolló por 15 modificación de los procedimientos descritos por Gradjewski y col., (1985) y Salama y col., (1989) .

Aislamiento de Campylobacter a partir de heces de pollo, hisopos cloacales y cuerpo de pollos sacrificados para suuso como bacteria huésped para el aislamiento de bacteriófagos.

Campylobacter spp. se aisló a partir de pollos mediante plaqueo directo usando agar CCDA modificado. Las diluciones se realizaron en diluyente de recuperación máxima (MRD; Nº Oxoid CM 733) . Las placas se incubaron a 42 °C durante 48 h en condiciones microaerobias (5 % de oxígeno) . Se confirmó que las colonias eran de Campylobacter spp. porque tenían una morfología de colonia típica, una morfología celular típica (por tinción Gram) y por ser positivas a oxidasa y catalasa. Se realizó un ensayo de hidrólisis del hipurato para distinguir C. jejuni de otras Campylobacter spp.

Preparación de un césped de bacterias huésped para el aislamiento de bacteriófagos Las bacterias huésped para aislamiento de bacteriófagos se cultivaron como céspedes en placas con agar sangre (sangre de caballo desfibrinada al 5 % en base de agar sangre Nº 2) incubadas de forma microaerobia durante 18 ha 42 ºC. Las bacterias se rascaron usando un hisopo estéril y se suspendieron en MgSO4 10 mM helado. Para cada césped, se añadieron 100 μl de suspensión celular a 5 ml de medio de recubrimiento NZCYM líquido (0, 6 % de agar Select en caldo NZCYM) , se mantuvieron a 45 °C y se vertieron inmediatamente sobre un agar NZCYM

precalentado (1, 2 % de agar Select en caldo NZCYM con 10 μg/ml de vancomicina) . Se dejó que las placas se fijaran durante 10 min y después se secaron a 42 ºC durante 30 min puestas boca abajo con las tapas abiertas.Cada muestra para el aislamiento de bacteriófagos se aplicó como una mancha de 10 μl al césped preparado.

Preparación de muestras para el aislamiento de fagos a partir de hisopos con heces/cloacales usando césped de bacterias huésped preparado Una suspensión al 10 % de heces se preparó en tampón SM (NaCl 100 mM, MgSO4 10 mM, Tris 20 mM, pH 7, 4, ygelatina al 0, 1 %) . Los hisopos cloacales se emulsionaron en 2 ml de tampón SM. Después de 24 h de incubación a 4 °C (para permitir la disociación de los fagos) , se centrifugó 1 ml de esta suspensión a 3.000 rpm durante 5 minutos para eliminar residuos. El sobrenadante se transfirió a un tubo nuevo y se centrifugó a 13.000 rpm para eliminar bacterias. El sobrenadante resultante se filtró a través de un filtro de 0, 2 μm para eliminar cualquier bacteria remanente. El filtrado se dispuso después sobre céspedes bacterianos preparados como anteriormente. El filtrado también se dispuso en césped bacteriano de la cepa de C. jejuni permisiva universal PT14 (NCTC 12662) , preparado como anteriormente. Se dejó que la suspensión... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de desinfección de ganado que comprende administrar al menos un bacteriófago, seleccionado del grupo que consiste en CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) y CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) en una cantidadeficaz a dicho ganado para reducir el número de Campylobacter spp presentes en el tubo digestivo de dicho ganado.

2. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 1 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran al ganado en un intervalo de 102 a 109 ufp/ml-1.

3. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 2 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran al ganado a 105 ufp/ml-1.

4. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 en el que el ganado son10 pollos.

5. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 4 en el que el ganado son pollos de engorde.

6. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que elganado se selecciona del grupo que consiste en patos, pavos, cerdos, ganado vacuno, cabras y ovejas.

7. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que los 15 bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran por vía oral por medio de solución antiácida.

8. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran por vía oral en el agua de bebida del ganado.

9. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones precedentes en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran entre 1 y 4 días antes del sacrificio.

10. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 9 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran 2 días antes del sacrificio.

11. Un procedimiento de desinfección de productos alimenticios que comprende administrar al menos un bacteriófago, seleccionado del grupo que consiste en CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) y CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) , en una cantidad eficaz al producto alimenticio para reducir la cantidad de Campylobacter spp en dicho producto alimenticio.

12. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 11 en el que los bacterófagos, o cada bacteriófago, se administran al producto alimenticio en un intervalo de 102 a 109 pfu/ml-1.

13. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en la reivindicación 12 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran al producto alimenticio a 105 ufp/ml-1.

14. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en el que el producto alimenticio es preferentemente carne de ave fresca.

15. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en el que el productoalimenticio es carne de ave congelada.

16. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en el que el producto35 alimenticio se selecciona del grupo que consiste en carne fresca o congelada de ternera, cordero, pato, pavo, cerdo

o cabra.

17. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 16 en el que los bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran a dicho producto alimenticio en forma de aerosol.

18. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17 en el que los 40 bacteriófagos, o cada bacteriófago, se administran antes del sacrificio.

19. Bacteriófago CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) aislado.

20. Bacteriófago CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) aislado.

21. El uso del bacteriófago CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) aislado como desinfectante.

22. El uso del bacteriófago CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) aislado como desinfectante. 45 23. Un kit que comprende:

a) al menos un bacteriófago aislado seleccionado del grupo que consiste en CP8 (Nº de acceso NCIMB 41184) y CP34 (Nº de acceso NCIMB 41185) ; y opcionalmente b) instrucciones de uso del kit.

24. Un kit tal como se ha reivindicado en la reivindicación 23 en el que el kit contiene aparatos para administrar los bacteriófagos, o cada bacteriófago, al ganado o al producto alimenticio.

25. Un kit tal como se ha reivindicado en la reivindicación 23 o 24 en el que el aparato es una dispensador conbomba de pulverización, un aerosol o una pipeta.

26. Un kit tal como se ha reivindicado en la reivindicación 23, 24 o 25 en el que el kit contiene uno o varios tampones para preparar los bacteriófagos o cada bacteriófago.

27. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 en el que Campylobacter spp es Campylobacter jejuni.

28. Un procedimiento tal como se ha reivindicado en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 en el que Campylobacter spp es Campylobacter coli.

Figura 1a Figura 1b