Composiciones y procedimientos para restaurar la sensibilidad al tratamiento con antagonistas de HER2.

Uso de un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 seleccionado del grupo que consisteen un anticuerpo anti-Her2 o fragmento de unión al antígeno del mismo y un inhibidor de quinasa Her2 en cantidadeseficaces para inhibir el crecimiento de células tumorales,

en la fabricación de un medicamento para la inhibición delcrecimiento de células tumorales, en el que dicha célula tumoral expresa HER2.

Composiciones y procedimientos para restaurar la sensibilidad al tratamiento con antagonistas de HER2

Referencia cruzada con solicitudes relacionadas Esta solicitud reivindica el beneficio de las Solicitudes provisionales de los EE.UU. Nº 60/491.536 presentada el 1 de agosto de 2003 y Nº 60/547.791 presentada el 27 de febrero de 2004.

Referencias En la presente memoria se hace referencia a varias publicaciones. Las citas completas de estas publicaciones se proporcionan a continuación.

Antecedentes de la invención Aproximadamente del 25 al 30 % de los pacientes con cáncer de mama sobreexpresan la proto-oncoproteína y el receptor de superficie celular c-erbB2 (proteína receptor del factor de crecimiento epidérmico 2 humana) , también conocido como HER2/neu. La sobreexpresión del oncogén c-erbB2 se ha relacionado con un peor pronóstico y una disminución de la supervivencia para los pacientes. El proto-oncogén HER-2/neu está sobreexpresado en el 20-30 % de los cánceres de mama metastásicos y se asocia con una disminución de la supervivencia y un aumento de la recurrencia de cáncer de mama. HER-2/neu también se sobreexpresa en otros tipos de cáncer incluyendo el cáncer de endometrio, cáncer de riñón, cáncer gástrico y cáncer de próstata. Actualmente, la forma más frecuente de tratamiento para estos pacientes es el uso del anticuerpo monoclonal humanizado trastuzumab, también conocido como Herceptin®.

Herceptin® es un anticuerpo monoclonal humanizado derivado de ADN recombinante que se une selectivamente con alta afinidad (Kd = 5 nM) al dominio extracelular de c-erbB2 en un ensayo basado en células. Ver Science 1985; 230:1132-9 y Cancer Res 1993;53:4960-70. Herceptin® es un anticuerpo IgG1 kappa que se une al HER2 y contiene regiones estructurales humanas con regiones determinantes de la complementariedad de un anticuerpo murino (4D5) . Id. Sin embargo, sólo el 25 % de los pacientes tratados con Herceptin® o con cualquier otro anticuerpo anti-cerbB2/HER2 son sensibles a esta terapia. Se han postulado varios modelos para explicar la resistencia al tratamiento con anticuerpos anti-c-erbB2/HER2. Lo que se necesita son composiciones y procedimientos para la restauración de la sensibilidad al tratamiento con antagonistas de HER2/neu. Lu et al., 2000 (PNAS, 97 (9) :39933998) demuestran que en las células de cáncer de mama ER-, la expresión de PCDGF es elevada y que la inhibición de la expresión de PCDGF por transfección del ADNc antisentido inhibe el crecimiento de células de cáncer de mama humano in vitro e in vivo. Lu et al., 2001 (PNAS, 98 (1) :142-147) demuestran que el PCDGF media en el efecto estimulante del crecimiento de E2 y que el PCDGF estimula la proliferación de las células de cáncer de mama humano MCF-7 y T47D mantenida en ausencia de E2.

Breve resumen de la invención La presente invención se basa, en parte, en el descubrimiento de que un factor de crecimiento autocrino, el factor de crecimiento derivado de células plasmáticas (“PCDGF”) , confiere resistencia a los efectos antineoplásicos de los antagonistas de c-erbB2/HER2 (“HER2”) . Las realizaciones preferidas de la presente invención se exponen en las reivindicaciones. Nosotros proporcionamos composiciones terapéuticas y usos para la restauración de la sensibilidad en las células tumorales resistentes a los efectos antineoplásicos de los antagonistas de HER2 mediante la administración de un antagonista del PCDGF en una cantidad eficaz para estimular o restablecer la sensibilidad a la inhibición del crecimiento de los antagonistas de HER2. Proporcionamos un uso para prevenir la recurrencia del crecimiento tumoral usando un antagonista del PCDGF. La invención proporciona composiciones terapéuticas y usos para inhibir el crecimiento de células tumorales que comprende la administración de un antagonista del PCDGF y un antagonista de HER2 en una cantidad eficaz para inhibir el crecimiento de células tumorales.

También proporcionamos composiciones preferidas que comprenden un antagonista de HER2 y un antagonista del PCDGF. En otra realización, también proporcionamos una composición farmacéutica que comprende un antagonista de HER2, un antagonista del PCDGF y un vehículo farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y seroalbúmina humana) .

También proporcionamos procedimientos para determinar si un paciente es resistente a los efectos antineoplásicos de los antagonistas de HER2, que comprende obtener una muestra biológica que contiene células de un paciente; detectar PCDGF en la muestra biológica y determinar la cantidad de PCDGF en dicha muestra en la que la cantidad de PCDGF es indicativa de resistencia a los efectos antineoplásicos de los antagonistas de HER2.

Breve descripción de los dibujos Las Figura 1A y 1B muestran la secuencia de nucleótidos (SEC ID Nº 1) y la secuencia deducida de aminoácidos (SEC ID Nº 2) , respectivamente, del PCDGF humano.

La Figura 2 muestra un diagrama esquemático de la producción de un transfectante estable (D.c2) de las células MCF-7 que expresaban tanto erbB2 como PCDGF humano. Como control, también se prepararon células transfectadas con el vector pcDNA3 solo (EV.c1) .

La Figura 3A y 3B muestra la región de 19 aminoácidos definida como E19V y la región de 14 aminoácidos definida como A14R, respectivamente, del PCDGF humano.

La Figura 4 resume los estudios patológicos de biopsias de cáncer de mama humano embebidas en parafina. La tinción del PCDGF y de erbB2 se controlaron mediante inmunohistoquímica. La sobreexpresión del PCDGF en las células que también sobreexpresan erbB2 convierte a las células en resistentes a los antagonistas de HER2. Los números de la primera columna (en vertical) y de la primera fila (en horizontal) indican la intensidad de la tinción de ErbB2 y PCDGF, respectivamente, en una escala de 0-3, siendo 3 el nivel de intensidad más alto. La columna 2 indica el número de casos examinados en cada grupo. Las filas 3-4 muestran la distribución de casos en cada nivel de tinción de ErbB2 y PCDGF. Por ejemplo, de los 6 casos que muestran un nivel de intensidad de 2 para la tinción de ErbB2, 2 casos tenían una intensidad de tinción de PCDGF de 0, 3 casos tenían una intensidad de tinción de PCDGF de 1, 1 caso tenía una intensidad de tinción de PCDGF de 2 y 0 tenían una intensidad de tinción de PCDGF de 3. Se sabe que el 25 % de los pacientes con tumores que sobreexpresan erbB2 serán sensibles a la terapia con antagonistas de HER2.

La Figura 5 muestra el resultado del análisis de inmunotransferencia (Western blot) que detecta la banda de PCDGF en los medios condicionados de células D.c2, las cuales sobreexpresan tanto erbB2 como PCDGF, utilizando anticuerpos anti-PCDGF. La banda de PCDGF fue detectada tanto por inmunoprecipitación (IP) como por inmunotransferencia (IM) de los medios condicionados. No se detectó ninguna banda en el control negativo (es decir, el clon erB2.c1 que expresa sólo erbB2) .

La Figura 6 muestra los resultados del análisis de inmunotransferencia, que demuestra la fosforilación de erbB2 en células erbB2.c1 que han sido estimuladas con diferentes cantidades (carril 2: 200 ng/ml, carril 3: 75 ng/ml; carril 4: 0 ng de control) de PCDGF durante 7 minutos. La erbB2 fosforilada se detectó con anticuerpo anti-fosfo erbB2. Como control positivo (carril 1) , las células se incubaron con 10 ng de heregulina.

La Figura 7 muestra los resultados del análisis de inmunotransferencia, que demuestra que PCDGF estimula la fosforilación de erbB2 en otras células de cáncer de mama, BT474 (mostradas aquí) y SKBR3 (véase la Fig. 13) , que se sabe que sobreexpresan erbB2. PCDGF se añadió a 200 ng/ml y heregulina se añadió a 10 ng/ml.

La Figura 8 muestra la respuesta a la dosis de la estimulación de PCDGF de erbB2 en células BT474. PCDGF se añadió a las células a 300 ng/ml, 200 ng/ml, 75 ng/ml y 0 ng/ml (control) y se incubó durante 7 minutos y erbB2 fosforilada (P-erbB2) se detectó por inmunotransferencia utilizando anticuerpos anti-fosfo erbB2. Como control positivo se usaron diez nanogramos de heregulina º1.

La Figura 9 muestra las curvas de crecimiento a largo plazo de las células erbB2.c1 en respuesta a Herceptin®, PCDGF y heregulina, solo o en combinación. Herceptin® inhibe la proliferación de las células que sobreexpresan erbB2. Heregulina y PCDGF hacen que las células pierdan su sensibilidad a los antagonistas de HER2/neu.

La Figura 10 muestra las curvas de crecimiento de las células que sobreexpresan PCDGF y erbB2 con o sin Herceptin y 0, 5 % de CSS. Cuando PCDGF se sobreexpresa en las células que sobreexpresan erbB2 (por ejemplo, células... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Her2 o fragmento de unión al antígeno del mismo y un inhibidor de quinasa Her2 en cantidades eficaces para inhibir el crecimiento de células tumorales, en la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento de células tumorales, en el que dicha célula tumoral expresa HER2.

2. Uso de un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Her2 o fragmento de unión al antígeno del mismo y un inhibidor de quinasa Her2 en cantidades eficaces para prevenir o retrasar la recurrencia del tumor en un paciente con un tumor, en la fabricación de un medicamento para prevenir o retrasar la recurrencia del tumor en un paciente con un tumor, en el que las células de dicho tumor expresan HER2.

3. Un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Her2 o fragmento de unión a antígeno del mismo y un inhibidor de quinasa Her2 en cantidades eficaces para inhibir el crecimiento de células tumorales, para su uso en la inhibición del crecimiento de células tumorales, en el que dicha célula tumoral expresa HER2.

4. Un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 seleccionado del grupo que consiste en un anticuerpo anti-Her2 o fragmento de unión a antígeno del mismo y un inhibidor de quinasa Her2 en cantidades eficaces para prevenir o retrasar la recurrencia del tumor en un paciente con un tumor, para su uso en la prevención el o retraso de la recurrencia del tumor en un paciente con un tumor, en el que las células de dicho tumor expresan HER2.

5. El uso de la reivindicación 1 o 2 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con la reivindicación 3 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 4 para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el anticuerpo anti-PCDGF y el antagonista de HER2 son para co-administración.

6. El uso de la reivindicación 1 o 2 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con la reivindicación 3 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 4 para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el anticuerpo anti-PCDGF y el antagonista de HER2 son para administración simultánea.

7. El uso de la reivindicación 1 o 2 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con la reivindicación 3 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 4 para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el anticuerpo anti-PCDGF y el antagonista de HER2 son para administración secuencial.

8. El uso de la reivindicación 1 o 2 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 3 para el uso de acuerdo con la reivindicación 3 o un anticuerpo anti-PCDGF neutralizante y un antagonista de HER2 de la reivindicación 4 para el uso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el anticuerpo anti-PCDGF se produce a partir de una línea celular de hibridoma seleccionada entre el grupo que consiste en 6B3 como la depositada en la American Type Culture Collection (ATCC) con el número de acceso PTA-5262) , 6B2 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5261) , 6C12 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5597) , 5B4 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5260) , 5G6 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5595) , 4D1 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5593) , 3F8 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5591) , 3F5 (ATCC número de acceso PTA-5259) , 3F4 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5590) , 3G2 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5592) y 2A5 como la depositada con (ATCC con el número de acceso PTA-5589) y 4F10 (ATCC número de acceso PTA-8763) o es un fragmento de unión a antígeno de las mismas.

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