Conjugados del copolímero de ácido metacrílico-hpma-tnp-470 y sus usos.

Una composición que comprende un TNP-470 conjugado con un polímero usando un enlazador,

en dondeel polímero es soluble en agua y tiene un peso molecular en el intervalo de 15 a 40 kDa, en donde elpolímero es un copolímero de hidroxipropil(met)acrilamida-ácido metacrílico, y en donde el enlazadorcomprende por lo menos un enlace peptídico escindible.

Conjugados del copolímero de ácido metacrílico-HPMA-TNP-470 y sus usos En los últimos años, se ha hecho evidente que la angiogénesis, el crecimiento de nuevos vasos sanguíneos capilares de la vasculatura preexistente, es importante no sólo en procesos fisiológicos tales como el desarrollo embrionario, ciclo reproductivo femenino, curación de heridas y regeneración de tejidos y órganos, sino también en procesos patológicos tales como la progresión tumoral y metástasis1. La angiogénesis se reconoce ahora como un proceso crítico para todos los tumores malignos2, 3. Como resultado, la célula endotelial microvascular, que se recluta por los tumores, se ha convertido en un importante segundo objetivo en la terapia del cáncer. Se acepta ampliamente que la célula endotelial objetivo, a diferencia de las células tumorales propiamente dichas, es genéticamente estable1. Los agentes antiangiogénicos han surgido recientemente como una nueva clase de fármacos; sin embargo, aún no se han dilucidado completamente los medios óptimos para usar estos agentes solos o en conjunto con los sistemas de entrega de fármacos y con la quimioterapia convencional.

La hipótesis de que el crecimiento del tumor es dependiente de angiogénesis se apoya en la evidencia biológica y farmacológica 4 y se confirma con la evidencia genética3, 5-7. Ambos tipos de evidencia proporcionan una base científica para las actuales pruebas clínicas de inhibidores de la angiogénesis. La angiogénesis tumoral aumentada4, 8 y niveles elevados de factores proangiogénicos tales como el factor de crecimiento vascular endotelial (VEGF/VPF) 8, 9, factor de crecimiento de fibroblastos básicos (bFGF) 8, e interleuquina-8 (IL-8) 10 se correlacionan con una supervivencia disminuida y el riesgo aumentado de recaída en los estudios de pacientes con tumores sólidos malignos. La importancia de la angiogénesis se apoya además por la observación de que los agentes antiangiogénicos inhiben el crecimiento tumoral en una variedad de modelos animales.

En los Estados Unidos existen actualmente más de 30 inhibidores de la angiogénesis en diversos ensayos clínicos para el cáncer de etapa tardía. Uno de estos inhibidores de la angiogénesis, el O- (cloracetil-carbamoil) fumagilol (TNP-470) , es un análogo sintético de bajo peso molecular de la fumagilina11, un compuesto secretado por el hongo Aspergillus fumigatus fresenius. El TNP-470 es un potente inhibidor endotelial in vitro12. Recientemente, TNP-470 se probó como un potencial nuevo agente anticáncer. En modelos animales, el TNP-470 tiene el más amplio espectro anticáncer que cualquier agente conocido4, 13. El TNP-470 inhibió el crecimiento de tumores murinos hasta 91%, tumores humanos hasta 100% y tumores metastásicos hasta 100% en ratones (revisión en la referencia13) . En la mayoría de los estudios, los ratones se trataron a la misma dosis óptima de 30 mg/kg por vía subcutánea en días alternos. En los ensayos clínicos TNP-470 mostró evidencia de actividad antitumoral cuando se usó como un agente sencillo, con una serie de respuestas objetivas reportadas con tumores malignos recidivantes y refractarios14-16 . Además, se mostró prometedor cuando se usó en conjunto con la quimioterapia convencional17, 18. Sin embargo, muchos pacientes experimentan neurotoxicidad (malestar general, convulsiones raras, astenia, ansiedad y disforia) 16, 17, 19, 20 en las dosis donde se observó la actividad antitumoral. Debido a la neurotoxicidad dosis-limitante, TNP-470 se probó usando múltiples regímenes de dosificación, pero estos intentos de limitar su toxicidad no tuvieron éxito. En pocas excepciones, se observó pérdida de peso o fracaso para ganar peso en animales que recibieron TNP-47021, y dos informes indicaron una disminución en el peso esplénico22, 23. Por lo tanto, modificaciones de TNP-470 que pueden retener o aumentar su actividad mientras que reducen su toxicidad son altamente deseables.

Yashukawa y otros (Investigative Ophthalmology and Visual Science; 1999, Vol. 40 (núm. 11) , páginas 2690-2696) , describen el efecto del TNP-470-conjugado con PVA en la proliferación in vitro de las células endoteliales y sobre la neovascularización coroidea experimental (CNV) in vivo.

Satchi y otros (British Journal of Cancer; 2001, Vol. 85 (núm. 7) , páginas 1070-1076) , describen la terapia de profármaco enzimático dirigida al polímero usando el profármaco polimérico del copolímero N- (2-hidroxipropil) metacrilamida (HPMA) -Gly-Phe-Leu-Gly-doxorrubicina conjugado con PK1 como profármaco modelo, y el copolímero de HPMA-catepsina B como un modelo para la activación del conjugado enzimático.

El documento WO-03/086178-A se refiere a métodos para disminuir o inhibir trastornos asociados con la hiperpermeabilidad vascular y con métodos para tamizar compuestos que afectan la permeabilidad, angiogénesis y estabilizan uniones herméticas.

Sumario de la invención La presente invención se define en y por las reivindicaciones adjuntas. La presente invención se refiere a los conjugados de polímeros solubles en agua y o- (cloracetil-carbamoil) fumagilol (TNP-470) y el uso de estos conjugados como portadores específicos intracelulares del TNP-470 en los vasos del tumor. La presente invención se refiere además al uso de estos conjugados para reducir la neurotoxicidad del TNP-470. El polímero tiene un peso molecular en el intervalo de 15 kDa a 40 kDa.

Los polímeros son copolímeros HPMA. Los copolímeros HPMA son portadores biocompatibles, no inmunogénicos y no tóxicos, que posibilitan la entrega específica en las células endoteliales del tumor superando las limitaciones de las toxicidad asociada con el fármaco (Duncan, y otros, Hum Exp Toxicol, 17:93-104 (1998) ) . Además, su distribución en el cuerpo está bien caracterizada y se conocen por acumularse selectivamente en el sitio del tumor debido al efecto de permeabilidad y retención mejorada (EPR) (Maeda, y otros, J Controlled Release, 65:271-284 (2000) ) . El conjugado puede incluir también una porción de orientación para dirigir el conjugado a los sitios de proliferación de células endoteliales o células de cáncer o a receptores o marcadores específicos asociados con las células proliferación de células endoteliales.

Los datos presentados en la presente descripción demuestran que TNP-470 conjugado con un copolímero HPMA: (i) evita niveles máximos del fármaco en la circulación (ii) evita la penetración de TNP-470 en el líquido cefalorraquídeo y previene así el problema de la neurotoxicidad; (iii) prolonga su vida media; (iv) facilita la acumulación de TNP-470 en los tejidos involucrados con la neovascularización; (v) convierte a TNP-470 en un inhibidor de la angiogénesis altamente eficaz y ampliamente útil. Sorprendentemente descubrimos también que la conjugación de TNP-470 con HPMA resulta en una composición soluble en agua.

La presente invención se refiere además al uso de los conjugados en los métodos para disminuir la neurotoxicidad de TNP-470. La enfermedad angiogénica susceptible al tratamiento con la presente invención incluye pero no se limita a retinopatía diabética, degeneración macular, fibroplasia retrolental, tracoma, glaucoma neovascular, psoriasis, angio-fibromas, inflamación inmune y no inmune, formación capilar dentro de las placas ateroscleróticas, hemangiomas, reparación de herida excesiva, tumores sólidos, metástasis, sarcoma de Kaposi Otros aspectos de la invención se describen infra.

Breve descripción de las figuras La Figura 1A ilustra la estructura del copolímero HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly-etilendiamina-TNP-470. La Figura 1B

- ) de

ی

La Figura 2A muestra la inhibición de la proliferación de BCE in vitro después de 72 h. TNP-470 (-. ) y el copolímero HPMA-Gly-Phe-Leu-Gly -en-TNP-470 (-. ) tuvieron un efecto citostático similar sobre la proliferación de las células endoteliales inducida por bFGF a dosis inferiores a 1 μg/ml y efecto citotóxico a dosis superiores a 1 μg/ml. La línea con puntos (- - -) representa la proliferación de las células BCE inducida por bFGF y la línea sólida () representa la proliferación de células BCE en la ausencia de bFGF. La Figura 2B muestra el anillo aórtico de pollo en el ensayo de germinación endotelial. El efecto de TNP-470 (panel central) y copolímero HPMA-Gly-Phe-Leu-Glyen-TNP-470 (panel derecho) se muestran a 100 pg/ml de dosis equivalente de TNP-470, y un anillo aórtico de pollo control (panel izquierdo) con abundante germinación.

La Figura 3A muestra una representación esquemática del modelo de hepatectomía. Los hígados no tratados se regeneran... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un TNP-470 conjugado con un polímero usando un enlazador, en donde el polímero es soluble en agua y tiene un peso molecular en el intervalo de 15 a 40 kDa, en donde el polímero es un copolímero de hidroxipropil (met) acrilamida-ácido metacrílico, y en donde el enlazador

comprende por lo menos un enlace peptídico escindible.

2. La composición de la reivindicación 1, en donde el enlazador comprende Gly-Phe-Leu-Gly.

3. La composición de la reivindicación 1, que comprende además un ligando de orientación, en donde el 10 ligando de orientación contiene la secuencia tripéptido RGD.

4. La composición de la reivindicación 1, que comprende la estructura:

en donde y está en el intervalo de 0.04-20 y x está en el intervalo d.

8. 99.96.

5. Una composición como la reivindicada en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para usar como un medicamento.

6. Una composición como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para usar en el tratamiento de una enfermedad angiogénica en un mamífero que lo necesita.

7. La composición para el uso de la reivindicación 6, en donde la enfermedad angiogénica es un tumor sólido.

8. Un método que comprende conjugar el TNP-470 a un polímero mediante un enlazador, en donde el

polímero es soluble en agua y tiene un peso molecular en el intervalo de 15 a 40 kDa, en donde el polímero es un copolímero de hidroxipropil (met) acrilamida-ácido metacrílico, en donde el enlazador comprende al menos un enlace peptídico escindible, y en donde se disminuye la neurotoxicidad de TNP-470

9. El método de la reivindicación 8, en donde el producto de la conjugación del TNP-470 con el polímero comprende la estructura:

en donde y está en el intervalo de 0.04-20 y x está en el intervalo d.

8. 99.96.

10. El método de la reivindicación, en donde y es 5-10 y x e.

9. 95.

11. Un conjugado HPMA-TNP-470 que comprende la estructura:

en donde x e.

9. 95 y y es 5-10.